崔雪梅
- 作品数：35 被引量：117H指数：7
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划总后勤部科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 血管修复材料的一维拉伸实验研究被引量：8
- 2005年
- 目的:从生物力学的角度筛选适合进行血管修复的生物材料。方法:选择兔的深筋膜、腹膜,和去抗原处理的脱细胞颈动脉、冷冻干燥颈动脉和经过戊二醛处理的犬股动脉、腹膜等进行一维力学拉伸实验,以兔正常的颈动脉、静脉作为对照。结果:所有组材料的力学强度都明显大于静脉对照组,深筋膜和腹膜组又显著大于其他组;伸长率、伸长比、Lagrange张应变检测值以静脉对照组和脱细胞组最大,经过戊二醛处理组的最小;经过戊二醛处理的组织材料,滞后环变化小且不明显,伸展性降低,脆性增加,但对破坏载荷和Lagrange张应力影响不大。结论:脱细胞、冻干颈动脉的力学性质和粘弹性最接近于正常血管,正常深筋膜组次之,而经过戊二醛处理的组织材料,力学强度虽好,但粘弹性较差。
- 范恒华张伯勋梁向党汪爱媛崔雪梅赵斌孙赓胡成栋王岩
- 关键词：动脉血管材料脱细胞冷冻干燥戊二醛力学性质
- NH小鼠S180肉瘤热休克蛋白70的纯化被引量：3
- 2004年
- 目的 :建立热休克蛋白 70 (heatshockprotein 70 ,HSP70 ) /肽复合物分离、纯化和鉴定的技术平台。方法 :NH小鼠接种S180肉瘤细胞 ,将肉瘤组织热休克处理后经Sephacry1S 2 0 0HR分子筛、ConA和ADP柱序列层析进行分离 ,所得蛋白经电泳及Westernblot进行相对分子质量及性质鉴定 ,用Lowry标准曲线法对各阶段洗脱液进行蛋白定量分析 ,并计算蛋白得率。结果 :纯化蛋白经鉴定确系相对分子质量为 70× 10 3 的HSP70蛋白 ;每克湿重瘤组织可纯化约 5 0mgHSP70。结论 :用上述蛋白层析法可分离获得较纯的HSP70蛋白 ,为临床实际应用提供基础。
- 汤宇崔雪梅袁玫卢世璧朱克顺
- 关键词：肉瘤180动物实验
- 乳鼠心肌细胞的体外培养及生物学特性研究被引量：7
- 2007年
- 目的探讨乳鼠心肌细胞的体外培养方法并对其生物学特性进行观察。方法1～3日龄新生SD大鼠10只,用无酶消化法行含血清培养基原代心肌细胞培养,连续观察细胞生长及传代情况40天。α-横纹肌肌动蛋白抗体标记培养细胞,以流式细胞仪行心肌细胞纯度鉴定,Giemsa染色观察培养心肌细胞形态,吖啶橙-碘化丙啶(AO-PI)染色法检测培养细胞活性。记录培养心肌细胞总数,计算单个乳鼠心脏细胞产量。结果原代组织块和单个心肌细胞在接种后24～48h贴壁,其中部分出现搏动并持续至观察期末。培养细胞群鉴定心肌细胞纯度为94.1%,活细胞比例95.3%,95%可信区间(CI)为91.6%～99.0%。平均每个乳鼠心脏单细胞产量为3.3×106个,95%CI为2.1×106～4.5×106个。结论无酶消化法培养的乳鼠心肌细胞纯度、活力及产量能够满足心肌细胞研究的需要。
- 何蕾张莉黄靖香赵斌崔雪梅宋光江朝光
- 关键词：流式细胞术生物学鉴定法心肌细胞
- 小鼠移植性S180肉瘤模型的建立及温和加热对热休克蛋白70表达的影响被引量：5
- 2004年
- 目的 :研究NH小鼠S180肉瘤细胞移植后肿瘤模型生长特点 ,以及热休克蛋白 (heatshockproteinsHSPs)70在温和加热 (4 2℃ )不同时段表达变化。方法 :不同剂量S180肉瘤细胞于NH小鼠背部皮下接种 ,观察肿瘤组织生长规律 ,取部分肉瘤细胞进行热休克处理 2、 4、 6、 8、 10、 12h后 ,进行HSP 70免疫组化观察 ,结果 :肿瘤发生率10 0 % ,不同剂量组的肿瘤生存期限差异有显著意义 ,肿瘤生长大小无显著差异 ;对HSPs的免疫组化观察表明 :热休克处理后HSP 70阳性增强 ,以 6h后最明显 ;8h后细胞发生皱缩、溶解。结论 :此模型是HSPs/肽复合物提取、纯化中稳定的动物肿瘤疫苗治疗模型 ;分离、纯化HSP 70时将肿瘤组织热休克处理 (4 2℃ ) 6h即可。
- 汤宇崔雪梅袁玫卢世璧黄靖香孙明学
- 关键词：肿瘤模型热休克蛋白70免疫组化
- 关节软骨源性微载体与软骨细胞的体外相容性被引量：8
- 2005年
- 目的评估人关节软骨源性微载体与人软骨细胞的体外粘附性。方法切取人关节软骨,对之冷冻干燥后,经粉碎机粉碎,筛取150～200μm大小的软骨粒,经0.25%的胰酶在37℃消化24h,再经1%的化学去污剂TritonX-100震荡72h,蒸馏水清洗48h后,在冻干机内再次冻干12h,经钴60灭菌后,与第6代人软骨细胞共同培养,分别在倒置显微镜下和电镜下观察即刻、2h、8h、30h的粘附情况。结果倒置显微镜下见软骨粒变为绒球状或毛刷状,将此微载体加入培养基后,即见有呈圆球形的软骨细胞与微载体相粘附,2h见微载体上粘附了大量软骨细胞,仍呈圆球形,8h见微载体上粘附的大量软骨细胞仍呈圆球形,而瓶底贴附的软骨细胞已呈现为成纤维细胞样形状,30h见软骨细胞-微载体复合体已沉降贴附于培养瓶底部,软骨细胞增殖明显并向周围伸展,而电镜下观察见粘附于微载体上的软骨细胞仍维持了软骨细胞的形状。整个观察期间均见软骨细胞增殖良好,提示制备的关节软骨源性微载体对软骨细胞无毒害作用。结论关节软骨源性微载体与软骨细胞的体外相容性良好。
- 张建党卢世璧袁玫黄靖香赵斌孙明学崔雪梅许文静
- 关键词：软骨细胞软骨细胞增殖体外相容性骨源性TRITON镜下观察
- HSPs/肽复合物疫苗免疫治疗小鼠肉瘤的初步实验观察
- 2006年
- 目的:观察热休克蛋白(heat shock pro-teins HSPs)/肽复合物对Balb/C小鼠S180移植性肉瘤模型免疫治疗的不同效果。方法:两种不同剂量的HSPs/肽复合物疫苗分别对Balb/C小鼠S180肉瘤模型进行预防性的免疫治疗实验观察。结果:混合HSPs/肽复合物蛋白组(含有HSP60、70和GP94)和纯化HSP70/肽蛋白组均可以明显降低成瘤率及抑制肿瘤生长速度、延长小鼠生存时间;部分小鼠甚至可以观察到对生长瘤体的免疫排斥过程,达到完全无瘤健康长期生存。结论:1)HSP70/肽、混合HSPs/肽在小鼠移植性S180肉瘤模型中有良好的免疫预防效果,以混合HSPs/肽效果最好。2)只经过简单纯化后的混合HSPs/肽复合物蛋白具有能提高蛋白产量、缩短纯化时间、减少对蛋白以及携带抗原多肽的破坏等优点,而且其免疫治疗效果优于纯化的HSP70/肽疫苗,可望在临床有广泛的应用前景。
- 汤宇崔雪梅袁玫卢世璧黄靖香陈继营
- 关键词：蛋白纯化肿瘤模型
- 化学去细胞神经同种异系(体)移植的免疫学反应被引量：5
- 2006年
- 目的:观察化学去细胞神经同种异系(体)移植的免疫学反应,研究化学萃取去细胞处理对同种异系(体)神经抗原性的影响。方法:在W istar大鼠的背部和腹部皮下植入取自SD大鼠的化学去细胞神经,对照组植入新鲜同种异系(体)神经。用ELISA法测定大鼠血清内的抗体滴度。免疫组化染色检测各时间点异系(体)神经及周围组织中T淋巴细胞的浸润程度。结果:实验组和对照组2周、4周、8周、12周的大鼠血清均没有呈现阳性的抗体滴度。化学去细胞同种异系(体)神经移植组植入后2和4周时CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的浸润程度明显轻于未去除细胞的新鲜同种异系(体)神经移植组。8和12周时埋入的新鲜同种异系(体)神经已经被受体吸收,而去细胞同种异系(体)神经移植组的植入组织保持原形态,周围仅见极少量淋巴细胞浸润。结论:化学萃取去细胞同种异系(体)神经的抗原性明显降低,植入体内后免疫排斥反应不明显。
- 唐金树袁玫赵庆孙明学赵斌许文静崔雪梅卢世璧
- 关键词：移植免疫学T淋巴细胞
- 新型脱细胞骨基质-壳聚糖复合支架的生物相容性研究被引量：2
- 2012年
- [目的]评价新型脱细胞骨基质-壳聚糖(ABECM/CS)骨组织工程复合多孔支架的生物相容性和安全性,为临床应用提供实验依据。[方法]采用联合脱细胞方法对猪股骨进行处理后制备脱细胞骨基质/壳聚糖骨组织工程复合支架。分离、培养兔骨髓间充质干细胞传代后进行实验。采用MTT法观察材料浸提液于1、3、5、7 d时进行细胞毒性实验观察细胞的活性;将材料浸提液与稀释血混合离心后观察红细胞溶血情况,检测OD值计算相对溶血率;将材料浸提液经静脉注入兔体内进行热原实验,在规定时间内观察兔体温变化。[结果]细胞毒性实验显示,培养1、3、5、7 d后各时间段内三组OD值两两比较(P﹥0.05)无显著差异,表明材料无毒性。在溶血实验中观察实验材料的溶血率为3.0%,在标准值溶血率5%范围内,提示无溶血现象发生。热原实验结果显示每只兔体温升高均低于0.6℃,且3只兔体温升高总度数低于1.4℃,符合热原检测规定,复合材料无致热作用。[结论]经联合脱细胞处理制备的ABECM/CS复合支架无细胞毒性、无溶血反应、无热原性,具有良好的生物相容性和安全性,可作为构建组织工程骨的支架载体材料。
- 刘昊张永刚郭全义黄靖香谢朝金宋凯崔雪梅
- 关键词：脱细胞骨基质生物相容性骨组织工程
- 四种热休克蛋白／肽混合物预防小鼠肉瘤发生、发展的作用研究
- 2009年
- 目的探讨四种热休克蛋白（heat shock protein，HSP）／肽混合物防治小鼠肉瘤的作用及其机制。方法小鼠S180肉瘤及MCA．207肉瘤组织，分别剪碎，裂解，离心，取上清上Sephacryl S-200HR层析柱，截取相对分子质量相当于50×10^3-200×10^3段，再经Con A、ADP亲和层析，SDS—PAGE电泳及Western—blot鉴定。分别用HSP-70、HSP-60及热休克蛋白／肽混合物（HSP-70、HSP-60、HSP-110、Gp-96）免疫小鼠，观察无瘤生存率、抑瘤生长率及存活期。用流氏细胞仪检测“T”细胞亚群，ELISPOT检测IFN-1，乳酸脱氢酶检测混合淋巴细胞杀伤作用等方法观察免疫功能的变化。结果HSP-70、HSP-60及热休克蛋白／肽混合物均有预防性免疫治疗效果，热休克蛋白／肽混合物防治S180肉瘤达到41.2％的无瘤长期生存，抑瘤生长率为83．3％，优于单一的HSP亚型。热休克蛋白／肽混合物防治MCA肉瘤达到50．0％的无瘤长期生存，抑瘤生长率为79．0％；多种方法检测表明热休克蛋白／肽混合物疫苗可诱发小鼠的细胞免疫功能。结论热休克蛋白／肽混合物可诱发机体细胞的免疫功能，其抑制肉瘤生长效果优于单一的HSP-70或HSP-60，具有临床应用前景。
- 彭江郭全义袁玫崔雪梅汤宇眭翔陈继营许文静卢世璧
- 关键词：肉瘤免疫疗法疫苗热休克蛋白质类
- 生物活性材料成骨活性的体外测定
- 2008年
- 目的:运用动物体内实验的方法测定生物活性材料成骨活性有较多缺点,为快速有效地评价成骨活性的生物材料,探索一种新的体外测定成骨活性的方法。方法:实验于2004-01/2005-05在解放军总医院骨科研究所完成。取羊脱钙骨基质和复合材料(粗制羊骨蛋白+羊脱钙骨基质+牛腱Ⅰ型胶原)两种活性材料分别做免疫组织化学染色检查是否含有骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)。并取脱钙骨基质、复合材料、rhBMP-2、3种材料与小鼠C2C12细胞共培养72h后,用1%Triton将细胞裂解,取细胞裂解液测定碱性磷酸酶和总蛋白。利用所测定的碱性磷酸酶和总蛋白吸光度比值代表单位数量的细胞中所含碱性磷酸酶的含量。同时设立阴性对照(单纯细胞不加任何材料)。结果:脱钙骨基质和复合材料中均含有BMP-2。用3种材料刺激C2C12细胞后,测定C2C12细胞中碱性磷酸酶含量高于阴性对照(P<0.05)。rhBMP-2刺激C2C12细胞产生的碱性磷酸酶含量较其他材料明显增高(P<0.001)。结论:体外测定生物材料成骨活性在实际应用中具有操作简便、效果可靠的特点。
- 姜传杰卢世璧孙明学袁玫张莉崔雪梅赵斌
- 关键词：成骨活性体外生物材料碱性磷酸酶
