赵春礼
- 作品数：122 被引量：267H指数：9
- 供职机构：首都医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 羊膜上皮细胞条件培养液对大鼠骨髓基质细胞神经分化的影响
- 骨髓基质细胞 (bone marrow stromal cells,BMSCs)体外诱导分化为神经细胞的研究,不仅具有重要的理论意义,而且具有广阔的应用前景,是目前生命科学领域的一大研究热点。本研究的目的在于探讨羊膜上皮...
- 王丹妮季凤清孙海梅李荣平赵春礼杨慧
- 文献传递
- 成人骨骼肌细胞原代培养被引量：9
- 2001年
- 本研究以获取基因治疗自体移植的载体为目的 ,观察了生长因子对成人骨骼肌卫星细胞增殖的影响。用手术中取得的成人骨骼肌进行体外组织块培养及酶消化培养 ,用成纤维细胞生长因子及表皮生长因子进行处理 ,作动态观察。结果证明 ,消化分离出的肌卫星细胞数量极少 ,培养不能成活 ;组织块培养肌卫星细胞的增殖与生长因子的作用有关 ,成纤维细胞生长因子及表皮生长因子处理组的增殖细胞数显著高于对照组。提示 ,生长因子可促进成年人骨骼肌卫星细胞增殖 ,但与其年龄及部位有一定关系。
- 吕捷赵春礼李玉成张进禄徐群渊
- 关键词：成纤维细胞生长因子表皮生长因子卫星细胞骨骼肌
- 5-HT_(1A)受体蛋白在PC12细胞膜转运的动态变化
- 2010年
- 目的在神经元样PC12活细胞上进行实时、可视和定量研究5-羟色胺1A受体的时空分布、膜转运和信号传导机制。方法运用RT-PCR方法获得小鼠5-HT1A基因,并插入到pEGFP-N1真核表达载体中。采用阳离子脂质体方法将质粒转染至PC12细胞和HEK293细胞中,通过G418筛选出稳定表达5-HT1A-EGFP的PC12细胞系。运用激光共聚焦成像系统观察活细胞中5-HT1A-EGFP的表达情况,利用光漂白荧光恢复(FRAP)技术在PC12细胞膜局部漂白后观察5-HT1A-EGFP荧光蛋白在细胞膜上转运的情况。结果克隆所获得的小鼠5-HT1A基因是准确的。5-HT1A-EGFP蛋白清晰的分布于PC12和HKE293细胞膜上。通过FRAP技术观察到漂白区域的细胞膜在100s内有部分恢复,说明受体在细胞膜上发生转运。结论建立了稳定表达5-HT1A-EGFP融合蛋白的PC12细胞系,并利用活细胞成像和FRAP技术观察分析并证实了5-HT1A受体在PC12细胞的膜表面的表达和转运的动态变化。
- 金艳燕吕琼闫竹青高尔静赵春礼张进禄徐志卿
- 人白介素-2基因在原代培养骨骼肌细胞中的表达研究被引量：1
- 1999年
- 目的对以人白介素－２在原代培养骨骼肌细胞中的表达作为肿瘤基因治疗模式进行新的探索；方法将人白介素－２ｃＤＮＡ片段与ＣＭＶ启动子及ＲＳＶ启动子重组，通过Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导将得到真核表达载体ｐＣＭＶ－ＩＬ２和ｐＲＳＶ－ＩＬ２转入原代培养的骨骼肌细胞，并用免疫组织化学方法观察白介素－２的表达；结果ｐＣＭＶ－ＩＬ２和ｐＲＳＶ－ＩＬ２经酶切鉴定正确，免疫组织化学观察到约有１０％左右细胞表达了白介素－２ｃＤＮＡ；结论不同启动子表达情况并无差别。
- 潘海燕田竟生王珂王珂郑少鹏赵春礼
- 关键词：骨骼肌细胞肿瘤基因治疗白细胞介素2
- 应用逆转录病毒pLXSN-GFP在脑组织追踪骨髓源干细胞的可行性被引量：2
- 2004年
- 目的 探讨应用逆转录病毒pLXSN-GFP在脑组织追踪骨髓源于细胞的可行性。方法 应用逆转录病毒pLXSN-GFP标记Sprague-Dawley大鼠骨髓源干细胞,经尾静脉植入C57BL/6小鼠。在植入后4周和8周取材。用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察绿色荧光阳性细胞,同时用GFP抗体的荧光免疫组织化学方法判断绿色荧光的来源。结果移植骨髓源干细胞后4周和8周,在嗅球和脑干网状结构均可见绿色荧光阳性细胞,GFP抗体的荧光免疫组织化学方法证实绿色荧光的确来源于GFP的表达。结论 逆转录病毒pLXSN-GFP可用以标记并在脑组织追踪骨髓源干细胞。
- 邹西峰赵春礼张海燕李铁林徐群渊
- 关键词：逆转录病毒脑组织免疫组织化学方法阳性细胞GFP
- 羊膜上皮细胞条件培养液对大鼠骨髓基质细胞神经分化的影响被引量：1
- 2008年
- 目的探讨羊膜上皮细胞条件培养液对大鼠骨髓基质细胞分化为神经细胞的作用。方法体外分离、培养羊膜上皮细胞及大鼠骨髓基质干细胞,流式细胞术检测其表面抗原,免疫组织化学染色技术检测巢蛋白(Nestin)以及增殖细胞相关核抗原(ki67)在细胞中的表达。采用羊膜上皮细胞条件培养液对其进行诱导,倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,免疫荧光染色技术检测神经特异烯醇化酶(NSE)以及多巴胺能神经元标志物酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运体(DAT)在诱导后细胞中的表达,并进行定量比较分析。结果羊膜上皮细胞条件培养液能够诱导大鼠骨髓基质细胞向神经细胞方向分化。结论羊膜上皮细胞条件培养液可以诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞。
- 王丹妮孙海梅李荣平杜娟赵春礼郑德宇季凤清杨慧
- 关键词：骨髓基质细胞羊膜上皮细胞分化多巴胺能神经元
- 多聚乙酸亚胺介导基因转移
- 2000年
- 目的 采用一种新的多聚阳离子化合物——多聚乙酰亚胺 (polyethylenim ine,PEI) ,作为将外源性基因转入骨骼肌细胞的介导物。 方法 骨骼肌细胞取自新生 SD大鼠 ,经胰酶消化后培养 ,将 L ac Z基因 DNA - PEI复合物导入骨骼肌细胞内 ,最后用 X- gal组织化学染色检测已转染的细胞。 结果 PEI可作为介导剂使 L ac Z基因在培养的骨骼肌细胞中表达 ,其表达率可达到 30 %。 结论 PEI在真核细胞中实施基因转移是一种有效方法 ,为基因治疗。
- 赵春礼王珂田竟生郑少鹏徐群渊
- 关键词：基因转移骨骼肌细胞
- 酪氨酸羟化酶和左旋芳香族氨基酸脱羧酶基因的细胞表达及活性检测被引量：2
- 2003年
- 由于在帕金森病中合成多巴胺所需的酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和左旋芳香族氨基酸脱羧酶(aromatic L-amino acid decarboxylase,AADC)活性明显降低,所以补充多巴胺合成酶成为基因治疗帕金森病研究的主要手段。我们分别构建了重组逆转录病毒载体pLHCX/TH及pLNCX_2/AADC,通过脂质体介导将带有目的基因的载体分别转到包装细胞PA317中,经筛选得到产病毒的细胞PA317/TH和PA317/AADC,采用免疫组化、原位杂交方法检测目的基因表达;细胞经裂解后进行的酶促反应产物多巴胺以高压液相电化学方法检测证明所克隆的TH及AADC基因具有功能活性;这两种基因工程改造细胞可以完成酶促动力学的功能,使L-dopa及多巴胺产生明显增加。本研究为用TH和AADC双基因对帕金森病进行基因治疗提供了一定的依据。
- 苏月段春礼赵春礼赵焕英徐群渊杨慧
- 关键词：细胞生物学酪氨酸羟化酶逆转录病毒载体基因治疗
- 帕金森病模型大鼠中脑黑质磷酸化α-突触核蛋白表达增加被引量：2
- 2008年
- 目的观察鱼藤酮对大鼠中脑黑质磷酸化α-突触核蛋白(α-SYN)、酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。方法利用脑立体定位技术注射微量鱼藤酮,建立急性损伤帕金森病(PD)模型。采用动物行为轨迹分析软件计算各时间点30min内运动距离和平均运动速度。免疫组织化学检测黑质(SN)部位TH、磷酸化α-SYN的表达,并统计TH和磷酸化α-SYN阳性神经元数目。结果PD组动物各时间点30min内运动距离、平均运动速度低于对照组(P<0.05,0.01)。同对照组相比,损伤侧SN部位TH阳性神经元数目明显减少(P<0.01),磷酸化α-SYN阳性神经元数目明显增加(P<0.01)。结论PD大鼠中脑黑质磷酸化α-SYN表达增加及TH的表达明显下降,并出现运动障碍。
- 隋雷鸣赵焕英赵春礼孙晓红杨慧
- 关键词：鱼藤酮酪氨酸羟化酶帕金森病
- 帕金森病基因治疗的理论:VMAT_2基因的表达及其对MN9D细胞多巴胺代谢的影响被引量：1
- 2004年
- 目的:获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体(vesicularmonoaminetransporter-2,VMAT2)基因,转染至MN9D细胞,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2基因促进单胺类递质循环利用的效应。方法:从人胎脑中提取总RNA,RT-PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM-Easy-T载体中,进行全序列测定。重组真核表达载体pBK-RSV-VMAT2,转染MN9D细胞,免疫细胞化学检测VMAT2的表达,HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化。结果:RT-PCR扩增到1637bp的带有Kozak序列的cDNA片段。原位杂交证实pAAV-VMAT2能在COS7细胞表达;免疫组化证实转基因的MN9D细胞(实验组)VMAT2免疫着色明显高于对照组。HPLC结果表明实验组中细胞内外的多巴胺含量分别升高至(227.2±20.8)%和(302.6±15.7)%(P<0.01),而细胞外HVA、DOPAC分别降低至(48.1±5.3)%和(55.7±4.9)%(P<0.05),细胞内HVA,DOPAC分别升高至(332.1±28.2)%和(1176.8±82.5)%(P<0.01)。结论:克隆了VMAT2cDNA片断,可在真核细胞中表达。该基因的过表达可促进多巴胺的循环利用,有望用于帕金森病的基因治疗。
- 张京钟余爽赵春礼段春礼徐群渊
- 关键词：帕金森病基因治疗基因表达多巴胺代谢
