孟繁荣 作品数:66 被引量:193 H指数:8 供职机构: 广州市胸科医院 更多>> 发文基金: 广州市医药卫生科技项目 广州市科技计划项目 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
中国氟喹诺酮耐药结核分枝杆菌gyr基因序列特征分析 被引量:4 2020年 目的明晰我国氟喹诺酮类药物耐药结核分枝杆菌株gyrA、gyrB基因突变的分子特征。方法以检索式"quinolones resistance AND Mycobacterium tuberculosis AND(China OR Hong Kong OR Tai Wan OR Macon)"和"结核AND喹诺酮耐药"分别在英文数据库(pubmed、Embase、SciFinder)和中文数据库(万方、中国知网、中国生物医学文献服务系统与维普期刊资源服务平台)中检索有关我国结核分枝杆菌喹诺酮类药物耐药基因突变的研究文献,对符合纳入标准的文献中氟喹诺酮耐药基因gyrA、gyrB进行突变位点和氨基酸变化类型等计数资料的信息提取和分析。结果 32篇外文和23篇中文文献纳入研究,3 641株氟喹诺酮类耐药结核分枝杆菌的gyrA基因得到分析,其中1 958株同时分析了gyrB基因。3 641株耐药菌中,2 830株检测到gyrA基因突变(突变率为77.73%),共47种突变类型,均为氨基酸错义突变,其中单位点、双位点突变的发生率分别为75.83%和1.92%,94、90、91位密码子突变率分别为49.33%(1 796/3 641)、19.14%(697/3 641)、5.80%(211/3 641),出现频率最高的突变类型依次为Asp94Gly、Ala90Val、Asp94Ala、Asp94Asn、Ser91Pro、Asp94Try;1 958株耐药菌中,175株发生gyrB基因突变(突变率为8.94%),其中56株的29个突变类型为gyrB单基因突变,其余119株36种突变类型与gyrA基因突变共同发生,占gyrB序列突变的68%。结论我国结核分枝杆菌氟喹诺酮耐药株gyrA基因突变以94、90、91位密码子单位点突变为主;gyrB基因突变位点较为分散,常与gyrA基因突变伴随发生。 孟繁荣 杨瑜 雷杰 王楠 李华 谢贝 邓丽 牛群 竺澎波 高俊文 刘志辉关键词:结核分枝杆菌 氟喹诺酮耐药 GYRA GYRB 血清中相关细胞因子表达水平变化对肺结核治疗效果的评估 被引量:10 2022年 目的分析血清中相关细胞因子表达水平变化在肺结核治疗效果评估中的检验效能。方法分别收集肺结核患者治疗前和治疗2月时血清,通过流式细胞术测量其中白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12P70、IL-17、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ和IFN-α的表达水平。同时影像学监测病灶变化情况,较治疗前,治疗2月时病灶无变化及增大为无效组,病灶吸收为有效组。受试者工作曲线分析血清中各细胞因子治疗2月与治疗前浓度的比值(Ratio值)区分肺结核治疗无效和有效的界值和检验效能。进一步将不同细胞因子串联或并联后,分析其组合后的检验效能。结果(1)无效组和有效组患者的年龄和性别差异无统计学意义。总体而言,肺结核患者治疗两月后血清中IL-6、IFN-γ表达水平较治疗前降低,差异具有统计学意义(P=0.020、0.023),IL-10表达水平较治疗前升高,差异具有统计学意义(P=0.011)。有效组治疗两月后肺结核患者血清中IL-6表达水平较治疗前降低,差异具有统计学意义(P=0.033)。(2)TNF、IL-17、IL-1β、IL-4、IL-6、IFN-γ、IL-12P70、IFN-α和IL-8的Ratio值在判断肺结核治疗无效时的敏感度>80%,但特异度较低;IL-5和IL-10的Ratio值在判断肺结核治疗无效时的特异度>80%,但敏感度较低。(3)IFN-γ、IL-17和IFN-α三种细胞因子串联组合后,在判断肺结核治疗无效时的灵敏度84.00%,特异度70.97%,准确度76.79%;IL-6和IFN-α两种细胞因子串联组合后,在判断肺结核治疗无效时的灵敏度80.00%,特异度67.74%,准确度73.21%。结论对比治疗前,肺结核患者治疗2月后血清中部分细胞因子表达水平的变化有用于抗结核治疗效果监测的潜力。 李华 许婉华 龚兰 谢贝 杨瑜 刘志辉 吴玲 孟繁荣 王楠 王琪 张言斌关键词:肺结核 细胞因子 直接检测痰标本中MPB64蛋白在结核病诊断中的临床应用价值 被引量:5 2010年 目的:探讨直接检测痰液标本MPB64蛋白作为结核病快速诊断方法的可能性。方法:对65例肺结核病患者和72例非结核病患者的痰液标本同时进行痰涂片染色抗酸菌检查、实时荧光定量PCR检测结核杆菌DNA和免疫胶体金法检测MPB64蛋白,比较分析3种方法的检测结果,并依据临床诊断对MPB64蛋白检测结果进行诊断方法学评价。结果:MPB64蛋白检测法与涂片染色、荧光定量PCR检测结果的符合率均为60.58%;MPB64蛋白检测的敏感度、特异度、准确度分别为58.46%、69.44%和64.23%,其敏感度显著高于涂片染色法的27.69%与荧光定量PCR法的35.38%,但其特异度和准确度则低于涂片染色法(100%、65.69%)与荧光定量PCR法(98.61%、68.61%)。结论:采用免疫胶体金法直接检测痰液标本中MPB64蛋白对结核病的诊断具有较高的敏感度,可以作为筛查检测手段;但特异度相对较低,可否作为一种结核病快速诊断方法值得进一步研究。 孟繁荣 谢贝 郑小凌 尹小毛 蔡杏珊 许婉华 彭湘明 赖艳榕 刘志辉关键词:结核 MPB64 异烟肼敏感与耐药结核杆菌临床分离株培养滤液蛋白比较分析 被引量:1 2014年 目的:寻找异烟肼耐药结核杆菌特异性分泌蛋白。方法应用弱阳离子交换蛋白质芯片( WCX2)捕获并应用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱( SELDI-TOF-MS)技术对1株异烟肼单耐药结核杆菌和1株异烟肼敏感结核杆菌临床分离株7天及14天Middlebrook 7H9培养滤液蛋白进行比较,描述性分析其差异。结果在异烟肼敏感和异烟肼单耐药结核杆菌株7天及14天Middlebrook 7H9培养滤液中分别检测到164、175、133、147种蛋白质/多肽,其相对分子量(依质荷比m/z而得)范围分别为982~9328、997~9327、1050~8903、996~9369,表达丰度(通过质谱峰面积计算)分别为17~2100、21~1943、60~5355、41~3267;异烟肼单耐药结核杆菌株与异烟肼敏感结核杆菌株相比较,7和14天培养滤液分别存在47与58种差异蛋白质/多肽,这些差异蛋白质相对分子量在1083~8812、1012~9327之间,表达丰度在76~1811、25~3010之间。结论异烟肼敏感结核杆菌和耐药结核杆菌液体培养早中期滤液蛋白质存在差异,但是否为异烟肼耐药结核杆菌特异性分泌蛋白则有待进一步证实。 曹翌明 孟繁荣 谢贝 蔡杏珊 黄业伦 牛群 雷杰 高俊文 谭耀驹 刘志辉关键词:结核杆菌 异烟肼 4种蛋白质/多肽在结核病患者与健康人血清中的表达和意义 2014年 目的:评价质荷比(m/z)分别为1 060、1 944、2 081和3 954的4种血清蛋白质/多肽(以下分别用A、B、C和D表示)区分结核病患者与健康人的能力。方法:应用表面增强激光解析-电离飞行时间质谱技术检测57例结核病患者和30例健康人的血清蛋白质谱,分析其A、B、C、D中的表达水平(用相对强度表示)并比较其差异,并应用诊断性试验评价方法分析其区分结核病患者群与健康人群的能力。结果:(1)A、B、C、D在结核病患者和健康人中的表达水平分别为1±11、1 597±3 102、460±765、1 208±1 003和123±201、47±98、36±93、397±355,两者差异显著。(2)以A、B、C、D血清表达水平为指标判定结核病患者和健康人的ROC曲线下面积分别为0.644、0.848、0.735和0.810,分界值分别为≤166、≥318、≥48和≥728。结论:B、C和D 3种血清蛋白质/多肽具有较好的区分结核病患者与健康人的能力,有望作为新型结核病诊断候选标志物。 刘志辉 刘玉美 孟繁荣 谢贝 王楠 邓晓华 吴玲 张言斌 谭守勇关键词:结核病 培养滤液MPT64抗原检测结核分枝杆菌复合群生长的效能分析 被引量:2 2012年 目的评价以培养滤液MPT64抗原作为结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)生长指示实验(简称"MPT64检测法")的检测效能,为建立新型结核分枝杆菌培养方法提供科学依据。方法对799例应用BACTEC MGIT 960分枝杆菌快速培养仪器法(简称"仪器法")进行分枝杆菌培养的培养液在培养的第42天进行MPT64检测,对1265例每隔7d(即培养第1~6周末)进行1次MPT64检测,以出现阳性检测结果或第42天为检测终点,并和仪器法比较。应用χ2检验统计分析所有样本(2064例)的检测结果,分析MPT64检测法的准确度;对1265例监测样本应用t检验分析MPT64检测法的快速性。结果 (1)在2064例分枝杆菌培养的临床样本中,仪器法报告298例MTBC、108例非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria,NTM)、1521例培养阴性及137例污染(后三者即无MTBC生长),其中分别有279、6、0、2例MPT64检测阳性(即有MTBC生长),两者间差异无统计学意义(χ2=0.12,P=0.742);与仪器法的总体一致性为98.69%(2037/2064);对仪器法报告为MTBC者MPT64检测法的阳性率为93.62%(279/298),具有较高的阳性符合水平。(2)在每周进行MPT64监测的1265例培养液样本中,两种方法均检测到MTBC者168例。其中:仪器法在培养1~6周报告阳性率分别为25.60%(43/168)、66.67%(112/168)、92.26%(155/168)、98.21%(165/168)、98.81%(166/168)和100.00%(168/168);MPT64检测法的阳性检出率则分别为17.26%(29/168)、61.90%(104/168)、89.88%(151/168)、95.24%(160/168)、98.81%(166/168)和100.00%(168/168)。两者阳性报告时间差异无统计学意义(t=1.68,P=0.366)。结论MPT64检测法具有准确、快速、简便的特点,值得在临床中推广应用。 许婉华 黄业伦 刘燕文 胡丽环 罗少珍 孟繁荣 刘志辉关键词:分枝杆菌 结核 细菌 细菌蛋白质类 细菌学技术 以居住地域为基础的广州地区结核病传播链分子流行病学初探 被引量:1 2020年 目的探讨MIRU-VNTR基因分型技术用于分析广州地区结核病传播关系的可行性。方法以结核患者居住地所属乡镇村组或社区街道相同为前提,假定居住所属地相同结核患者间存在传播关系,拟定广州地区结核病传播链。培养结核分枝杆菌临床分离株并提取DNA,通过PCR扩增进行29位点MIRU-VNTR基因分型分析,并计算HGDI分辨力指数。以基因型成簇与否评价传播链内结核患者间传播关系的有无。结果拟定了178条广州地区结核病传播链,复苏得到456株结核分枝杆菌临床分离株,提取获得其基因组DNA并扩增了29个VNTR位点,其组合HGDI分辨力指数为0.986。基因成簇性分析显示,有2条传播链内患者结核分枝杆菌临床分离株基因成簇,成簇率为1.10%。基因成簇性的2条传播链患者分别居住于同街道,发病时间间隔在2年以内,分别为9和14个月。结论29位点MIRU-VNTR基因分型技术可用于广州地区结核分枝杆菌基因型分析,能否用于结核病传播关系需要进一步深入研究。 竺澎波 王楠 孟繁荣 杨瑜 雷杰 牛群 谢贝 吴玲 李华 刘志辉 刘文关键词:结核 结核分枝杆菌 传播链 不同耐药型的结核分枝杆菌hspX基因序列与表达的比较 2023年 目的比较不同耐药型的结核分枝杆菌(MTB)热休克蛋白基因hspX序列与表达,初步探讨hspX与MTB的耐药是否存在相关性。方法选取4种一线抗结核药物全部敏感株(S)、同时对异烟肼和利福平耐药(MDR)和一种耐药[单耐利福平(MTB^(R+))、单耐异烟肼(MTB^(H+))、单耐链霉素(MTB^(S+))和单耐乙胺丁醇(MTB^(E+))]的菌株各10株,采用改良的十二烷基苯磺酸钠裂解法和TRIzol法分别提取各组菌株的DNA和RNA,使用特异性引物进行PCR和实时荧光定量PCR确定hspX基因的存在及其表达。对PCR产物进行测序以检查正向和反向的多态性,并用DNAman软件进行与标准株H37Rv序列比对。以敏感菌株(S)组为对照组进行两两对比分析不同耐药型的MTB菌株hspX表达的差异。结果PCR成功获得各组特异性的hspX基因,与H37Rv序列比对具有97%~99%的同一性,无存在明显差异;以相对定量2^(-ΔΔCt)法计算获得S、MDR、MTB^(R+)、MTB^(H+)、MTB^(S+)和MTB^(E+)菌株hspX的表达分别为0.98(0.89,1.23)、1.49(1.10,2.04)、1.41(0.55,2.80)、1.37(0.68,2.71)、0.91(0.59,1.62)和0.70(0.48,1.18)。以敏感菌株(S)组为对照组,不同耐药型菌株组与其比较,hspX表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论hspX基因在MTB中是保守的。在自然状态下,hspX基因在MTB的耐药性方面无明显相关性。 杨瑜 王楠 李华 吴玲 王琪 谢贝 刘志辉 孟繁荣关键词:结核分枝杆菌 热休克蛋白 95株耐多药结核分枝杆菌katG基因序列分析 被引量:1 2012年 目的分析广州地区耐多药结核分枝杆菌katG基因突变的分子特征。方法应用PCR-测序法对来自广州地区100株耐多药结核分枝杆菌株katG基因的261~330位密码子长度约210 bp目的片段进行序列测定,并与结核分枝杆菌标准株H37Rv菌株katG基因序列(GenBank:X68081.1,1-4810)进行对比,并应用DNASTAR软件推测氨基酸突变情况。在PCR和基因序列测定中,引物设计相同,上、下游引物分别为5'-GAAACAGCGGCGCTGATCGT-3和5'-GTTGTC-CCATTTCGTCGGGG-3'。结果 100株耐多药结核分枝杆菌菌株中,95株成功扩增出katG基因,95株中有70株呈现katG基因突变(73.68%);基因突变类型均为点突变,突变均发生于315位点,未见插入或缺失型基因突变;氨基酸突变包括3种类型,其中:66株发生AGC(Ser)→ACC(Thr)突变即S315T(94.28%),2株发生AGC(Ser)→ATC(Ile)突变即S315I(2.86%),2株发生AGC(Ser)→AAC(Asn)突变即S315N(2.86%)。结论在所测菌株范围内,广州地区耐多药结核分枝杆菌katG基因突变率和突变类型具有其特点。 竺澎波 孟繁荣 苏雯婕 谭守勇 刘志辉 周惠贤 石琳 张言斌关键词:结核分枝杆菌 耐多药 KATG基因 DNA序列测定 MPT64在MTB利福平和异烟肼耐药性检测方法中的应用 被引量:4 2021年 目的建立一种以MPT64为指标的结核分枝杆菌(MTB)耐药性检测的快速方法,探讨MPT64在MTB利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性检测中的应用。方法应用胶体金免疫层析法(GICA)分别检测MTB敏感株和耐多药株在含(观察组)与不含(对照组)RFP、INH的Middlebrook 7H9液体培养基上培养3、7、10 d的培养液中的MPT64,通过凝胶成像仪白光源拍照进行条带灰度分析(Image Jab Software 3.0),比较敏感株和耐多药株间的灰度比值的差异,依据受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析确定RFP、INH耐药的灰度比值界值;以比例法检测结果为金标准,评价新建方法的准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果对照组中,随着培养时间的延长,12株MTB敏感株和11株耐多药株的灰度比值增大;观察组中,敏感株在不同的培养时间的灰度比值没有显著变化,而耐多药株则明显增大。3、7、10 d敏感菌与耐多药菌在药物培养基中MPT64检测灰度比值差异均有统计学意义(P均<0.05)。依据观察组灰度比值分别绘制以MPT64指示的RFP和INH耐药性检测的ROC曲线,两者的3 d AUC分别为0.84和0.77,灰度比值界值均为0.05;7、10 d AUC均为1.00,7 d的灰度比值界值分别为0.23与0.20;10 d的灰度比值界值分别为0.49和0.48。GICA检测MPT64用于34株MTB的RFP、INH耐药性鉴定的准确度分别为97%和94%,灵敏度分别为93%和86%,特异度均为100%,阳性预测值均为100%,阴性预测值分别为95%和91%。结论 GICA检测MPT64于MTB培养7 d时能准确检测抗结核药物RFP、INH耐药性,MPT64可作为MTB药敏试验的有效检测指标。 杨瑜 李华 邓丽 雷杰 王楠 谢贝 吴玲 刘志辉 孟繁荣关键词:MPT64 药物耐药性 胶体金免疫层析法