鲁雅洁
- 作品数：51 被引量：121H指数：7
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“科教兴卫工程”医学重点人才基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程文化科学更多>>
- 斑马鱼胚胎早期发育过程中WFS1基因的时空表达特征分析
- 哺乳动物细胞中WFS1(Wolfram syndrome 1)基因编码一类膜结构的转运蛋白,其主要功能与膜物质运输、蛋白加工和胰岛β细胞的抗凋亡密切相关。WFS1突变可导致在临床上以1型糖尿病、视神经萎缩、双侧重度耳聋和...
- 魏钦俊姚俊鲁雅洁曹新
- 关键词：斑马鱼
- 文献传递
- 人催乳素受体胞外区蛋白的原核表达及纯化
- 2010年
- 目的:建立人催乳素受体的原核表达系统,并在大肠杆菌中获得表达。方法:由RT-PCR获得人催乳素受体(human prolactin receptor,hPRLR)胞外区氨基酸的编码序列,扩增并通过酶切位点修饰后克隆至pMD18-T载体,经测序正确后,切下编码序列连接到重组表达载体pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG诱导重组工程菌表达,使用谷胱甘肽偶联的GSTrapFF柱亲和层析纯化重组蛋白。结果:重组菌株可以表达GST-hPRLR融合蛋白,用免疫印迹反应鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量为37.6×103处有一条带。结论:利用大肠杆菌表达系统获得了较高纯度的GST-hPRLR融合蛋白,为进一步研究催乳素受体的功能和制备特异性的抗体奠定了基础。
- 刘雪瑶鲁雅洁屈芫姚俊魏钦俊曹新冯振卿
- 关键词：融合蛋白原核表达纯化
- 医学院校生物技术专业实验教学体系的改革与实践被引量：4
- 2010年
- 论述了医学院校生物技术专业进行实验教学体系改革的思路,提出新形势下生物技术专业的实验教学必须顺应社会需求,合理定位,体现特色,强化实践。结合教学实践,确立了"点、线、面至立体"的递进式实验教学新体系,并对该教学体系的进一步实施和完善进行了深入探讨。
- 姚俊曹新魏钦俊鲁雅洁
- 关键词：医学院校生物技术专业实验教学
- 基于CRISPR/Cas9技术建立敲除OSBPL2基因的HeLa细胞株被引量：2
- 2016年
- 目的 :利用CRISPR/Cas9技术构建OSBPL2基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法 :设计3个单导向RNA(singleguide RNA,sg RNA),分别靶向OSBPL2基因的第2、3和5外显子,以PGK1.1为载体,构建出3个重组真核表达载体。分别转染HeLa细胞后,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,Cruiser TM敲除检测实验和测序共同检验载体靶向效率。选出靶向效率最高的质粒转染HeLa细胞,进行单克隆细胞培养,最后用Western blot鉴定敲除效果。结果:sg RNA正确插入到PGK1.1载体,靶向第2外显子的重组载体转染HeLa细胞并筛选单克隆后,细胞未检测出OSBPL2蛋白的表达。结论:敲除OSBPL2基因的稳定HeLa细胞株构建成功。
- 陈庆鲁雅洁姚俊魏钦俊曹新
- 关键词：HELA细胞株
- 常染色体显性遗传性听神经病MPZ基因序列分析被引量：2
- 2008年
- 目的:了解MPZ基因是否与1个常染色体显性遗传性听神经病中国家系的发病相关。方法:选择1个现存3代9人的常染色体显性遗传性听神经病家系为研究对象,用基因组DNA抽提试剂盒提取外周血DNA。首先,对所有家系成员DNA进行MPZ基因第3外显子的PCR扩增,扩增产物经纯化后直接测序;然后,采用相同方法对1名家系听神经病患者进行MPZ基因全部6个外显子的PCR扩增和测序分析。测序结果与标准序列对照进行突变检测。结果:所有研究对象的基因区域均扩增成功,序列分析在MPZ基因第3外显子上未检测到Thr124Met和Tyr145Ser 2个已知的突变,整个MPZ基因编码区也未见新的致聋突变。结论:该家系成员MPZ基因上未发现有意义的突变位点,提示新基因参与家系耳聋的发生。
- 周涵徐帅陈智斌鲁雅洁魏钦俊曹新邢光前
- 关键词：听神经病基因突变常染色体显性遗传
- 联合表达microRNAs抑制乳腺癌细胞增殖的载体及其构建方法和应用
- 本发明为联合表达microRNAs抑制乳腺癌细胞增殖的载体及其构建方法和应用，公开了一种核酸构建载体。本发明还公开了核酸构建载体用于制备抑制乳腺癌细胞增殖的组合物方面的应用。本发明还公开了一种真核联合表达载体pEGFPC...
- 魏钦俊曹新秦路洋姚俊鲁雅洁
- 文献传递
- 人肌球蛋白7A基因非同义单核苷酸多态性位点潜在致聋突变的预测分析被引量：4
- 2016年
- 目的:人肌球蛋白7A(MYO7A)基因是遗传性耳聋分子筛查的候选基因之一。从已知的MYO7A非同义单核苷酸多态性(ns SNPs)位点数据库中筛选可能与致病表型相关的ns SNPs位点,以提高MYO7A基因耳聋分子诊断的有效性和准确率。方法:首先,从NCBI数据中心的db SNP数据库(db SNP)和Deafness Variation Database数据库获得MYO7A基因的SNPs数据和基因的相关信息;然后,通过SIFT、Poly Phen-2、PANTHER、Ph D-SNP、Mutation Taster、SNP&GO和Mut Pred软件进行ns SNPs表型致病性分析,预测潜在致病位点;接着,应用Clustal X2和Gene Doc软件进行同源氨基酸序列比对,分析潜在致病的ns SNPs位点保守性;最后,应用Swiss Model平台选择性地对某些突变蛋白质的三维结构进行建模,并分析结构域的变化。结果:预测出MYO7A的104个高风险致病的ns SNPs位点,包括25个已报道的耳聋相关ns SNPs位点;高风险致病的ns SNPs位点中,有42个位于肌球蛋白马达(myosin motor)结构域,其中12个预测有致病风险的ns SNPs位点与MYO7A基因致聋的突变研究报道一致。肌球蛋白马达结构域中包含30个新预测的潜在致病性ns SNPs位点,其中仅L366P位点在7个预测软件中具有高度一致性。通过对L366P位点位点突变前后的三维模型构建,发现存在蛋白结构的改变,且同源性比对结果显示了该位点的高度保守性。结论:MYO7A的L366P为潜在高风险致病性ns SNP位点,推测该基因突变可能与耳聋表型相关。本研究所采用的分析筛选方法对MYO7A基因突变的临床筛查及其他致病基因的ns SNPs筛选具有重要的参考价值。
- 王全鲁雅洁曹新
- 关键词：遗传性耳聋基因型表型
- 反义人DNMT1基因对乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖和细胞周期的影响
- 2010年
- 目的构建表达人DNMT1基因(DNA methyltransferase 1,DNMT1)反义RNA的真核表达质粒,观察其对乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖的影响。方法应用DNA重组技术,将人DNMT1基因的cDNA片段克隆至pcDNA3.1(-)载体中,构建DNMT1反义RNA真核表达质粒,测序验证,将其转染入人乳腺癌细胞系中,利用荧光定量PCR法检测转染前后细胞DN-MT1基因mRNA表达水平的变化;Western blot检测转染后DNMT1蛋白表达变化;应用MTT法检测细胞生长状况,绘制细胞生长曲线;流式细胞术分析细胞周期的变化。结果成功构建出能够表达DNMT1反义RNA的真核表达质粒。转染该质粒后,与未转染组和转染正义质粒组相比,MDA-MB-435s细胞中DNMT1基因mRNA和DNMT1蛋白表达量均显著下降;细胞生长变慢;细胞周期分析可见S期明显减少,而G1/G0期细胞显著增加。结论反义DNMT1能够特异性下调该基因的表达,并抑制乳腺癌细胞的增殖,为乳腺癌基因治疗提供了新的靶标。
- 孙荣斌鲁雅洁魏钦俊
- 关键词：DNMT1基因反义RNAMDA-MB-435S
- 一种两亲性γ-聚谷氨酸纳米药物载体的制备方法
- 本发明公开了一种两亲性γ-聚谷氨酸纳米药物载体的制备方法，即以γ-聚谷氨酸为主链接枝疏水性基团，从而获得一种生物相容性好、可降解的两亲性γ-聚谷氨酸衍生物，在水介质中可自组装形成粒径为200～1000nm的纳米胶束，其疏...
- 姚俊曹新陈宽婷阮文辉魏钦俊鲁雅洁
- 文献传递
- 医学院校生物技术专业实践教学新模式的探索被引量：8
- 2017年
- 文章论述了构建医学院校生物技术专业人才培养模式的思路,提出新形势下生物技术人才的培养必须顺应社会需求,合理定位,体现特色,强化实践。在教学实践中确立了"点、线、面至立体"的递进式实践教学新体系,并对该教学体系下的人才培养模式进行了深入探讨。
- 姚俊魏钦俊鲁雅洁曹新
- 关键词：生物技术专业实验教学
