叶凤
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 供职机构：武汉大学基础医学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛋白激酶C-β抑制剂LY333531对1型糖尿病大鼠肾功能的影响被引量：3
- 2015年
- 目的:观察蛋白激酶C(PKC)-β抑制剂LY333531对1型糖尿病大鼠肾功能的保护作用。方法:27只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组和LY组,每组各9只。后两组采用一次性尾静脉注射60mg/kg链脲佐菌素(STZ)成功构建1型糖尿病模型。LY组大鼠给予PKC-β抑制剂LY333531(10mg/kg/天)灌胃治疗8周。抽取各组大鼠颈动脉血并留取24h尿液,测量血糖、内生肌酐清除率和24h尿蛋白。之后处死各组大鼠,摘取肾脏称重并计算肾重/体重。统计学分析各组上述指标的差异。结果:与正常对照组比较,糖尿病组和LY组大鼠的体重均明显减轻,而肾重、肾重/体重、血糖及24h尿蛋白均显著升高(P<0.05);LY组大鼠的肾重/体重、内生肌酐清除率及24h尿蛋白水平均低于糖尿病组(P<0.05),两组肾重、体重和血糖差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PKC-β抑制剂LY333531有利于改善1型糖尿病大鼠内生肌酐清除率和减少蛋白尿的产生。
- 伍婷婷曾吉张百芳叶凤
- 关键词：糖尿病肾功能
- 高浓度葡萄糖诱导大鼠肾小球系膜细胞VEGF的表达上调依赖于PKCβⅠ和RhoA的活化
- 2015年
- 目的:研究高浓度葡萄糖是否通过蛋白激酶C(PKC)βⅠ和RhoA信号通路介导大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达上调。方法:体外培养SD大鼠肾小球系膜细胞,给予葡萄糖和各种抑制剂处理细胞,提取细胞蛋白,采用Western免疫印迹检测PKCβⅠ及RhoA蛋白的表达量变化,同时提取RNA,采用实时定量PCR观察VEGF mRNA浓度变化。结果:高浓度葡萄糖(30mmol/L)诱导肾小球系膜细胞VEGF mRNA表达增加,而甘露醇对照组VEGF mRNA表达水平未见明显改变(P>0.05)。高浓度葡萄糖刺激系膜细胞RhoA和PKCβⅠ发生活化,RhoA-GTP蛋白和胞膜PKCβⅠ蛋白均呈时间依赖性增加。使用Rho激酶特异性抑制剂(HA-1077)预处理细胞后,VEGF mRNA表达量与高糖组相比明显下调(P<0.05)。进一步使用广谱PKC抑制剂(PMA)、传统PKC抑制剂(G6976)以及PKCβ特异性抑制剂(LY333531)预处理细胞后,VEGF mRNA和RhoAGTP蛋白表达量与高糖组相比均受到抑制(P<0.05)。结论:高浓度葡萄糖可能通过间接活化PKCβⅠ来激活RhoA信号通路,从而上调系膜细胞VEGF的表达,该信号通路在糖尿病肾病的病理过程中发挥着重要作用。
- 伍婷婷黄新次叶凤张百芳
- 关键词：肾小球系膜细胞VEGFRHOA
- 不同分子区域的Caveolin-1真核表达载体构建及其对Caveolin-1基因敲除小鼠系膜细胞周期的影响
- 2010年
- 目的:构建含不同分子区域的caveolin-1真核表达质粒,转染caveolin-1基因敲除小鼠(Cav-1-/-)的肾小球系膜细胞,观察能否逆转系膜细胞周期阻滞。方法:首先从pLHCX-N-FLAG2/caveolin-1全长质粒中扩增cave-olin-1 N末端(第1-82位氨基酸)、N末端+脚手架区(第1-101位氨基酸)的cDNA片段,同时在引物两端加上限制性酶切位点HindⅢ及XhoⅠ,再与复制缺陷型逆转录病毒表达载体pLHCX-N-FLAG3连接。完成酶切和测序鉴定后将pLHCX-N-FLAG3/cav-1-82和pLHCX-N-FLAG3/cav-1-101分别转染HEK293T细胞,包装产生有感染力的病毒颗粒,再分别感染Cav-1-/-系膜细胞,流式细胞分析观察能否逆转细胞周期阻滞。结果:成功构建含caveolin-1 N末端、N末端+脚手架区片段的重组真核表达载体,流式细胞分析发现pLHCX-N-FLAG3/cav-1-82和pLH-CX-N-FLAG3/cav-1-101基因导入Cav-1-/-系膜细胞,可逆转G0/G1细胞周期阻滞。Vcaveolin-1可能主要通过N末端第1-82位氨基酸区域参与细胞周期进程,具体机制还需进一步研究。
- 黄丽丽张百芳叶凤伍婷婷曹佳李小明
- 关键词：小凹蛋白真核表达质粒细胞周期阻滞
- PKC-β抑制剂LY333531对糖尿病肾脏NADPH氧化酶与SOD蛋白表达的影响被引量：8
- 2011年
- 目的研究蛋白激酶C（protein kinase,PKC）-β抑制剂LY333531对糖尿病肾脏尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide dinucleotide phosphate,NADPH）氧化酶与超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）的影响。方法 24只SD雄性大鼠（240~260 g）,采用抽签法随机分为正常对照组（normal control,NC）、糖尿病组（diabetes mellitus,DM）及LY333531（LY）治疗组。LY组灌胃给予PKC-β抑制剂LY333531〔1 mg/（kg.d）〕治疗4周后测量血糖、肾质量/体质量、24 h尿蛋白、内生肌酐清除率（creatinine clearance rate,Ccr）、游离15-F2t-Isoprostane、总抗氧化浓度及SOD活性。Western blotting分析NADPH氧化酶亚基P22phox与P67phox,SOD亚型Cu/Zn-SOD与Mn-SOD蛋白改变。结果与NC组比较,DM组血糖、肾质量/体质量、24 h尿蛋白、Ccr、血浆与肾脏中15-F2t-Isoprostane、血浆总抗氧化浓度及P22phox与P67phox表达明显增加,而肾脏总抗氧化物浓度、血浆与肾脏SOD活性、Cu/Zn-SOD及Mn-SOD蛋白表达明显减少（P〈0.05）。LY333531除对血糖与Mn-SOD的表达无显著影响外,均能显著逆转上述变化。结论 LY333531通过抑制糖尿病肾脏NADPH氧化酶的活化与表达,及促进Cu/Zn-SOD的表达而恢复SOD活性,以减少早期糖尿病肾脏的氧化损伤,从而发挥其保护肾脏作用。
- 高霞叶凤周赤燕刘慧敏徐援夏正远雷少青
- 关键词：LY333531糖尿病性肾病超氧化物歧化酶
