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王文秀: 作品数：131 被引量：248H指数：8; 供职机构：山东省滨州畜牧兽医研究院更多>>; 发文基金：现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金国家自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>

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巴马香猪氨基肽酶N截短基因的克隆与原核表达被引量：1: 2017年; 为获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)受体猪氨基肽酶N(pAPN)抗原,提取巴马香猪小肠绒毛上皮的总RNA,PCR扩增获得pAPN基因的主要抗原区片段,并将其克隆至原核表达载体pET-32a中,将重组质粒pET-32a-pAPN转化大肠埃希菌BL21,通过不同浓度的IPTG、不同诱导时间进行诱导表达,以确定目的蛋白表达的最佳条件。经SDS-PAGE和抗组氨酸标签的单抗进行Western blot检测重组蛋白在大肠埃希菌中的表达,结果显示,原核表达产物在诱导温度37℃、IPTG浓度为0.8mmol/L,诱导4h可获得最佳表达,产物分子质量约为45ku,获得的目的蛋白大小与预期一致。; 王文秀张艳王宝琴谢金文刘博沈志强; 关键词：克隆原核表达

一种驴场环境中微生物便携式快速采集装置: 本实用新型涉及微生物采集技术领域，尤其涉及一种驴场环境中微生物便携式快速采集装置，包括外壳，外壳的顶部连接有盖板，外壳内部滑动设有空气样本采集盒、水样采集盒、固体样本采集盒；空气样本采集盒内对称设有挡板，空气样本采集盒内...; 李本科李同斌崔平肖跃强王文秀刘晓萌王敬茹

鸭坦布苏病毒一步RT-PCR检测方法的建立与初步应用被引量：2: 2015年; 为建立一种鸭坦布苏病毒(DTV)快速检测方法,根据Gen Bank上DTV基因组序列,设计1对特异性检测引物,建立了DTV一步RT-PCR检测方法。该方法检测基因A型鸭甲肝病毒、基因C型鸭甲肝病毒、新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、鸭瘟病毒、减蛋综合征病毒均为阴性。检测的敏感性达3.78 pg RNA。DTV一步RT-PCR检测方法特异性好、敏感性高、重复性好,可用于DTV的分子流行病学调查和临床疾病诊断。; 祖立闯李娇高鹏王金良王文秀沈志强

我国猪肺炎支原体感染现状及实验室检测技术研究进展被引量：6: 2019年; 猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumonia of swine,MPS),又称猪地方流行性肺炎(porcine enzootic pneumonia,PEP),俗称猪喘气病,是由猪肺炎支原体(Mycoplasmal hyopneumonia,Mhp)引起的以咳嗽、气喘、生长发育不良、高发病率和低死亡率为主要特征的一种慢性、接触性呼吸道传染病,该病长期存在并严重威胁着我国养猪业健康发展[1-2]。; 李娇王文秀李峰沈志强; 关键词：猪肺炎支原体呼吸道传染病猪支原体肺炎猪喘气病养猪业

鸭甲肝病毒1型和3型一步法双重RT-PCR鉴别检测方法的建立及其初步应用: 2023年; 为建立一种快速鉴别不同基因型鸭甲肝病毒(DHAV)的检测方法,根据DHAV-1和DHAV-3特异性序列,分别设计合成鉴别检测引物,经一步法双重RT-PCR反应条件的优化,建立了鉴别DHAV-1和DHAV-3的一步法双重RT-PCR方法,并应用该方法对2016—2021年山东地区采集的58份临床病料样品进行病原学检测分析。结果显示:该方法能够分别扩增出DHAV-1的230 bp和DHAV-3的502 bp的特异性条带,而DTMUV、NDV、AIV-H9、FADV、DEV、GPV均无任何扩增条带。该方法最低可检测到0.62 ng DHAV-1 RNA和0.59 ng DHAV-3 RNA。该方法与病毒分离方法的符合率达100%。该方法检测58份临床病料样品,共检测出阳性样品27份,阳性率达46.55%,其中2016—2021年DHAV-1阳性率分别为33.33%,25.00%,22.22%,12.50%,11.11%,0.00%;DHAV-3阳性率分别为8.33%,16.67%,22.22%,37.50%,33.33%,37.50%。表明建立的DHAV-1和DHAV-3一步法双重RT-PCR鉴别检测方法具有良好的特异性、敏感性、准确性和临床适用性;同时发现山东地区DAHV的优势流行毒株已由DHAV-1转变为DHAV-3。; 祖立闯李娇苗立中郭璐王艳萍王文秀; 关键词：病原学流行毒株

猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp4抗体ELISA检测方法的建立被引量：3: 2019年; 克隆、表达了猪繁殖与呼吸综合征病毒DY株(GenBank:JN864948)的Nsp4蛋白,并利用Nsp4作为包被蛋白建立了ELISA检测方法。优化的Nsp4抗体ELISA检测方法的最佳抗原包被浓度为1μg/mL,血清最佳稀释度为1∶40,最佳封闭液为100mL/L牛血清,酶标二抗的最佳工作稀释度为1∶4000,最佳显色时间为37℃反应15min。用建立的ELISA检测方法和IDEXX ELISA检测试剂盒检测血清样品130份,总符合率为93.19%。Nsp4抗体ELISA检测方法的建立,可为PRRSV的抗体监测提供技术支持。; 刘磊马永彪王文秀李峰沈志强张松林; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白抗体检测

天然源性佐剂在肿瘤疫苗中的应用进展与未来发展趋势: 2023年; 肿瘤已成为导致死亡的主要原因,而肿瘤疫苗可增强患者免疫应答,成为治疗和预防的重要手段。然而肿瘤疫苗大部分为重组亚单位蛋白抗原,免疫原性差,难在免疫系统受损的患者中诱导强烈的免疫应答,从而影响肿瘤疫苗上市批准。疫苗中的核心成分佐剂可极大增强机体免疫应答的强度、速度和持续时间,从而成为开发理想肿瘤疫苗的关键所在。现大多肿瘤疫苗采用传统铝、MF59和AS系列等佐剂,且产品和专利均被国外大型公司垄断。我们对新型佐剂的长期研究发现,天然源性佐剂具有众多独特的优势,如具有来源广泛,生物相容性好,可促进树突状细胞的成熟和免疫细胞因子的分泌,显著增强肿瘤疫苗免疫应答等。本文对天然源性多糖、皂苷、黄酮类化合物、植物病毒样颗粒等重要佐剂在肿瘤疫苗中的应用及其未来发展方向进行综述,期望能为开发出具有我国自主知识产权的新型原创型疫苗佐剂奠定科学的理论基础。; 李树珍朱珲贾毅敏叶演陈婷孙存王文秀李杰平邹全明曾浩孙红武; 关键词：肿瘤疫苗疫苗佐剂皂苷

新型鸭病毒性肝炎病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：5: 2013年; 根据GenBank上登录的新型鸭病毒性肝炎病毒(N-DHV)基因组序列,设计合成内外2对引物,优化PCR反应条件,建立了检测新型鸭肝炎病毒的巢式RT-PCR方法。结果显示,该方法对Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)、新城疫病毒(ND)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、鸭病毒性肠炎病毒(DEV)、鸭细小病毒(DPV)的扩增结果均为阴性;该方法第1次扩增的敏感性是10pg,第2次扩增的敏感性是0.1pg,第2次比第1次扩增的敏感性高100倍。结果表明,建立的巢式RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,可以准确快速检测出极低含量的N-DHV,解决了新型鸭肝炎病毒不易在组织病料中检出困难的难题,为新型鸭病毒性肝炎的快速诊断、净化及深入研究奠定了基础。; 李娇王文秀祖立闯王艳苗立中沈志强; 关键词：巢式RT-PCR

兔肺炎双球菌病的病原分离鉴定及治疗被引量：5: 2014年; 2013年山东滨州市某兔场发生仔兔高病死率、母兔流产的疾病。为了诊断治疗该病,本试验采集病死兔肺脏进行病原的分离,通过病原分离、形态学观察、生理生化试验、溶血试验、药敏试验等试验,证实分离菌为肺炎双球菌。该菌具有α-溶血性,对青霉素、头孢吡肟、阿米卡星等药物敏感;动物回归试验成功复制出兔肺炎双球菌病,症状典型,病理剖检变化明显。根据临床症状和药敏试验结果,用青霉素等药物进行治疗,病情得到有效控制。; 莫玲王文秀刘吉山姚春阳庄金秋王艳韩文瑜沈志强

山东肉鸭主要细菌病调查与耐药性分析被引量：4: 2021年; 为了解山东肉鸭主要细菌病流行情况,本试验从山东菏泽、临沂、潍坊3个地区采取86个肉鸭养殖场发病病料进行细菌分离鉴定和耐药性进行分析。结果显示,大肠杆菌病阳性场68个,占比79.1%;浆膜炎阳性场78个,占比90.7%;沙门氏菌阳性场46个,占比53.5%;从3个地区共分离出埃希氏菌64种、里默氏杆菌34种、沙门氏菌53种。耐药性显示主要病原菌对20种抗菌药呈现多重耐药现象,埃希氏菌、里默氏杆菌呈现14重以上耐药,细菌性疾病控制愈发困难;沙门氏菌耐药以5~9重耐药为主。; 魏中锋樊祜卿王文秀朱峰亮姚静; 关键词：肉鸭细菌耐药性

王文秀

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