周坚
- 作品数：50 被引量：276H指数：11
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生农业科学更多>>
- 大肠杆菌海藻糖合成酶基因的克隆和表达被引量：30
- 2000年
- 利用Ｍｕ转座子细胞内克隆了大肠杆菌海藻糖合成酶 ｏｔｓＢＡ基因，克隆频率为１．４５ ｘ １０(－３)／ Ｋａｎ(ｒ)转导子。经遗传互补、酶切和部分序列分析表明ｏｔｓＢＡ基因位于克隆质粒。亚克隆 ２．８７ｋｂ ＤＮＡ片段至不同拷贝数表达质粒并分别转化大肠杆菌ｏｔｓＢＡ基因缺失株，转化株恢复 在０．５ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ培养基上生长的功能，高渗透压诱导实验表明，转化株能够合成克隆基因 产物海藻糖，但合成量不受克隆质粒拷贝数影响。海藻糖良好的抗高渗能力可能在农作物育 种方面发挥重要作用。为构建含有海藻糖合成酶基因的植物表达载体，并在农杆菌的介导下 转入植物，赋予其抗高渗、耐干旱能力奠定了重要的研究基础。
- 戴秀玉吴大鹏周坚
- 关键词：海藻糖抗逆性作物育种
- 海藻糖的生理功能、分子生物学研究及应用前景被引量：63
- 1995年
- 海藻糖的生理功能、分子生物学研究及应用前景戴秀玉，程苹，周坚，江慧修（中国科学院微生物研究所，北京１０００８０）海藻糖（Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ，α－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ－α－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）是由两个葡萄糖分子α－α－１→１...
- 戴秀玉程苹周坚江慧修
- 关键词：海藻糖生理功能分子生物学
- 凝集性酵母融合株MWF29的啤酒酿造试验研究被引量：10
- 1992年
- 利用线粒体DNA突变标记和电诱导融合技术获得的酵母融合株MWF29,经过连续七代60—120吨级生产规模的发酵试验表明,该菌生产性能良好,具备了两个亲株的优良性状,发酵力强,酿酒风味好,发酵流程中及最终产品的化验指标全部达到了优质酒的要求。发酵后期细胞的凝集性好,90%以上的菌体自行凝集下沉到罐底,不需经过离心便可顺利过滤,并且减少用于过滤的硅藻土用量。生产实践证明酵母融合株MWF29是一株性能稳定的优良生产菌株。本工作证明应用线粒体DNA突变抗性菌进行原生质体融合是工业酵母育种的一种简便有效的手段,特别是为改良巳丧失生孢子能力的生产菌株的性状提供了有效途径。
- 江慧修张金玲戈琳周坚李福成赵希源应自荣丁广学王学明
- 关键词：酿造
- 啤酒酿造用凝集性酵母融合育种的研究被引量：11
- 1993年
- 用红霉素抗性突变和小菌落呼吸缺陷突变,标记一株非凝集性啤酒酿造用酵母 Sacch(?)-romyces carlsbergensis B8然后与凝集性酵母 Saccharomyces carlsbergensis A43进行电诱导融合,获得五株稳定的凝集性酵母融合株。其中,F6、F7具有与亲株 A43同等强的凝集特性,同时还保留了另一亲株 B8的发酵力强,酿造风味好等生产性状。经测定细胞的 DNA含量,五株融合株分别属于二、三、四倍体。用 Octyl-sepharose CL-4B 疏水柱层析法测定细胞表面的疏水性表明,A43和全部融合株的细胞表面疏水性能都比非凝集性亲株 BB强,并与细胞的凝集性能呈正相关。
- 江慧修张金玲周坚戈琳王丽李景昆
- 关键词：凝集性育种酵母菌
- 酵母深加工产品—海藻糖的开发和应用
- 戴秀玉周坚王韫恂
- 关键词：酵母深加工海藻糖
- 文献传递网络资源链接
- 嗜盐古菌中糖磷酸转移酶系统(PTS)的鉴定及其调控蛋白的研究
- 糖磷酸转移酶系统(PTS)是一种原核微生物特有的转运细胞外碳源进入细胞并将其磷酸化的重要代谢机器，它利用磷酸烯醇式丙酮酸为磷酸供体来磷酸化碳源，完整的PTS系统由PtsI、HPr、PtsA、PtsB和PtsC五个蛋白组成...
- 蔡磊蔡双凤赵大贺周坚向华
- 关键词：嗜盐古菌调控蛋白
- 一株耐高盐耐高COD盐水球菌菌株和来源该菌株的内源质粒
- 本发明公开了一株盐水球菌菌株及其来源的该菌株的两个内源性质粒，并在此基础上构建了衍生质粒。本发明所提供的盐水球菌(Salinicoccus sp.)菌株408，保藏编号为CGMCC No.13032,具有耐高盐高COD的...
- 赵大贺周坚向华
- 文献传递
- 基于PHA颗粒-PhaP标签和内含肽元件的极端嗜盐古菌蛋白的表达纯化系统
- 2014年
- 【目的】建立一个基于PHA颗粒-PhaP标签的简便实用的极端嗜盐古菌蛋白表达纯化系统,并探讨嗜盐古菌内含肽在该系统优化中的应用。【方法】以嗜盐古菌-大肠杆菌穿梭载体pWL502为基本骨架,构建带有嗜盐古菌强启动子和PhaP融合标签的表达载体;在地中海富盐菌phaP缺陷株(ΔphaP)中融合表达目的基因,通过蔗糖密度梯度离心分离纯化结合于PHA颗粒上的PhaP融合蛋白;在phaP基因与多克隆位点之间引入特定的嗜盐古菌内含肽元件,尝试通过定点突变改变该内含肽的剪切活性。【结果】成功构建了以PhaP作为N端融合标签的表达载体pPM以及作为C端融合标签的载体pIP;在phaP基因簇强启动子控制下,二者均实现了目标蛋白的高效表达;通过PHA颗粒介导的蛋白分离纯化策略,实现了以PhaP为融合标签的目标蛋白的分离纯化;发现内含肽序列Hbt21在地中海富盐菌中保持了高效的剪接活性,通过定点突变其C端末位氨基酸天冬酰胺(N182)及邻位的丝氨酸(S183)失活了该内含肽的C端剪接活性。【结论】首次建立了一个基于PHA颗粒-PhaP标签的简便节约的极端嗜盐古菌蛋白表达纯化系统,并确定了嗜盐古菌型内含肽C端剪接的活性位点,为该内含肽将来应用于PhaP融合蛋白的标签去除奠定了基础。
- 伍锦花蔡双凤刘海龙侯靖韩静周坚向华
- 关键词：极端嗜盐古菌内含肽
- 极端嗜盐古菌PHA合成代谢的遗传与功能基因组学研究
- @@极端嗜盐古菌生产生物可降解塑料(聚经基脂肪酸酯，PHA)的研究始于20世纪80年代，但由于受嗜盐古菌遗传操作技术等的制约，国际上嗜盐古菌PHA的研究至本世纪初仍未进入到基因水平。与细菌相比，嗜盐古菌生产PHA具有一些...
- 向华韩静陆秋鹤刘海龙冯博蔡双凤周坚
- 关键词：极端嗜盐古菌可降解塑料功能基因组学合成代谢
- 文献传递
- 表达极端嗜盐古菌紫膜蛋白突变体的载体及工程菌
- 本发明公开了一种表达极端嗜盐古菌紫膜蛋白突变体的载体及工程菌与应用。本发明所提供的表达极端嗜盐古菌紫膜蛋白突变体的载体pNB－bopD96N，是将具有序列表中序列1的核苷酸序列的极端嗜盐古菌紫膜蛋白突变体编码基因插入到p...
- 向华周利刚周梅先孙超岷周坚
- 文献传递
