刘成倩 作品数:60 被引量:104 H指数:5 供职机构: 上海市农业科学院 更多>> 发文基金: 上海市科技人才计划项目 上海市科委重大科技攻关项目 上海市科技兴农重点攻关项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
西尼罗河热诊断技术与疫苗研究进展 被引量:3 2015年 西尼罗河热(West Nile Fever,WNF)是由西尼河病毒(West Nile Virus,WNV)引起的一种人畜共患病。WNV属于黄病毒科黄病毒属,为一种单链RNA病毒,经蚊子传播,可引起人类发病,也可引起马、鸟类、猫等动物发病。1937年该病毒在西尼罗河地区的乌干达被发现,因此而得名。此病毒由最初只在非洲地区流行到后来跨越到欧洲、亚洲,直到1999年美国纽约出现人感染事件,引起了世界的广泛关注。2002年此病毒肆虐美洲,约有4000多人在44州遭受感染,284人因此而丧生。 刘成倩 李红 易建中 毛慧 王静 陈磊 孙晓云关键词:西尼罗河热 黄病毒科 疫苗 VIRUS 人畜共患病 RNA病毒 在昆虫细胞中表达西尼罗河病毒prM+E蛋白 2018年 采用PCR技术扩增prM+E基因,将其插入到供体质粒pFast-Bac1中得到重组质粒Pfast-Bac1-W-PE,之后转化大肠杆菌DH10-Bac,构建包含西尼罗河病毒prM+E基因的重组杆状病毒,然后感染正常的sf9细胞,收集感染不同时间段的细胞及上层培养基。结果表明:在感染后的第1天目的基因就得到了转录,同时有少量的重组杆状病毒释放到培养基中;SDS-PAGE和Western-Blot检测结果显示,在43.0ku与66.0ku条带之间,感染细胞裂解液较正常细胞的裂解液多出一条带,该蛋白为WNV完整的E蛋白,而且这一差异蛋白能与WNV兔多抗反应。 刘成倩 李红 陈斌 易建中关键词:西尼罗河病毒 杆状病毒表达系统 猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法的建立和初步应用 被引量:1 2018年 根据Genbank上已报道的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列设计了2对LAMP引物(P-F3/P-B3、P-FIP/P-BIP),通过反转录-环介导等温扩增技术(RT-LAMP)反应条件的优化,建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RT-LAMP检测方法,并通过酶切的方法对阳性结果进行了验证。本方法最低可以检测到反应体系内1pg的PRRSV的RNA,表明本方法具有较高的检测灵敏度;通过在反应中加入SYBR-Green I荧光染料后可以方便地用肉眼对试验结果进行可视化判定。所以,本研究建立的PRRSV的RT-LAMP检测方法能够满足基层临床PRRSV病原的快速检测要求。 孙凤萍 高骏 刘成倩 李红 易建中 姚惠娟关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒 PRRSV 孵化场雏鸡母源抗体及微生物学检测 2017年 优质的雏鸡和高孵化率是孵化场成功的关键,而良好的种蛋和环境卫生又是实现这两个条件的主要保障。本文通过实时检测某孵化场雏鸡母源抗体水平和孵化场水质及空气质量状况,及时了解和制定孵化场合理的免疫程序和卫生监控体制。通过检测发现:该鸡场雏鸡禽流感(H5-6-B和H9-B)和新城疫(ND-7)母源抗体水平较高;水样检测结果为该孵化场无沙门氏菌污染,上孵的孵化器中加湿盘大肠杆菌合格率达92.16%;空气质量检测霉菌污染比较严重,合格率为63.93%。 李红 刘成倩 孙凤萍 高骏 易建中关键词:母源抗体 沙门氏菌 霉菌 免疫复合物疫苗用于鸡新城疫病毒感染的研究 被引量:2 2017年 以鸡新城疫病毒上海株sh09作为抗原,与鸡新城疫卵黄抗体IgY按照一定的比例配置免疫复合物疫苗。用无特定病原鸡进行免疫分组试验,实验分为对照组、灭活苗组、免疫复合物疫苗组3组,每隔1周取鸡测定血凝抑制(Hemagglutination Inhibition,HI)抗体效价。攻毒实验在免疫实验的基础上增加1组常规弱毒苗组。结果表明,制备的复合物疫苗在鸡体内HI抗体效价上升较显著,其免疫效果比常规疫苗好,能很好地应对强毒株的攻击。 刘成倩 李红 易建中 孙凤萍 高骏 姚慧娟关键词:鸡新城疫病毒 免疫效果 禽沙门菌多重PCR检测方法的建立与应用 被引量:3 2019年 沙门菌是重要的人畜共患病原菌,血清型很多。不同种类、不同日龄的家禽均可感染,是严重危害养禽业的病原之一。本文通过血清学、分子生物学方法对上海部分鸡场的沙门菌进行了检测,与传统检测方法相比,缩短了检测时间,提高了检测的特异性和敏感性。实验结果发现禽伤寒/鸡白痢沙门菌、鸡肠炎沙门菌血清学为阳性的,经多重PCR鉴定,发现绝大部分不是禽源性沙门菌,由此可见,沙门菌多重PCR检测为临床诊断提供了一种快速、敏感和特异性高的诊断方法。 李红 刘成倩 孙凤萍 高骏 姚惠娟 易建中关键词:沙门菌 血清学 多重PCR 一例蛋鸡滑液囊支原体的诊断与防治 被引量:2 2018年 鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是引起鸡和火鸡的一种急慢性传染病,主要侵害鸡关节滑液、腱鞘膜和气囊,引起病鸡关节或足垫肿大、滑液囊和腱鞘发炎,也可引起呼吸道疾病及气囊炎。MS可以与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、大肠杆菌等病原微生物混合感染或继发感染。MS感染鸡群不仅能导致跛行、产蛋率下降、生长发育迟缓及胴体等级下降,而且M5感染种鸡可经卵传递,导致蛋孵化率和后代雏鸡成活率明显降低,给养鸡产业带来很大的经济损失。 李红 刘成倩 孙凤萍 高骏 姚惠娟 易建中关键词:鸡滑液囊支原体 产蛋率下降 传染性支气管炎病毒 关节滑液 慢性传染病 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达 被引量:2 2009年 [目的]克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因并在原核表达系统中表达。[方法]根据GenBank上登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计1对引物,用RT-PCR方法扩增出PRRSV的核衣壳蛋白(N)基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,得到重组质粒pGEX-4T-1-N。将重组质粒转化大肠杆菌BL31(DE3)感受态细胞,经TPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测。[结果]PRRSV肺组织所提取的RNA,经RT-PCR扩增,得到一段392 bp的片段,与预期结果一致。SDS-PAGE电泳分析,所得重组蛋白的分子量约39.866 Da,与预期结果相同。重组菌体超声裂解后,经10%的SDS-PAGE电泳分析,结果显示该重组蛋白为可溶性蛋白。[结论]该研究为重组蛋白的纯化奠定了基础。 刘成倩 肖长峰 易建中 关平原 吴双林 陈斌 张天庆关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒 核衣壳蛋白 克隆 鸡传染性支气管炎病毒M基因真核表达载体的构建及免疫效力研究 被引量:1 2017年 从GenBank上下载鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H120型标准株M基因的标准序列,以此标准序列为模板设计合成一对引物。从IBV尿囊液中提取总RNA,采用PCR技术扩增出M基因,将扩增出的目的片段克隆至pMD18-T载体上获得pMD18-IBV-M质粒,通过亚克隆将目的基因连接到经过改造的pEGFP-C1-SCP-SEC载体上,成功构建真核表达质粒pC1-IBV-M。通过间接免疫荧光试验验证了构建的真核载体能在真核细胞内表达,通过动物免疫试验来检测该真核表达载体对动物的免疫保护情况。 孙晓云 刘成倩 易建中 李红关键词:鸡传染性支气管炎病毒 M基因 动物试验 鸡蛋溶菌酶单克隆抗体的制备与鉴定 2021年 为建立一种便捷的鸡蛋溶菌酶定量测定方法,将鸡蛋溶菌酶免疫BALB∕c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2∕0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,制备腹水并纯化,用间接ELISA和Western blot试验方法检测纯化抗体的特异性。结果表明:通过筛选获得1株稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系3E4,其抗体亚型为Ig G2b,细胞培养上清和腹水效价分别达2 560和1.0×10^(6);MAb的特异性鉴定结果显示,该株细胞系所产生的抗体能够特异地与鸡蛋溶菌酶蛋白反应。该抗体的制备为鸡蛋溶菌酶检测方面的研究提供了基础。 李红 刘成倩 严华祥 孙凤萍 高骏 姚惠娟 易建中关键词:鸡蛋 溶菌酶 单克隆抗体 特异性