胡孝辉
- 作品数：13 被引量：37H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第三人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会科研基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 光老化作用对体外人皮肤成纤维细胞的影响被引量：3
- 2011年
- 目的 建立体外分离培养人皮肤成纤维细胞的光老化模型,观察研究中波紫外线对人皮肤成性纤维细胞的影响.方法 使用组织块法分离培养原代人皮肤成纤维细胞,并用免疫荧光特异性标记物鉴定证实,选择不同剂量的紫外线照射人皮肤成纤维细胞后,倒置显微镜观察细胞形态学的改变;β-半乳糖苷酶（β-gal）细胞衰老试剂盒染色;MTT检测不同剂量的紫外线照射对成纤维细胞增殖能力影响;western blot检测衰老标志物P16蛋白的表达.结果 组织块法成功分离获得人皮肤成纤维细胞,用20～60mJ/cm2 UVB单次照射后,可以成功诱导人皮肤成纤维细胞出现衰老形态学的改变,其增殖能力降至正常对照组的一半左右,β-gal染色阳性率约90%,衰老相关蛋白P16表达随时相明显升高.结论 20～60mJ/cm2中波紫外线照射人皮肤成纤维细胞可诱导人皮肤成纤维细胞衰老,为今后皮肤光老化的体外研究提供了参考.
- 胡孝辉高丰厚方勇
- 关键词：人皮肤成纤维细胞光老化
- 中波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞衰老及机制研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨中波紫外线(UVB)对人皮肤成纤维细胞的诱导衰老作用及可能机制。方法使用组织块法分离培养原代人皮肤成纤维细胞,通过观察不同剂量UVB照射后的细胞形态学改变以及β-半乳糖苷酶(β-gal)细胞衰老染色情况,确定后续实验诱导皮肤成纤维细胞衰老的UVB单次照射剂量。于经确定剂量UVB照射后的不同时点(12、24、48、72h)收集细胞及其细胞培养上清液,Western blotting检测诱导衰老的皮肤成纤维细胞衰老相关蛋白P16表达;ELISA法检测诱导衰老细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及基质金属蛋白酶1、3(MMP1、MMP3)表达。结果经40mJ/cm2 UVB单次照射的人皮肤成纤维细胞呈现典型的衰老细胞形态学改变,β-gal细胞衰老染色阳性细胞百分比为(88.75±5.32)%,确定诱导衰老UVB单次照射剂量为40mJ/cm2。Western blotting显示,诱导衰老皮肤成纤维细胞P16蛋白表达随UVB照射时间的延长而明显升高;ELISA法检测发现诱导衰老细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达随UVB照射时间的延长而明显减少,MMP1和MMP3表达则随UVB照射时间的延长而显著增加。结论 UVB照射能诱导人皮肤成纤维细胞发生衰老,其机制可能与细胞胶原合成减少而降解增加有关。
- 胡孝辉高丰厚方勇
- 关键词：人皮肤成纤维细胞中波紫外线
- 单核巨噬细胞集落刺激因子对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响被引量：12
- 2010年
- 目的:研究单核巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte/macrophage colony-stimulating factor,GMCSF)对人皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,探讨其促进创面愈合的机制并为临床准确定量应用该因子促进创面愈合提供理论依据。方法:分别应用浓度为0、25、50、75、100、150ng/mlGMCSF培养液孵育离体培养的人皮肤成纤维细胞,作用24h后四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞的活性。选择最适浓度GMCSF干预细胞,用流式细胞仪检测成纤维细胞的周期变化;应用ELISA检测上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成情况。结果:GMCSF在浓度为25～100ng/ml之间对人皮肤成纤维细胞有明显的促增殖作用,其中以50/ml最为显著;成纤维细胞在最适浓度GMCSF干预24h后,细胞大多处于DNA合成前期和合成期;与空白组比较,GMCSF组Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌明显增加(P<0.01),且Ⅰ、Ⅲ型胶原比值下降(P<0.01)。结论:GMCSF在浓度为25～100ng/ml对人皮肤成纤维细胞有明显的促增殖作用,且能刺激成纤维细胞合成大量Ⅰ、Ⅲ型胶原,这可能是其加速创面愈合的机制之一。
- 李晓光方勇姚敏胡孝辉徐鹏俞为荣倪涛
- 关键词：成纤维细胞创面愈合细胞增殖
- 糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合过程中神经肽P物质的表达被引量：7
- 2009年
- 目的研究糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面中神经肽P物质(SP)表达及变化规律。方法84只Wistar大鼠,随机分为糖尿病组和对照组,每组42只。糖尿病组腹腔内一次性注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病大鼠模型,对照组给予同等剂量的无菌柠檬酸缓冲液腹腔注射。所有大鼠麻醉后背部制成直径2 cm的深Ⅱ度烫伤创面。分别于烫伤前及烫伤后的不同时相采集创面组织标本,测算创面愈合率,免疫组化染色分析创面SP染色阳性区域面积,ELISA法创面组织中SP表达变化。结果烫伤后第7天起,糖尿病组各时相点的创面愈合率均显著低于对照组(P<0.01)。糖尿病组各时相点创面SP染色阳性区域面积均显著低于对照组,其中以烫伤后7 d时尤为显著,为(1 350.93±99.28)μm^2vs(1 715.86±103.41)μm^2(P<0.01);糖尿病组各时相创面组织中SP表达均明显低于对照组,其中以烫伤后7 d时最为显著,为(114.04±9.96)vs(143.39±8.94)(P<0.01)。结论糖尿病大鼠创面组织中SP表达明显减少,可能是其创面难愈的原因之一。
- 倪涛方勇毛志刚杨鹏高胡孝辉
- 关键词：P物质创面愈合烫伤糖尿病
- 去细胞羊膜负载毛囊干细胞修复全层皮肤缺损的实验研究
- 目的 了解利用去细胞羊膜负载毛囊干细胞修复裸鼠全层皮肤缺损的效果. 方法 体外分离、鉴定、培养扩增人毛囊干细胞，绿色荧光蛋白标记后接种于去细胞羊膜上.同时制作裸鼠全层皮肤缺损模型，将负载毛囊干细胞的去细胞羊膜移植至裸鼠全...
- 胡孝辉杨鹏高高丰厚方勇
- UVB诱导人皮肤成纤维细胞中beta-catenin基因的变化研究被引量：3
- 2010年
- 目的:观察中波紫外线(UVB)诱导人皮肤成纤维细胞中β-catenin及其下游基因c-myc的变化,探讨其在紫外线诱导光老化和肿瘤发生中的作用。方法:使用组织块法分离培养原代成纤维细胞,使用第2～8代人皮肤成纤维细胞进行紫外线处理,倒置荧光显微镜观察其形态学改变,β-gal半乳糖苷酶细胞衰老试剂盒染色衰老细胞、western blot检测衰老相关蛋白P16的表达,western blot检测紫外线处理人皮肤成纤维细胞各时相点β-catenin、c-myc蛋白表达水平,RT-PCR检测紫外线处理人皮肤成纤维细胞各时像点β-catenin、c-mycmRNA水平的表达变化。结果:40mJ/cm2UVB单次照射后可以诱导人皮肤成纤维细胞衰老,β-gal衰老染色阳性率达到约90%,衰老相关基因P16蛋白表达明显升高,β-catenin、c-myc蛋白表达水平和mRNA水平照射后较未照射组均明显降低。结论:紫外线UVB处理人皮肤成纤维细胞可以诱导其发生衰老改变,衰老细胞中β-catenin、c-myc表达水平明显降低,这些结果与皮肤黑色素细胞瘤相关基因改变的研究相近,为以后皮肤恶性肿瘤的研究提供了线索。
- 胡孝辉高丰厚方勇
- 关键词：人皮肤成纤维细胞光老化BETA-CATENINC-MYC
- β-catenin基因转染毛囊干细胞的实验研究
- 严重皮肤缺损如严重大面积烧伤创面的修复仍是目前临床工作的重点和难点。毛囊干细胞因其具有高增殖和多向分化的潜能备受创伤修复及组织工程领域学者的关注。近年来，关于毛囊干细胞的研究取得了一定的进展。但是，迄今为止距离将其作为大...
- 杨鹏高方勇胡孝辉
- 关键词：Β-CATENIN基因毛囊干细胞烧伤创面修复
- ERK通路在单核巨噬细胞集落刺激因子调控成纤维细胞血管内皮生长因子表达中的作用被引量：7
- 2010年
- 目的研究单核巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)对成纤维细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,初步探讨细胞外信号调节激酶(ERK)通路对此过程的调控作用。方法在对数生长期人皮肤成纤维细胞培养液中添加GMCSF和(或)ERK通路特异性抑制剂(PD98059)进行干预,实验分为空白对照组、PD98059组、GMCSF组及PD98059+GMCSF组。收集各组细胞及培养上清液,采用RT-PCR技术和Western blotting方法分别检测各组人皮肤成纤维细胞内VEGFmRNA和蛋白表达;ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白分泌水平。结果与空白对照组和PD98059组比较,GMCSF组人皮肤成纤维细胞内VEGFmRNA和蛋白相对表达量以及细胞培养上清液中VEGF蛋白质量体积浓度明显升高(P<0.05);而在GMCSF+PD98059组中,人皮肤成纤维细胞内和细胞培养上清液中相应指标表达水平均显著低于GMCSF组(P<0.05)。结论 GMCSF可促进人皮肤成纤维细胞VEGF表达,ERK通路在此过程中发挥重要作用。
- 李晓光方勇姚敏胡孝辉徐鹏俞为荣
- 关键词：细胞外信号调节激酶通路血管内皮生长因子成纤维细胞
- 去细胞羊膜负载毛囊干细胞修复裸鼠全层皮肤缺损被引量：3
- 2010年
- 目的利用去细胞羊膜负载毛囊干细胞修复裸鼠全层皮肤缺损。方法体外分离和培养人毛囊干细胞,取经慢病毒介导的绿色荧光蛋白(pGC FU-GFP-Lentiviru)标记后第4代毛囊干细胞接种于去细胞羊膜上;负载后第7天,HE染色光学显微镜观察细胞黏附生长情况。于18只C57BL/6裸鼠背部制作全层皮肤缺损创面,并根据不同的处理方式分为实验组(将负载毛囊干细胞的去细胞羊膜植入裸鼠全层皮肤缺损创面)、去细胞羊膜移植+干细胞注射组(将去细胞羊膜覆盖创面后羊膜下注射5×106毛囊干细胞)和去细胞羊膜移植组(去细胞羊膜单独移植),每组6只。分别于移植后第7、14、21、28天,测量各组创面面积并计算创面收缩率。移植后第28天,荧光显微镜观察创面组织绿色荧光蛋白(GFP)表达,HE染色光学显微镜观察新生皮肤结构特征。结果去细胞羊膜负载毛囊干细胞后第7天,HE染色光学显微镜观察发现,细胞连接成片状覆盖于去细胞羊膜表面。实验组和去细胞羊膜移植+干细胞注射组移植后各时点的创面收缩率均显著小于去细胞羊膜移植组(P<0.05)。移植后第28天,荧光显微镜观察显示实验组创面表皮层GFP表达阳性;HE染色光学显微镜观察发现实验组创面组织表皮层明显增厚,有类似毛囊样结构生成。结论去细胞羊膜负载毛囊干细胞可用于修复裸鼠全层皮肤缺损。
- 胡孝辉杨鹏高高丰厚方勇
- 关键词：毛囊干细胞羊膜皮肤缺损毛囊干细胞羊膜皮肤缺损
- β-catenin基因转染毛囊干细胞的实验研究
- @@严重皮肤缺损如严重大面积烧伤创面的修复仍是目前临床工作的重点和难点。毛囊干细胞因其具有高增殖和多向分化的潜能备受创伤修复及组织工程领域学者的关注。近年来，关于毛囊千细胞的研究取得了一定的进展。但是，迄今为止距离将其作...
- 杨鹏高方勇胡孝辉
- 文献传递
