王靖
- 作品数：19 被引量：23H指数：2
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- 抗人DR5单克隆抗体对白血病U937细胞凋亡的作用被引量：1
- 2008年
- 目的:研究鼠抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对白血病细胞U937的凋亡诱导作用。方法:光镜下观察mDRA-6作用后U937细胞的形态变化;流式细胞术检测U937细胞表面DR5表达率;MTT法检测mDRA-6对U937细胞生长的影响;An-nexinV-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测U937细胞DNA的片段化降解;JC-1单染流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位改变。结果:mDRA-6作用U937细胞后呈现典型的细胞凋亡特征;MTT法检测显示mDRA-6作用U937细胞24小时死亡率为61·09%,并呈时间、浓度依赖性;流式细胞仪检测显示10mg/L的mDRA-6作用4小时,U937细胞凋亡率为79·12%;琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6作用U937细胞后线粒体膜电位明显下降。结论:mDRA-6能够诱导白血病U937细胞凋亡,是具有诱导细胞凋亡活性的功能性抗体。
- 王靖李淑莲马远方刘广超杜耀武王雪银
- 关键词：DR5单克隆抗体白血病细胞凋亡
- 抗人DR5功能性抗体mDRA-6诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的机制被引量：6
- 2009年
- 背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)及其死亡受体的功能性单克隆抗体具有杀伤肿瘤细胞的活性。我们研制了抗人死亡受体5(death receptor,DR5)功能性单克隆抗体(mDRA-6),本研究对其诱导Jurkat细胞凋亡的Caspase分子机制进行初步探讨。方法:mDRA-6作用后,琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞的DNA ladder;MTT法检测细胞存活情况;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析细胞凋亡情况;观察Caspase-10、-9、-8、-3等的抑制剂对mDRA-6诱导细胞凋亡的抑制作用;免疫印迹技术检测凋亡信号蛋白Caspase-10、-9、-8、-3,多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、BH3相关结构域死亡激动剂(BH3interactingdomain death agonist,Bid)、短缩的Bid(truncated Bid,tBid)、细胞色素C(cytochrome c,Cyto C)等活化裂解的情况。结果:琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6对Jurkat细胞具有明显的诱导凋亡作用且呈量-效关系。2.0μg/mL mDRA-6作用Jurkat细胞0.25h、0.5h、1h、2h,其凋亡率分别为16.2%、28.3%、69.2%、78.2%;Caspase-8抑制剂能明显抑制mDRA-6诱导的细胞凋亡,抑制率为77.9%,Caspase-3和Caspase-9抑制剂作用的抑制率分别为54.2%、8.7%,而Caspase-10的抑制剂无抑制作用;免疫印迹技术检测显示Caspase-8、-3、-9均呈现随时间延长酶原逐渐减少、活化片段增加的现象,PARP的降解片段亦增加,Bid激活降解为tbid,Cyto C大量释放,而Caspase-10酶原无明显改变、无活化片段出现。结论:mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡主要是通过激活Caspase路径和线粒体路径来完成的。
- 杜耀武刘广超王靖赵粤萍李淑莲陈居杲蒋祺蔡静马远方
- 关键词：死亡受体5JURKAT细胞细胞凋亡
- 一种中草药工艺品压制装置
- 本实用新型公开了一种中草药工艺品压制装置，包括上压板、固定杆、固定架和底座，所述固定杆上安装有连接轴，所述连接轴上固定有手把，所述上压板中间上方设置有固定螺栓，所述上压板下方固定有移动柱，所述移动柱外侧覆盖有复位弹簧，所...
- 王洋王倩夏玉莲王照寒李亚锦杨艳芳王靖饶晨阳杨凡周欣付月盈
- 文献传递
- JNK信号传导通路在抗人DR5单克隆抗体mDRA-6诱导白血病细胞凋亡中的作用
- 2009年
- 目的:探讨JNK信号传导通路在抗人DR5单克隆抗体mDRA-6诱导白血病细胞Jurkat和U937凋亡过程中的作用。方法:MTT法检测mDRA-6对Jurkat和U937细胞的生长抑制作用;以Caspase抑制剂Z-VAD-FMK和JNK抑制剂SP600125进行干预,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析Jurkat和U937细胞凋亡;利用免疫印迹技术检测mDRA-6作用下凋亡细胞的JNK蛋白的表达情况。结果:mDRA-6对Jurkat和U937细胞具有明显的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测显示,10μg/ml的mDRA-6作用Jurkat和U937细胞3小时,其凋亡率分别为62.62%和35.65%,JNK抑制剂干预后细胞凋亡明显增加;免疫印迹技术检测显示,mDRA-6作用细胞5分钟后JNK即呈现活性片段表达,并随作用时间的延长其活性增强,而Caspase全抑制剂干预后,5、15分钟JNK磷酸化增强,但随后随时间递减。结论:mDRA-6抑制Jurkat和U937细胞生长并诱导其凋亡,其凋亡过程中有JNK的激活并发挥抗凋亡作用。
- 蔡静李淑莲王靖王赟袁艳军蒋祺秦方园马远方
- 关键词：JNK白血病细胞凋亡
- 抗人DR5单克隆抗体诱导HL-60细胞凋亡机制
- 2012年
- 探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)诱导白血病细胞系HL-60细胞凋亡的可能机制。MTT法检测mDRA-6对HL-60细胞的生长增殖的影响,以及Caspase 8、10、3抑制剂对mDRA-6抑制HL-60细胞生长增殖的影响;琼脂糖凝胶电泳检测HL-60细胞DNA片断化降解;Western blot检测mDRA-6对HL-60细胞Caspase 8、10、3的激活改变。结果发现,mDRA-6呈时间、浓度依赖性地抑制HL-60细胞的生长增殖,10 mg/L的mDRA-6作用HL-60细胞6 h、8 h和10h,细胞增殖抑制率分别为23.96%、44.10%和50.28%;琼脂糖凝胶电泳显示,10 mg/L的mDRA-6作用6 h,HL-60细胞呈现凋亡细胞特有的DNA梯形条带;Western blot检测结果发现,mDRA-6作用HL 60细胞不同时间,Caspase 8均只有酶原条带出现,无激活片段产生,而Caspase 10和Caspase 3显示明显裂解片段产生,并随mDRA-6作用时间延长而增多;预先使用15μmol/L的Caspase 10及Caspase 3抑制剂孵育细胞1 h,能够使mDRA-6对HL-60细胞的生长抑制率分别降低64.15%(t=10.13、P<0.01)和53.69(t=8.93、P<0.01)%,而预先使用15μmol/L的Caspase 8抑制剂孵育细胞1 h,mDRA-6对HL-60细胞的生长抑制率仅降低4.40%(t=0.52、P>0.05)。以上实验结果提示,mDRA-6通过激活Caspase 10启动凋亡信号分子,诱导白血病HL-60细胞凋亡。
- 李淑莲王赟张舒曼王靖
- 关键词：死亡受体5单克隆抗体凋亡半胱天冬酶
- NF-κB在抗人DR5抗体诱导白血病细胞系凋亡中的作用被引量：2
- 2010年
- 观察NF-κB在抗人DR5抗体mDRA-6诱导白血病细胞凋亡中的激活,探讨NF-κB在抗人DR5抗体诱导白血病细胞凋亡中的作用。提取细胞蛋白,间接ELISA法检测NF-κB的激活;预先应用NF-κB抑制剂孵育细胞1h,MTT及流式细胞术检测mDRA-6对白血病Jurkat和U937细胞系的凋亡率。结果:mDRA-6作用Jurkat和U937细胞15min,激活形式NF-κB(NF-κBP65)明显增高;10mg/L的mDRA-6作用Jurkat和U937细胞4h,流式细胞术检测细胞凋亡率分别为56.63%和34.14%,而预先用15μmol/L的NF-κB抑制剂处理细胞1h,mDRA-6所致的Jurkat和U937细胞凋亡率分别增加至75.51%和58.01%。mDRA-6诱导白血病Jurkat和U937细胞凋亡过程中激活NF-κB,激活的NF-κB抑制mDRA-6的肿瘤细胞凋亡诱导作用。
- 李淑莲王靖王赟蔡静马远方
- 关键词：核因子ΚB凋亡白血病细胞
- 内镜下鼻胆管引流术42例护理总结
- 2008年
- 李秋波胡秀赟王靖
- 关键词：鼻胆管引流护理
- 交联抗人DR5单抗诱导的Jurkat细胞凋亡的信号转导
- 2007年
- 目的探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗——YM366EC对Jurkat细胞增殖的影响,闸明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制。方法MTT方法检测抗体对Jurkat细胞存活率,FITC-Annexin V/PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响。交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12 h收集细胞,提取蛋白Western blot检测Bcl-2、Cyt-C、Caspase-8、Caspase-3、Bax、Caspase-9的变化。结果抗DR5抗体单独应用不能抑制高表达DR5分子的Jurkat细胞增殖,但应用抗小鼠IgC交联DR5抗体后可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变。并且Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax,有活性的Caspase-8、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达增加。结论交联抗DR5抗体YMB66EC对Jur- kat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、Caspase-8、Caspase-3、Caspase-9。
- 白慧玲杜耀武王雪银李淑莲王靖刘广超马远方
- 关键词：交联JURKAT细胞凋亡
- 交联抗DR5单抗YM366EC诱导的Jurkat细胞凋亡机制探讨被引量：1
- 2007年
- 为探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号转导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制。观察了交联366EC对Jurkat细胞的形态变化,细胞增殖和细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测YM366EC作用于Jurkat细胞不同时间Bcl-2、Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9的表达变化。结果发现DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,形成凋亡小体,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bel-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的Caspase 3和Caspase 9蛋白的表达增加。结果表明交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9。
- 白慧玲杜耀武王雪垠李淑莲王靖刘广超马远方
- 关键词：交联JURKAT细胞凋亡流式细胞术免疫印迹
- 抗人DR5单克隆功能抗体mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡的Caspase路径机制研究被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨抗人死亡受体5(DR5)功能性单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞诱导凋亡的Caspase分子机制。方法:琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6作用后Jurkat细胞的DNA ladder;MTT法检测单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞生长抑制作用的剂量-效果关系;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析mDRA-6对Jurkat细胞的凋亡作用;观察Caspase-10、9、8、3等抑制剂对mDRA-6诱导细胞凋亡的抑制作用;免疫印迹技术检测凋亡信号蛋白Caspase-10、9、8、3、Bid(tbid)、Cyto c等活化裂解的情况。结果:琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6对Jurkat细胞具有明显的生长抑制作用且呈量-效关系,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测显示,mDRA-6在2.0μg/ml浓度作用Jurkat细胞0.25、0.5、1、2小时,其凋亡率分别为16.17%、28.25%、69.23%、78.23%;Caspase-8抑制剂能明显抑制mDRA-6诱导的细胞凋亡,抑制率为77.85%,Caspase-3和Cas-pase-9抑制剂的抑制率分别为54.20%、8.74%,而Caspase-10的抑制剂无抑制作用;免疫印迹技术检测显示Caspase-8、3、9均呈现随时间延长酶原逐渐减少、活化片段增加的现象,Bid激活降解为tbid,Cyto c大量释放,而Caspase-10酶原无明显改变、无活化片段出现。结论:mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡主要是激活了死亡受体信号传导途径上游的Caspase-8引起的,该细胞凋亡机制涉及Caspase-3、Caspase-9及Bid(tbid)、Cyto c等分子,而同样是凋亡的上游信号Caspase-10没有参与此凋亡过程。本研究为mDRA-6的人源化改造及后续的实验研究打下了基础。
- 杜耀武刘广超王靖赵粤萍李淑莲蒋祺蔡静马远方
- 关键词：死亡受体5功能性抗体JURKAT细胞细胞凋亡
