刘清华
- 作品数：101 被引量：197H指数：8
- 供职机构：中国科学院海洋研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 大菱鲆生精上皮不同发育时期生殖细胞及体细胞的标记方法及应用
- 本发明公开了大菱鲆生精上皮不同发育时期生殖细胞及体细胞的标记方法及应用，从大菱鲆精巢cDNA中扩增Amh/Sox9/Gsdf片段，经克隆并择优后提取质粒，以限制性内切酶线性化质粒，回收质粒后制备探针，将样品处理后进行固定...
- 柳意樊刘清华李军徐世宏王彦丰
- 文献传递
- 鱼类生殖细胞移植技术研究及进展
- 2020年
- 鱼类生殖干细胞具有多向分化潜能,作为供体细胞移入同种或异种受体,在受体内迁移、定居、增殖、分化、成熟,产生供体来源功能性配子和后代,称为鱼类生殖细胞移植。作为一项辅助生殖技术,与冷冻保存技术相结合,已经在多种鱼类上进行研究。经过十几年的发展,鱼类生殖细胞移植技术逐渐成熟,目前已经建立了原始生殖细胞、精原细胞、卵原细胞作为供体细胞,囊胚胚胎、孵化幼鱼、成鱼为受体的移植体系。生殖细胞移植技术未来将在濒危物种保护、代理养殖、干细胞诱导分化等方面发挥重要作用。本文总结分析了目前已经报道的鱼类生殖干细胞移植技术,以及鱼类生殖干细胞移植存在的问题和未来发展方向。
- 周莉周莉刘清华
- 关键词：鱼类生殖干细胞冷冻保存
- 一种卵胎生鱼类许氏平鲉精子超低温保存及激活方法
- 本发明属海洋生物技术领域，具体的说是一种卵胎生鱼类许氏平鲉精子超低温保存及激活方法。将许氏平鲉雄鱼精子成熟期获得精子与冷冻液按照1：4‑1：5的比例均匀混合，而后进行梯度降温冷冻，而后将冷冻后混合液移至液氮中，即实现精子...
- 刘清华李军王学颖徐世宏
- 文献传递
- 大菱鲆精子运动特征与精液pH的相关性研究被引量：2
- 2017年
- 为探究大菱鲆(Scophthalmus maximus)精液质量与pH的关系及甘油对大菱鲆精子激活的影响,本研究通过计算机辅助精子分析系统分析检测了威海和烟台4家大菱鲆育苗场(A、B、C、D)的精子质量。研究发现,不同育苗场的大菱鲆精子活力存在显著的差异,A2>A1>D>C>B,精子预测寿命分别为11.7、7.1、6.8、4.6、3.3 min,所取精子的质量的存在显著差异。研究结果发现,大菱鲆精子运动特性与精子活化率相关性显著,其中精子活化率与平均曲线运动速度、平均直线运动速度、平均路径速度、精子头侧摆幅度、精子平均鞭打频率呈显著正相关(P<0.05),与运动直线性、运动摆动性、运动前向性等参数无显著相关性;大菱鲆精子运动特性受pH影响显著,精液pH与平均曲线运动速度、平均直线运动速度、平均路径速度、精子头侧摆幅度、精子平均鞭打频率呈显著正相关(P<0.05),而与运动直线性、运动摆动性、运动前向性等参数无显著相关性。同时还发现,精子活化率高、寿命长的大菱鲆精液pH偏弱碱性(pH=8.0),即大菱鲆精子适宜在弱碱性环境中活动。除此之外,向激活海水中加入梯度甘油(0.1、1、10、100、500、1 000 mmol/L),发现可以显著提高大菱鲆精子寿命,其中甘油浓度为100 mmol/L时,精子寿命延长至15.17 min±0.29 min,推测甘油在精子激活后可能被精子吸收并氧化分解提供能量。
- 安皓徐世宏徐世宏王彦丰刘清华王彦丰
- 关键词：精子PH
- 大黄鱼精液的高效超低温保存被引量：19
- 2007年
- 采用2 mL的冷存管和程序降温仪高效超低温保存大黄鱼(Pseudosciaena croce)精液。分析比较了5种不同浓度抗冻剂(二甲基亚砜、乙二醇、丙二醇和甘油和甲醇)、3种降温速率(10,20和30℃/min)和2种解冻温度(28℃和43℃)对大黄鱼精液超低温保存效果的影响。实验结果表明,采用Hanks’作为稀释液,10%～20%甘油或10%DMSO作为抗冻剂,20℃/min的降温速率对精液进行超低温保存43℃水浴解冻,冻精激活后获得理想的运动率(76.6%±11.4%～80.0%±12.6%),而且对10%甘油保存的冻精进行人工授精实验获得了与新鲜精液相似的受精率和孵化率。
- 肖志忠陈雄芳丁福红刘清华徐世宏李军
- 关键词：超低温保存抗冻剂精液受精率
- 一种鉴别海水鱼类生殖细胞种间移植生殖细胞嵌合体的方法
- 本发明涉及海水类生殖细胞鉴定,进一步的说鉴别供体生殖干细胞是否在受体内增殖的方法，具体的说是一种鉴别海水鱼类生殖细胞种间移植生殖细胞嵌合体(真伪)的方法。利用PCR技术，以待检测样品的基因为模板，通过引物分别扩增得到含生...
- 周莉刘清华李军
- 条纹锯鮨精液超低温冷冻保存研究被引量：4
- 2014年
- 为建立条纹锯鮨精液超低温冷冻保存方法,实验采用计算机辅助精子分析系统(CASA)分析了采用6种抗冻保护剂(GLY[甘油]、DMSO[二甲基亚砜]、PG[丙二醇]、EG[乙二醇]、METH[甲醇]、DMA[二甲基乙酰胺])在4种浓度(5%、10%、15%、20%,v/v)下对条纹锯鮨精液的冷冻保存效果。结果发现,以HBSS为稀释液,采用程序降温仪分步降温冷冻保存条纹锯鮨精液,37℃水浴解冻后的精子中,15%PG作为抗冻保护剂的精子运动率最高,达到(93.1±0.9)%,与鲜精差异不显著(P>0.05),15%PG作为抗冻保护剂的精子水浴解冻后精子的运动速度最高,平均直线速度、平均曲线速度、平均路径速度分别达到了(88.3±0.3)μm/s、(76.2±0.5)μm/s、(86.7±0.7)μm/s,与鲜精差异不显著(P>0.05)。在不同种类及不同浓度抗冻保护剂保护下,15%PG作为抗冻保护剂的精子解冻后1 min内运动率变化与鲜精差异不显著(P>0.05)。研究表明,15%PG为条纹锯鮨最佳抗冻保护剂,可用于条纹锯鮨精液的超低温冷冻保存。
- 韩龙江刘清华官曙光纪利芹温海深李军
- 关键词：精子超低温保存
- 一种冷冻保存的杂交鲆精子与牙鲆卵子的回交人工授精的方法
- 本发明属海洋生物技术领域，具体的说是一种冷冻保存的杂交鲆精子与牙鲆卵子的回交人工授精的方法。将采集的杂交鲆精子经超低温冷冻保存，然后将长期超低温冷冻保存的杂交鲆精子经二步水浴解冻，溶解后加入杂交鲆冻精3-5倍体积的稀释液...
- 刘清华李军马道远肖志忠
- 文献传递
- 长牡蛎精子超低温冷冻后超微结构损伤研究被引量：10
- 2017年
- 采用程序降温仪分步降温冷冻保存长牡蛎(Crassostrea gigas)精液,并用扫描电镜、透射电镜研究了精子的超微结构损伤。超低温冷冻保存后长牡蛎精子的运动率、受精率及孵化率与鲜精无显著差异。鲜精中84.5%的精子形态结构正常,冻精中73%的精子形态结构正常。形态结构正常的精子表现为顶体、质膜、线粒体与鞭毛结构完整、染色质形状规则,顶体、线粒体及中心粒结构正常,鞭毛形态完整、微管结构清晰;形态结构异常的精子表现为顶体脱落、解体,精子头部质膜膨胀、破裂、染色质肿胀、破裂、解体,线粒体移位、脱落、膨胀,嵴退化或消失,鞭毛弯折、断裂,微管解聚。结果显示,以10%DMSO为抗冻保护剂,HBSS溶液为稀释液,1鲶4的稀释比例,添加海藻糖,采用分步降温法冷冻保存,对长牡蛎精子具有较好的抗冻保护作用,合适的冻存方法可以有效的保护太平洋牡蛎精子冷冻过程中结构损伤。研究有助于长牡蛎种质资源的收集保存及应用。
- 韩龙江刘清华许飞温海深李军
- 关键词：长牡蛎精子透射电镜超微结构
- 长期超低温保存对真鲷(Pagrus major)精子质量的影响
- 本论文以冷冻精子库中保存1个月到84个月的真鲷精子为研究对象，通过对冷冻精子寿命、运动率、受精率、孵化率和超微结构的观察、对冷冻精子超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)酶活性的测定、以及对冷冻精子核DNA损伤的...
- 刘清华肖志忠徐世宏李军
- 关键词：真鲷精子质量超低温保存稳定性分析
- 文献传递
