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谢金文: 作品数：161 被引量：427H指数：10; 供职机构：山东省滨州畜牧兽医研究院更多>>; 发文基金：山东省自然科学基金现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金山东省自主创新成果转化重大专项项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>

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巴马香猪氨基肽酶N截短基因的克隆与原核表达被引量：1: 2017年; 为获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)受体猪氨基肽酶N(pAPN)抗原,提取巴马香猪小肠绒毛上皮的总RNA,PCR扩增获得pAPN基因的主要抗原区片段,并将其克隆至原核表达载体pET-32a中,将重组质粒pET-32a-pAPN转化大肠埃希菌BL21,通过不同浓度的IPTG、不同诱导时间进行诱导表达,以确定目的蛋白表达的最佳条件。经SDS-PAGE和抗组氨酸标签的单抗进行Western blot检测重组蛋白在大肠埃希菌中的表达,结果显示,原核表达产物在诱导温度37℃、IPTG浓度为0.8mmol/L,诱导4h可获得最佳表达,产物分子质量约为45ku,获得的目的蛋白大小与预期一致。; 王文秀张艳王宝琴谢金文刘博沈志强; 关键词：克隆原核表达

猪瘟病毒E2基因原核表达及间接ELISA检测方法的初步建立被引量：9: 2011年; 猪瘟（CSF）是猪的一种高度接触性的致死传染病。其病原体猪瘟病毒（CSFV）是黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）中的成员,为有囊膜的单股正链RNA病毒。E2蛋白是猪瘟病毒的跨膜结构蛋白,是诱导被感染动物机体产生免疫保护与CSFV中和抗体的主要病毒结构蛋白，; 谢金文李娇董林祖立闯王金良高三阳沈志强; 关键词：猪瘟病毒原核表达 E2基因病毒结构蛋白正链RNA病毒黄病毒科

猪瘟强毒与疫苗毒鉴别检测方法的研究进展被引量：3: 2012年; 猪瘟弱毒疫苗在我国的大规模免疫应用,对预防和控制猪瘟起到了重要作用,但同时使CSFV野毒感染猪和疫苗接种猪的鉴别诊断变得非常困难和必要。本文就猪瘟强毒与疫苗毒的鉴别诊断方法作一综述,以期为猪瘟的诊断与防控提供合理的科学依据。; 祖立闯谢金文唐娜苗立中李峰王金良沈志强; 关键词：猪瘟强毒

分子生物学技术在猪流感诊断中的应用被引量：2: 2010年; 猪流感是由正粘病毒科猪流感病毒引起的猪的一种急性、热性和高度接触性、群发性呼吸道疾病,其临床上以发病急促、高热咳嗽、鼻中流出分泌物、呼吸困难、衰竭,怀孕母猪繁殖障碍、流产、死亡等病症为特征。目前,猪流感在我国各地广泛存在和发生,给养猪业带来了巨大的经济损失,并且严重危害人类的健康。文章就猪流感分子生物学诊断技术进行简要概述,以期为猪流感的及时诊断提供参考。; 谢金文苗立中沈志强; 关键词：猪流感分子生物学

Foxp3结构、功能及其在机体免疫抑制中的作用被引量：1: 2010年; Foxp3特异性表达于胸腺、脾脏和淋巴结等淋巴器官和组织中的CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)表面,在诱导CD4+CD25+Treg发育、分化与功能发挥中起重要的作用,它通过调控Treg的转录和蛋白表达参与机体稳态机体,在感染免疫、肿瘤免疫及自身免疫病中发挥重要作用。本文就Foxp3分子结构、功能及其在免疫抑制中的作用机制作一综述。; 董林王艳萍王金良沈志强谢金文; 关键词：FOXP3 调节性T细胞免疫抑制

CSFV、PRRSV双重RT-PCR检测方法的建立及其应用: 为建立一种能够同时快速诊断猪瘟(CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)两种传染病的方法,根据GenBank上已发表的猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核苷酸序列分别设计并合成了两对能特异性扩增C...; 谢金文沈志强管宇韩玲任艳玲曲光刚; 关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒双重RT-PCR; 文献传递

猪瘟病毒E2基因主要抗原区的克隆及其原核表达被引量：1: 2012年; 为研究猪瘟病毒E2蛋白的抗原表位在机体免疫应答中的作用和特点,试验参照猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的基因组序列,设计、合成了1对引物,应用RT-PCR方法扩增出长为786 bp的基因片段,命名为zE2,将zE2基因克隆到原核表达质粒pET 32a中,经酶切鉴定后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),于37℃、1.0 mmol/L IPTG条件下诱导表达,大肠杆菌菌体裂解产物再经SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明:该基因片段得到较高表达,融合蛋白的分子质量约为48 ku,主要以包涵体形式存在,且具有一定的免疫学活性。; 谢金文王金良董林苗立中管宇高三阳沈志强; 关键词：猪瘟病毒 E2蛋白克隆原核表达

兔出血症病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：7: 2013年; 为建立一种敏感、特异、简便的兔出血症病毒(RHDV)检测方法,根据GenBank中公布的RHDV全基因组序列保守区域设计了2对引物,筛选了其中1对建立并优化了PCR条件,扩增产物为331bp,并基于此建立了SYBR GreenⅠ荧光染料real-time RT-PCR检测方法。通过敏感性、特异性、标准曲线建立等表明,该方法可检出101以上拷贝数的模板,只在RHDV有特异性扩增,标准曲线线性相关性好。实际应用结果显示,该方法对疑似RHDV病料检测的阳性率为74.8%,而普通RT-PCR方法检测的阳性率为65.5%。该方法的建立为开展该病的诊断、疫苗制备质控等提供了有效的技术保障。; 肖跃强谢金文徐二丹沈志强丁壮; 关键词：兔出血症病毒实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应

猪瘟病毒常用实验室诊断方法概述被引量：3: 2013年; 近年来,我国猪瘟的流行和发病特点发生了新的变化,转变为隐性感染和亚临床感染,出现了所谓"非典型猪瘟"、"温和型猪瘟"和"带毒母猪综合征",给兽医临床诊断增加了难度。随着分子生物学与现代免疫学技术的发展进步,猪瘟的分子生物学和血清学诊断方法不断完善。本文就近年来猪瘟的病毒分离鉴定、RT-PCR、环介导等温扩增、实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附试验、胶体金免疫技术等实验室诊断方法的最新研究进展以及各种检测方法的优缺点进行全面论述,旨在为实验室及养殖户寻找和建立适合自己的快速、准确的检测方法提供参考。; 李娇谢金文唐娜王金良苗立中沈志强; 关键词：猪瘟病毒

PPA-ELISA检测试剂盒在猪瘟抗体临床监测中的应用: 2013年; 近年来，我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化，转变为隐性感染和亚临床感染，临床表现也更加复杂，既有区域性流行，又有零星散发，既有高死亡率的急性症状，又有持续感染的温和性症状，出现了所谓“非典型猪瘟”、“温和型猪瘟”和“带毒母猪综合征”，病理剖检也常常不同于典型猪瘟的病理变化，给兽医临床诊断带来很大困难。尽管血清学抗体检测方法很难有效区分疫苗毒与野毒产生的抗体，但由于其具有使用方便、一次检测量大和血清容易保存等优点而被广泛应用，在猪瘟流行状态监测和流行病学调查等方面有着重要作用，也是免疫猪群抗体水平监测的主要方法，对疫苗免疫效果评价及免疫程序的制定均具有重要意义词。本研究应用猪瘟病毒PPA—ELISA抗体检测试剂盒对436份免疫猪血清样品进行检测，旨在了解猪瘟的疫苗免疫效果，合理指导猪瘟的防疫，为猪瘟的综合防控提供参考。; 祖立闯谢金文王金良苗立中李峰沈志强; 关键词：ELISA检测试剂盒猪瘟抗体亚临床感染 PPA 非典型猪瘟

谢金文

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