宫澜
- 作品数：10 被引量：16H指数：2
- 供职机构：上海市儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 反义RNA对β-地中海贫血IVS-2-654C→T突变基因异常剪接的恢复作用被引量：1
- 1998年
- 构建了一个特异性针对β－地中海贫血基因（IVS－2－654C→T，β654）mRNA前体的异常剪接位点的反义RNA表达载体，它能在体外非细胞转录和剪接系统、HeLaβ654细胞和培养的β654红系细胞中，有效地降低β654突变mRNA异常剪接产物．在体外转录和剪接系统中，正常剪接的mRNA水平[β／（β＋β*）]由0．25上升到0．60；在HeLaβ654细胞中，β／（β＋β*）水平由0．07上升到转染后15d的0．43；在β654红系细胞中，β654／β654细胞的β／（β＋β）水平由0．19上升到转染后8d的0．58，β654／β41～42细胞由0．02上升到0．38，β654／βA细胞则由0．45上升到0．83．相应的，β654／β654红系细胞的珠蛋白肽链生物合成比例（β／α）由0．16上升到转染后8d的0．52；β654／β41～42细胞由0．05上升到0．36；β654／βA细胞由0．42上升到0．81．用或不用反义RNA处理对βA／βA红系细胞影响不大，对照的非特异性反义RNA片段无论在细胞内外都对β654mRNA前体剪接无显著影响．结果表明该反义RNA能有效地在非细胞系统和培养细胞内抑制β654mRNA前体的异常剪接，部分恢复其正常剪接途径，从而改善地中海贫血细胞珠蛋白肽链合成的不平衡状况．这为β－地中海贫血的基因治疗提供了一种可能途径．
- 曾溢滔顾小锋陈云弟宫澜任兆瑞黄淑帧
- 关键词：Β-地中海贫血剪接基因治疗反义RNA突变基因
- 构建反义RNA表达载体对β地中海贫血进行基因治疗的研究
- 黄淑帧任兆瑞曾溢滔顾小锋宫澜陈云弟盛敏陈美珏
- 1991年1月～2001年8月31日，由国家“863”项目及国家自然科学基金项目资助，进行了研究。以中国人最常见的β654剪接缺陷型β地中海贫血(β地贫)突变基因为材料，进行了反义核糖核酸(RNA)基因治疗β地贫的研究。...
- 关键词：
- 关键词：地中海贫血基因治疗RRNA基因表达遗传学
- 可随HeLa细胞传代而传递的反义RNA真核表达系统
- 1999年
- 为研究反义ＲＮＡ表达载体在细胞内的稳定性，构建了一个特异性针对β地中海贫血基因ＩＶＳ－２－６５４Ｃ→Ｔ（β６５４）突变ｍＲＮＡ前体异常剪接位点的反义ＲＮＡ表达载体ｐＣＭＶＡ．ｐＣＭＶＡ转染β６５４ＨｅＬａ细胞后，通过ＲＮＡ定量检测反义片段对β６５４ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用；再从转染后传代５次并冰冻保存１年的ＨｅＬａ细胞中回收反义表达载体，转染另外的β６５４ＨｅＬａ细胞，同样检测它对β６５４ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用．结果显示该载体在细胞传代前后均能阻断β６５４异常剪接，部分恢复其正常剪接途径：用回收的ｐＣＭＶＡ转染β６５４ＨｅＬａ细胞后，正常剪接的βｍＲＮＡ水平［β／（β＋β＊）］由０．０５上升到处理后１５ｄ的０．４８，而２种对照质粒处理后对这一比值影响不大．表明ｐＣＭＶＡ可在ＨｅＬａ细胞中随着细胞传代而传递下去。
- 陈云弟顾小锋宫澜陈巍陈美珏黄淑帧曾溢滔
- 关键词：Β地中海贫血反义RNA剪接基因治疗
- 反义RNA对地中海贫血红系细胞β-珠蛋白mRNA异常剪接的纠正作用被引量：2
- 1999年
- 目的研究反义ＲＮＡ对β地中海贫血红系细胞ＩＶＳ２６５４Ｃ→Ｔ（β６５４）突变ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用。方法构建特异性针对β６５４ｍＲＮＡ前体异常剪接位点的反义ＲＮＡ表达载体，和不针对上述位点的反义对照载体，转染培养的β６５４红系细胞后，抽提总ＲＮＡ；以ＲＴＰＣＲ法作ｍＲＮＡ定量，检测正常和异常剪接的β珠蛋白ｍＲＮＡ产物的比例［β／（β＋β）］；以珠蛋白肽链体外生物合成分析红系细胞中β和α珠蛋白肽链合成的比例（β／α）。结果在ＲＮＡ水平，β６５４／β６５４纯合子的β／（β＋β）值由０．１９（转染后第０天）上升到０．５８（第８天），β６５４／βＡ杂合子由０．４５（０天）上升到０．８３（第８天）；在珠蛋白肽链水平，β６５４／β６５４细胞的β／α值由０．１６（０天）上升到０．５２（第８天），β６５４／βＡ细胞由０．３９（０天）上升到０．８４（第８天）。反义ＲＮＡ处理βＡ／βＡ红系细胞以及对照ＲＮＡ处理这３类红系细胞，对其ｍＲＮＡ剪接和珠蛋白肽链合成均影响不大。结论特异性反义ＲＮＡ能抑制红系细胞β６５４ｍＲＮＡ前体的异常剪接，部分恢复其正常剪接途径。
- 陈云弟顾小锋宫澜宫澜黄淑帧任兆瑞
- 关键词：Β-地中海贫血反义RNA贫血MRNAΒ-珠蛋白
- 线粒体DNA突变相关疾病的基因治疗被引量：7
- 1997年
- 越来越多的疾病被发现与线粒体DNA突变有关，这些疾病危及各个年龄层次，病人症状往往呈进行性加重，最后严重致残或致死。在目前尚无理想治疗方案的情况下，基因治疗却展现了其成为有效治疗途径的潜力。本文就线粒体DNA突变相关疾病分子机理及其基因治疗的几种可能的途径进行了初步的探讨。
- 宫澜曾溢滔
- 关键词：线粒体DNA基因突变线粒体疾病基因治疗
- 反义核酸对β-地中海贫血基因(IVS-2-654C→T)剪接缺陷抑制作用的研究被引量：2
- 1997年
- 应用体外转录和体外剪接系统，以体外转录产生的特异性反义RNA封闭IVS－2－654→T突变基因中3’隐匿剪接位点和5’异常剪接位点，使之失去活性，以减少异常加工的mRNA，且部分恢复了正常剪接途径，其正常剪接mRNA的水平［β／（β十β）］从处理前的0．25上升到处理后的0．46—0．61。研究结果提示了应用反义核酸临床治疗β－地贫（IVS－2－654C→T突变）的可能性。
- 宫澜孙琼任兆瑞黄淑帧曾溢滔
- 关键词：反义核酸地中海贫血基因治疗
- 反义RNA对培养的红系细胞βIVS-2-654C→T基因剪接缺陷的纠正被引量：1
- 1997年
- 目的观察反义ＲＮＡＡ２对培养的红系细胞中βＩＶＳ－２－６５４Ｃ→Ｔ（β６５４）突变基因剪接异常的纠正作用。方法将构建的反义核酸真核表达载体通过脂质体介导转染培养的成人红系细胞（ｈＡＥ），应用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量测定β珠蛋白ｍＲＮＡ及微量珠蛋白生物合成技术分析转染前后ｈＡＥ细胞内珠蛋白基因表达的变化。结果β６５４／β４１－４２基因型ｈＡＥ细胞内，正常剪接的βｍＲＮＡ占总βｍＲＮＡ的比例从转染前的０．０２４上升到第８天的０．３８０；β６５４／βＡ基因型ｈＡＥ细胞从０．３９６上升到０．８８３；与此相应，新合成的β珠蛋白链也出现升高：β６５４／β４１－４２基因型ｈＡＥ细胞β／α比值从０．０５２升至０．３５９，β６５４／βＡ基因型ｈＡＥ细胞从０．６２４升至０．８２０；正常人ｈＡＥ细胞珠蛋白基因表达不受反义ＲＮＡ的影响。结论反义ＲＮＡＡ２能有效地纠正ｈＡＥ细胞内β６５４ｍＲＮＡ前体异常剪接，进而明显地升高β珠蛋白链的合成，为β６５４地中海贫血的反义ＲＮＡ治疗提供了科学依据。
- 顾小锋宫澜张威冰任兆瑞黄淑帧曾溢滔
- 关键词：Β地中海贫血反义RNA突变基因剪接
- 构建反义RNA表达载体对β-地中海贫血进行基因治疗研究
- 2003年
- β地中海贫血(简称β地贫)是常见的、严重危害人民身体健康的遗传性血液病,在我国南方(两广地区)的发病率约为1%.该病目前尚无有效的根治方法,患者只有依赖定期输血才能维持其生命,但输血过度将引起铁质大量沉积,最终导致心力衰竭而过早地夭亡.因此,探索β地贫治疗途径是疾病防治工作的一项重要任务.
- 黄淑帧任兆瑞曾溢滔顾小锋宫澜陈云弟盛敏陈美珏
- 关键词：基因治疗反义RNA
- 反义核酸对β-地中海贫血基因(IVS-2-654 C→T)剪接缺陷抑制作用的研究被引量：3
- 1997年
- β-珠蛋白基因第2个内含子(IVS-2)中第654位核苷酸(nt654)C→T剪接缺陷型突变是中国人最常见的β-地中海贫血(简称β-地贫)突变类型之一.我们先前的研究表明,该突变在IVS-2第654位(nt654)上出现的单碱基取代产生了一个新的 GT二核苷酸,它联同旁侧序列构成了一个5＇异常剪接位点,同时还激活了IVS-2第579位(nt579)处3＇隐匿剪接位点,从而将 IVS-2nt580至 nt652之间一段73bp内含子序列作为额外的外显子插入外显子2和外显子3之间,产生了异常的β-珠蛋白mRNA,导致β^+-地贫.为了探讨反义核酸治疗β-地贫IVS-2-654 C→T突变的可能性,我们应用体外转录和体外剪接系统,以体外转录产生的特异反义RNA封闭IVS-2-654 C→T突变基因中3＇隐匿剪接位点和5＇异常剪接位点,使之失去活性,从而减少异常加工的mRNA并且部分恢复了正常剪接途径.
- 宫澜孙琼任兆瑞黄淑帧曾溢滔
- 关键词：反义核酸地中海贫血基因治疗
- 反义核酸真核表达载体的构建及其对重组HeLa细胞H654中IVS-2-654C→T突变β-珠蛋白基因剪接缺陷的抑制作用
- 1998年
- 在原工作的基础上 ,将非细胞系统中证明有效的反义片段通过高效真核表达载体 pCDNA3导入能稳定表达IVS 2 6 5 4C→T突变 β 珠蛋白基因的重组HeLa细胞 (H6 5 4)中 .结果显示 ,转染后第 3天 ,H6 5 4细胞内正常剪接的β 珠蛋白mRNA水平 ( β/( β + β ) )明显上升 ,从 0 0 7上升到 0 2 2 ,并维持到第 1 5天 ,最高达到0 43.实验表明构建的反义片段真核表达载体在细胞中能稳定转录反义RNA并有效抑制IVS 2 6 5 4C→T突变β 珠蛋白基因的异常剪接 。
- 宫澜顾小锋王敏黄淑帧曾溢滔
- 关键词：反义核酸地中海贫血HELA细胞
