吴正辉
- 作品数：43 被引量：87H指数：5
- 供职机构：武汉大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程农业科学更多>>
- 缬氨酸杀虫菊酯的合成被引量：5
- 1998年
- 缬氨酸杀虫菊酯是一类很有发展前景的杀虫杀螨剂，它的菊酸部分为Ｒ－构型，菊醇部分为Ｓ－构型，其合成是由相应的缬氨酸或者它的活性衍生物与相应的醇经酯化而制得。具体过程是Ｄ－缬氨酸经６ＮＨＢｒ／ＮａＮＯ２溴化制成（Ｒ）－α－溴代异戊酸，再与对三氟甲基苯胺反应合成（Ｒ）－Ｎ－［（４－三氟甲基）苯基］α－缬氨酸，后被Ｎ－氯代琥珀酰亚胺氯化制成（Ｒ）－Ｎ－［２－氯－４－（三氟甲基）苯基］α－缬氨酸，最后与（Ｓ）－α－氰基－３－苯氧苯基甲醇用ＤＣＣ脱水酯化合成缬氨酸杀虫菊酯Ｉ（Ｒ１＝Ｆ３Ｃ，Ｒ２＝Ｈ，ＣＬ，Ｒ３＝Ｈ）。还给出了两种菊酯２×４种异构体杀虫（烟草夜蛾和家蝇）活性数据。
- 汤家芳刘芝兰肖玉秀周九元吴正辉
- 关键词：杀虫剂
- HCV NS4基因在大肠杆菌中表达及蛋白质提纯
- 2001年
- 应用 PCR方法扩增出人丙型肝炎病毒全长 N S4基因的 DNA片段 ,克隆入表达载体 p QE3 2并转化E.coli JM10 9,经 IPTG诱导表达出 4 2× 10 3蛋白 .利用 Ni- NTA- agarose纯化得到纯化产物 ,Western- blot鉴定该蛋白能够与抗 NS4的单克隆抗体发生特异性反应 .
- 王晓玲叶林柏郜金荣徐进平吴正辉
- 关键词：丙型肝炎病毒纯化大肠杆菌生物功能
- 丙型肝炎病毒包膜蛋白E1在小鼠和家兔中免疫应答研究被引量：4
- 2002年
- 探讨丙型肝炎病毒包膜蛋白E1作为丙肝候选疫苗的可行性 用大肠杆菌表达的非糖基化HCV(丙型肝炎病毒 )E1包涵体蛋白免疫小鼠和家兔 ,分析该包涵体蛋白在小鼠和家兔中所引起的免疫应答及其安全性 该E1蛋白具有良好的免疫原性 ,能诱导小鼠和家兔产生针对E1的特异性体液免疫应答 小鼠CD+ 8T细胞数量在免疫后有明显升高 免疫小鼠未见明显的毒副作用 推测HCVE1这种包涵体结构可能有利于E1抗原的呈递 ,而HCVE1蛋白的糖基化并不是其免疫原性所必须的 .
- 徐进平叶林柏孟小林佘应龙吴正辉
- 关键词：丙型肝炎病毒丙肝疫苗小鼠家兔免疫应答免疫原性
- HCV NS2基因表达载体的构建及在E.coli中表达
- 2001年
- 应用 PCR方法从含有丙肝病毒全长非结构蛋白基因的载体 p Blue Bac2 5中扩增出全长的 N S2基因DNA片段 ,分别克隆到表达载体 p QE3 0和转座载体 p Fast Bac HTb的多克隆位点 ( MCS) .PFast NS2通过转座插入穿梭载体 Bacmid的表达盒 ;p QENS2转化 JM10 9菌株 ,诱导表达出 N端含有 6个 His的全长 NS2蛋白 ,用 Ni-NTA- agarose柱层析纯化 ,获得提纯的全长 NS2蛋白 .
- 赵月娥叶林柏郜金荣徐进平刘源洁吴正辉
- 关键词：纯化丙型肝炎病毒NS2基因基因表达
- 不同复性条件对重组人组织纤溶酶原激活剂复性的影响被引量：2
- 2008年
- 大肠杆菌生产菌株诱导表达产生的无活性重组人组织纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen acti-vator,tPA)包涵体蛋白,溶解于尿素中变性后进行复性.通过单因子试验和正交试验考察了不同复性条件下透析复性对tPA包涵体蛋白复性效率的影响.结果表明蛋白质浓度、复性温度、pH值、复性介质、还原剂浓度对tPA的复性效果都有不同程度的影响,当0.5 g/L tPA包涵体蛋白溶解于pH 9.5的7 mol/L的尿素,加入5 mmol/Lβ-巯基乙醇,在20℃、pH 8.0的双蒸水条件下复性时,可以取得最高的复性效率(2.0×107IU/g).通过对稀释复性、透析复性和凝胶过滤层析复性3种方法比较,建立了适宜工业化生产tPA的复性方法.
- 吴正辉郜金荣佘应龙叶力叶林柏
- 关键词：包涵体复性正交试验
- TT病毒ORF_2在Cos7细胞中的表达及蛋白质定位
- 2004年
- 应用PCR方法从含有TTVirusORF2的质粒pET-His-TTV2中扩增出606bp的蛋白质编码区,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1中以表达成GFP-VP2融合蛋白。构建出的重组质粒pEGFPTTV2经过酶切分析和PCR鉴定。用脂质体介导法将pEGFPTTV2质粒DNA转染Cos7细胞,通过RT-PCR分析,证实细胞中存在ORF2基因的转录产物。用共聚焦显微镜结合PI染色技术研究TTVVP2蛋白在细胞中的分布情况。结果表明,TTVVP2分布在细胞质中和细胞核膜内侧。因此推测VP2作为一种非结构蛋白,功能可能是参与病毒DNA的复制或转录。
- 何燕叶林柏李礼廖庆姣特马力佘应龙叶力吴正辉
- 关键词：GFPVP2蛋白质定位
- 黑米降解液在食品中的应用
- 黑米是天然的传统营养滋补品，但食用比较麻烦，补酒营养成分损失较多，使用范围(病人、儿童、无饮酒习惯者)受到限制。本专利采用酶学方法对黑米进行处理后可将其水解液用于饮料、口服液及糖果糕点，所含营养成分比降解前易于吸收、色泽...
- 周亚璋吴正辉
- 文献传递
- 输血传播病毒(TTV)SANBAN分离株ORF2蛋白对NF-κB信号途径抑制的研究
- NF-κB信号途径对免疫反应有十分重要的作用,本研究着重针对 TTV (SANBAN 分离株)的 ORF2蛋白,研究其在 NF-κB信号途径中的作用。首先我们通过 Luciferase 实验发现,无论在 HeLa、Hep...
- 郑弦叶林柏曾莹春蔡维嘉赵鹏张毅娟朱生力宿丽娅吴正辉佘应龙
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒NS5B基因在昆虫细胞中的表达被引量：4
- 2001年
- 将含有丙型肝炎病毒 (HCV) NS5 B基因的转移载体 p Blue Bac5 B与野生型杆状病毒 (Ac NPV) DNA共转染 Sf9昆虫细胞 ,通过空斑纯化获得带有 NS5 B基因的重组病毒 Ac NS5 B.提取重组病毒基因组 DNA进行Southern分析 ,发现有一条 1.8kb的 DNA片段与标记的探针发生杂交 .Ac NS5 B感染 Sf9细胞后 ,在细胞中表达了分子量为 6 6× 10 3的蛋白 ,用 Western blot方法检查这种蛋白质 ,能与兔抗 HCVNS5
- 李磊郜金荣徐进平叶林柏张斌吴正辉
- 关键词：丙型肝炎病毒重组杆状病毒昆虫细胞基因表达RNA多聚酶
- 精氨酸、精氨酸盐酸、半胱氨酸、胱氨酸对重组人tPA蛋白复性的影响被引量：2
- 2006年
- 以重组人tPA蛋白为材料研究了精氨酸、精氨酸盐酸盐、半胱氨酸、胱氨酸对蛋白质复性效果的影响,重组tPA蛋白包涵体经尿素变性溶解后,在精氨酸、精氨酸盐酸盐、半胱氨酸、胱氨酸存在的条件下进行复性,结果表明,碱性的精氨酸在质量分数0.2%时可减少蛋白质凝聚,显著提高复性效果,tPA复性后的活性可提高50%以上,半胱氨酸单独使用具有类似β-巯基乙醇的作用,精氨酸盐酸盐和胱氨酸单独使用对复性无影响,而半胱氨酸和胱氨酸联合使用,有类似氧化-还原系统作用。可提高活性20%。
- 吴正辉郜金荣佘应龙叶力叶林柏
- 关键词：复性
