徐蕙
- 作品数：14 被引量：40H指数：4
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪β干扰素基因的修饰及其蛋白活性的检测被引量：1
- 2010年
- 为获得高效表达的重组猪β干扰素,在保留编码蛋白序列的同时,对PoIFN-β基因进行毕赤酵母偏嗜性改造,使基因序列G+C的含量增加到最大限度,并将其终止密码子改为TAA。构建了酵母表达载体pPICZαC-PIB。pPICZαC-PIB经SacⅠ酶切线性化后电转导入毕赤酵母菌株X-33。对PCR鉴定为阳性的酵母菌株进行高抗性筛选,获得1株高效表达PoIFN-β酵母菌株,其表达量约258.3 mg/L,是未经密码子改造菌株表达产物的3.4倍。经SDS-PAGE和Western blotting检测,表达产物为相对分子质量约22 000和24 000的蛋白,两者均可与抗PoIFN-β阳性血清发生特异反应。将表达产物进行氨基酸测序,测得2段随机肽段与PoIFN-β的氨基酸序列完全一致。在VSV-Vero系统上检测重组PoIFN-β对水泡性口炎病毒在Vero细胞中增殖的抑制作用,其抗病毒活性为1.88×106IU/L,是未经密码子改造菌株表达产物抗病毒活性的5.6倍。用MTT法检测PoIFN-β对猪外周血淋巴细胞成熟的影响,结果表明,猪重组PoIFN-β能有效刺激淋巴细胞转化,具有良好的免疫学活性。
- 徐蕙朱艳平刘京军刘德辉郭霄峰
- 关键词：基因修饰毕赤酵母抗病毒活性MTT
- 狂犬病毒分离株糖蛋白基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2010年
- 为分析狂犬病毒(RV)分离株糖蛋白基因之间的差异,本研究采用RT-PCR的方法扩增由广东某地临床表现正常犬的唾液中分离的RV(GD33)分离株的G基因,将其克隆、测序后与国内外部分毒株相应基因进行核苷酸序列比较,结果表明,该分离株与其他毒株相比核苷酸同源性为94%～97.1%;氨基酸同源性为97%～99.2%。而GD33分离株与HEP-Flury株在跨膜区、膜内区有很高的一致性;另外,GD33分离株与HEP-Flury和FluryLEP株在333位点出现精氨酸被取代的现象,证实GD33分离株这2个疫苗株没有显著差异,对监控我国狂犬病疫情具有一定的意义。
- 江飙郑佳琳梁红茹徐蕙郭霄峰
- 关键词：狂犬病毒糖蛋白基因
- 猪α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达和下游工艺的研究被引量：2
- 2010年
- 通过小量发酵、摇瓶发酵、大量发酵,研究猪α-IFN在毕赤酵母中表达的下游工艺,微量细胞板法测猪α-IFN体外抗VSV、PRRSV、TGEV的活性。猪α-IFN抗VSV的活性达到4.04×10^6I U/L,在PK15上抗TGEV的活性为10^7-10^8I U/L,在Marc 145上抗PRRSV的活性为10^6-10^7I U/L。30℃诱导培养96 h、甲醇添加1%、pH值6.0、DO20%、0.25%-0.4%甲醛灭活,获得高活性的、安全的IFN。仔猪免疫后临床症状正常,未出现病理学变化。猪α-IFN体外抗病毒活性高,发酵后的抗病毒活性未下降,免疫动物未产生临床症状和病理变化,可用于临床治疗病毒性疾病。
- 朱艳平徐蕙陈裕华郭霄峰
- 关键词：体外抗病毒发酵
- 狂犬病毒HEP-Flury株基质蛋白的原核表达及纯化被引量：2
- 2010年
- 为原核表达狂犬病毒(RV)基质蛋白(M),本研究以RV的HEP-Flury株全长重组质粒为模板扩增M基因,双酶切后定向克隆至原核表达载体pQE30,构建重组质粒pQE-M并转化至宿主菌E.coli M15(pREP4),在IPTG的诱导下表达。SDS-PAGE电泳分析显示M蛋白为25ku。Western blot检测证明,重组蛋白可被鼠抗His单克隆抗体及鼠抗狂犬病毒多克隆抗体特异识别。本研究为狂犬病诊断方法的建立奠定了基础。
- 江飙郑佳琳邝贞结梁红茹徐蕙郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒基质蛋白原核表达
- 丝状真菌异源蛋白高效表达的研究进展被引量：5
- 2010年
- 丝状真菌作为细胞工厂在生物技术领域被广泛应用于生产药物、化学试剂和酶类。近年来,丝状真菌基因组学领域取得了快速发展,利用丝状真菌表达异源蛋白也越来越受到重视。本文从基因表达与调控、蛋白质分泌途径及丝状真菌菌株等方面对丝状真菌高效表达异源蛋白的最新研究进展作一综述。
- 刘德辉黄毓茂徐蕙
- 关键词：丝状真菌基因组学蛋白质分泌异源蛋白
- 蝉新型抗菌肽Cryptonin在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定被引量：3
- 2010年
- 根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法合成改造后的Cryptonin基因片段。基因克隆到pPICZα-C质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pPICZα-C-Cryptonin。pPICZα-C-Cryptonin通过限制性内切酶SacⅠ酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞X-33内。PCR检测Cryptonin基因与毕赤酵母染色体稳定结合,Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子。在AOX(醇氧化酶)启动子调控下,Cryptonin蛋白获得分泌表达,其相对分子质量约为2700。表达产物耐热性强,在100℃条件下10min内抗菌活性不变,煮沸30min以上仍具有活性。琼脂糖孔穴扩散法检测显示表达产物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有很好的抑菌活性。
- 刘德辉焦颖徐蕙吴锋张春红黄毓茂
- 关键词：基因设计分泌表达抑菌活性
- 抗菌肽的生物活性及在畜牧生产中的应用前景被引量：10
- 2009年
- 近年来,由于抗生素的滥用而不时地引起耐药菌的出现,而且出现的频率超过新型抗生素的开发速度,以至于给感染性疾病的治疗带来诸多新的问题。抗菌肽作为传统抗生素的可能替代物以其无比优越的特性越来越成为人们关注的热点。本文综述了抗菌肽的分类与特征、生物活性,并阐述了抗菌肽在畜牧业的应用前景。
- 刘德辉徐蕙黄毓茂
- 关键词：抗菌肽生物学活性
- 猪β-干扰素的研究进展被引量：1
- 2009年
- 干扰素是由干扰素诱生剂诱导生物细胞所产生的一类高活性多功能的糖蛋白,干扰素自被发现以来,由于其广谱抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用而受到研究者们的重视。在其基因结构、作用机理及体外重组表达等方面都取得了巨大突破。作者综述了猪β-干扰素的基本特性、作用机理及其临床应用。
- 徐蕙刘德辉郭霄峰
- 一例兔巴氏杆菌病的诊断被引量：5
- 2010年
- 2009年11月,华南农业大学兽医学院某教研室饲养的用于制备高免血清的试验兔发生死亡,通过对病死兔进行病理解剖、组织涂片检查、细菌分离培养、生化试验和动物回归试验,确诊为兔巴氏杆菌病。
- 郭慧霞徐蕙王永锋琚春梅
- 关键词：巴氏杆菌病
- 蝉抗菌肽基因密码子优化及其毕赤酵母表达载体构建被引量：1
- 2009年
- 根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法合成改造后的抗菌肽Cryptonin基因片段。基因克隆到pGAPZα-A质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pGAPZ-αA-Cryptonin。经酶切分析、PCR和测序鉴定证明载体构建成功。表达载体的正确构建为Cryptonin的高效表达和生物学活性研究奠定基础。
- 刘德辉黄毓茂徐蕙焦颖
- 关键词：密码子优化
