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慢病毒载体介导的RNAi双敲除ABCG2和UGT1A1的Caco-2细胞模型被引量：1: 2013年; 目的:构建以Caco-2细胞为研究对象,由慢病毒载体介导ABCG2和UGT1A1基因RNAi干扰的肠道药物吸收和代谢模型。方法:应用慢病毒载体介导的RNAi技术敲除Caco-2细胞的ABCG2和UGT1A1基因,构建双RNAi干扰ABCG2和UGT1A1的Caco-2细胞系。应用RT-PCR,Real-time PCR,Western blotting等方法检测ABCG2和UGT1A1在mRNA及蛋白水平的表达。然后选择干扰高表达细胞株,连续传代监测干扰相应干扰基因的表达变化。结果:成功构建了慢病毒载体介导的RNAi双干扰Caco-2细胞模型,慢病毒ABCG2和UGT1A1单基因干扰效率分别为75%和88%;分组先RNAi ABCG2后RNAiUGT1A1的双基因RNAi干扰效率分别为72.3%和85.7%;分组先RNAi UGT1A1后RNAi ABCG2的双基因干扰效率分别为69.7%和88.7%;ABCG2与UGT1A1基因的RNAi干扰先后顺序与最终双干扰效果无显著性差异(P>0.05)。Western blotting方法验证ABCG2与UGT1A1的蛋白水平表达也分别相应地明显减少。结论:第一次应用慢病毒载体在Caco-2细胞上同时干扰ABCG2和UGT1A1基因表达。为研究肠道中ABCG2和UGT1A1对口服药物或外源化合物吸收和代谢的联合作用提供可靠细胞模型。; 龚淑敏李光明董莉真吴志敏程彬张斌朱泽; 关键词：慢病毒载体 ABCG2 UGT1A1 CACO-2细胞 RNAI

人参皂苷Rg3调控ERK通路抑制Lewis小鼠肺癌生长的研究被引量：5: 2014年; 目的:通过人参皂苷Rg3对Lewis肺癌小鼠模型及其细胞模型的抑制研究,探讨ERK信号通路及相关基因在抗肿瘤中的作用。方法:建立Lewis肺癌小鼠荷瘤动物模型,通过口饲法给予定量人参皂苷,连续3周,处死动物后,比较各组荷瘤小鼠肿瘤体积。含药动物血清作用于Lewis肺癌细胞,MTT法检测各组细胞抑制效率。Realtime-PCR法检测荷瘤鼠Dusp6、Bax、Bcl-2基因表达变化,Western blot法检测荷瘤鼠ERK、p-ERK蛋白表达变化。结果:人参皂苷Rg3对Lewis肺癌细胞及荷瘤小鼠的肿瘤生长均有明显抑制作用(P<0.01)。Western blot显示ERK在Rg3处理组中的表达明显比对照组低,Realtime-PCR结果显示,在动物肿瘤标本中,Dusp6、Bax基因药物处理组比对照组高表达(P<0.01),Bcl-2基因药物处理组比对照组低表达(P<0.01)。结论:人参皂苷Rg3在Lewis肺癌体内外模型中具有一定的肿瘤抑制效果,ERK信号通路及Dusp6基因与Rg3的抑制作用有关,Rg3诱导的细胞凋亡也参与了抗肿瘤的作用。; 董莉真吴志敏朱泽李光明; 关键词：人参皂苷RG3 ERK LEWIS肺癌小鼠

基于慢病毒载体系统构建重组JSRV-NM假病毒被引量：1: 2014年; 目的采用慢病毒质粒结构重组JSRV-NM假病毒,克服JSRV-NM病毒只能通过绵羊支气管穿刺接种扩增,不能通过体外细胞培养扩增的问题。方法采用慢病毒高效包装系统pMD.G、pCMV-HIV△8.2和pHIV-eGFP,以JSRV-NM病毒的env包膜质粒pCMVJSRV-NM替代VSV-G病毒的包膜质粒pMD.G,转染293T细胞,复制、包装并产出重组的JSRV-NM假病毒。用real-time PCR检测WPRE表达来测定假病毒的滴度,用接种24孔板的293T细胞检测假病毒感染力。结果成功重组了基于慢病毒质粒结构的JSRV-NM假病毒,可超速离心浓缩成高滴度(1×108TU/mL)的病毒,Lv-JSRV-NM包膜与Lv-VSV-G包膜按感染复数(MOI)=3的比例感染Hela细胞具有相同的感染能力。结论基于慢病毒质粒构建的JSRV-NM假病毒,能够在293T细胞中复制和扩增,产出的假病毒具有稳定性、感染力和安全性,符合二级生物实验室安全的要求。; 龚淑敏李光明吴志敏董莉真程彬张斌朱泽; 关键词：假病毒慢病毒载体 ENV基因

人参皂苷Rg3调控ERK信号通路对肺癌抑制及预防的研究: 目的:　　1、通过人参皂苷Rg3对Lewis肺癌小鼠模型及其细胞模型的作用研究，探讨ERK信号通路及相关基因在抗肿瘤中的抑制作用。　　2、通过人参皂苷Rg3对A/J小鼠肺癌动物模型的作用研究，探讨人参皂苷Rg3对肺癌的预...; 董莉真; 关键词：人参皂苷RG3 肺癌信号通路动物模型; 文献传递

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董莉真