王桂荣
- 作品数：16 被引量：14H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 中国临床诊断克雅氏病人脑脊液中tau蛋白浓度诊断价值的研究
- 克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD)是一种由朊病毒引起的致死性快速进行性神经退行性疾病,到目前为止,确诊需进行脑组织活检或尸检。脑脊液(CSF)与大脑细胞外空间接触最为紧密,因此大脑的生...
- 王桂荣高晨石琪周伟陈建明董辰方石崧王新韦艳姜慧英韩俊董小平
- 关键词：克雅氏病TAUCSFELISA
- 文献传递
- 两种模式病毒灭活风险实验研究被引量：5
- 2008年
- 目的研究模式病毒在环境中的存活能力，以及常用消毒液和紫外线对病毒的灭活能力。方法利用表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒rADV和重组单纯疱疹病毒rHSV作为模式病毒，将滴有病毒的NC膜于室温下、浸于不同稀释度的各消毒液（乙醇、次氯酸钠、来苏尔、新洁尔灭）中，分别于15、30、45、60、75、90、105min，或紫外线连续照射20、40、60、80、100min后，放入细胞表面培养48h，于荧光显微镜下观察。结果（1）rHSV在环境中的平均存活时间不足60min，rAd病毒均高于105min；（2）100％、70％、50％的乙醇，以及5％、2．5％和1．25％次氯酸钠均可灭活两种病毒；（3）0．1％的新洁尔灭15min可灭活rHSV和rADV；0．01％新洁尔灭作用45min可灭活rHSV病毒；0．05％新洁尔灭中作用75min可灭活rADV病毒；而0．01％新洁尔灭则无灭活作用；（4）5％和2．5％的来苏尔可灭活两种病毒；但1．25％来苏尔灭活rADV病毒需75min；（5）紫外线照射大于20min可有效灭活rHSV，但对rADV无灭活作用。结论无包膜病毒与有包膜病毒在环境中的生存能力是不同的；两种模式病毒对各消毒液的抵抗能力也不尽相同，应根据病毒的特点选择不同的灭活方式。
- 李媛梅国勇姜慧英王桂荣田婵韩露韩卫芳魏强周永运武桂珍王克霞韩俊
- 关键词：生物安全消毒剂灭活
- 定位表达于溶酶体、泛素的PrP载体的构建及鉴定
- 2008年
- 目的构建定位于溶酶体、泛素的PrP表达载体，并进行蛋白表达特点及定位的鉴定。方法将泛素基因、溶酶体膜定位信号序列基因和PrP基因连接，克隆至pcDNA3．1载体中，构建表达载体pcDNA3．1-UPrP,pcDNA3．1-PrPL；瞬时转染真核表达细胞，经Western Blot和间接免疫荧光技术检测PrP表达特点。结果构建的各种PrP定位表达载体均可定位表达具有三种类型的糖基化分子的PrP，以双糖基化分子类型最多。带有泛素、溶酶体信号的质粒pcDNA3．1-UPrP、pcDNA3．1-PrPL的PrP表达随着时间的延长蛋白表达量下降，提示泛素、溶酶体信号能加速表达PrP在细胞内的降解。结论成功构建了溶酶体、泛素定位表达的PRNP核酸疫苗载体pcDNA3．1-uPrP、pcDNA3．1-PrPL，为PRNP核酸疫苗的研究奠定了一定的基础。
- 李媛梅国勇姜慧英王桂荣田婵陈操王新王克霞韩俊董小平
- 关键词：朊病毒疫苗DNA
- 脑脊液特定蛋白在散发型克雅氏病诊断中作用被引量：3
- 2009年
- 王桂荣田婵董小平
- 关键词：脑脊液特定蛋白
- 人doppel蛋白及其类似蛋白PrPΔ32-121对SH-SY5Y细胞的细胞毒性作用被引量：1
- 2010年
- 目的体外观察细胞瞬时表达的人Dpl(doppel)蛋白对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用,并与其结构类似蛋白——截短型PrP(PrPΔ32-121)加以比较。方法通过PCR方法获得人PRND基因及截短型PRNP基因并克隆至真核表达载体,瞬时转染SH-SY5Y细胞后,观察蛋白表达及其定位情况;采用MTT实验检测转染细胞的生长状态;用流式细胞仪、Western blot等方法检测转染细胞的凋亡状态。结果两种蛋白均可在转染细胞中表达,并存在于细胞膜上;MTT结果显示,在转染24 h后均出现明显的细胞毒性作用;细胞凋亡相关实验发现,转染细胞AnnexinV/PI双染阳性细胞数量增多,pro-casepase-3和Bcl-2因子水平降低。结论瞬时表达的Dpl蛋白与截短型PrP可产生类似的神经细胞毒性作用,并诱导启动细胞凋亡过程。
- 徐琨王新田婵石崧王桂荣石琦周瑞敏姜惠英楚雍烈董小平
- 关键词：朊蛋白细胞毒性作用细胞凋亡
- 具有八肽重复区突变的朊蛋白其抗氧化性降低被引量：1
- 2008年
- 抗氧化性被认为是细胞朊蛋白的主要生理功能之一,研究显示它的抗氧化性主要与朊蛋白序列中的八肽重复区有关.但是迄今为止它的抗氧化机制仍旧不清楚.我们构建表达了野生型朊蛋白(PrP-PG5)和它的不同八肽重复区突变体0(PrP-PG0),9(PrP-PG9)和12(PrP-PG12).各种原核表达突变体蛋白在H2O2氧化后出现分子量的增加,并可导致羰基产生.MTT和细胞计数实验显示表达各种突变体的细胞存活率明显低于表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞.细胞内ROS检测发现表达各种突变体的细胞内ROS水平明显高于表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞.此外,谷胱甘肽过氧化物酶检测显示表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞内谷胱甘肽过氧化物酶水平明显高于表达各种突变体的细胞.H2O2处理细胞后,转染突变体的细胞总的羰基产物数量明显高于转染野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞,而表达突变体细胞及转染空载体的细胞较表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞对氧化物质的抵抗性明显减弱.这些结果提示,具有正确八肽重复区数目对于朊蛋白(PrP)的抗氧化作用起关键作用,PrP的抗氧功能的丢失可能参与家族性朊病毒病的病理过程.
- 安润董辰方雷艳君韩露李平陈建明王桂荣石琦高晨姜慧英周伟韩俊楚雍烈董小平
- 关键词：PRP抗氧化性谷光甘肽过氧化物酶细胞活性
- 细胞浆中PrP蛋白的表达及其细胞毒性作用的研究被引量：1
- 2008年
- 为了探讨在胞浆中表达的PrP的理化特征以及对细胞活性的影响,我们构建了胞浆型PrP(CytoPrP)真核表达质粒,瞬时转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,通过蛋白酶敏感性实验检测CytoPrP及其蛋白酶抗性,利用MTT和Trypan Blue细胞计数检测CytoPrP的细胞毒性作用。结果显示,CytoPrP在胞浆内的存在受蛋白酶抑制剂的控制;与野生型PrP相比,CytoPrP具有相对较强的蛋白酶K(PK)抗性。MTT和细胞计数实验均显示,Cyto-PrP的存在可诱导明显的细胞毒性效应,而CytoPrP的细胞毒性作用受蛋白酶抑制剂含量的影响,呈剂量依赖关系。上述结果为研究CytoPrP在朊病毒病的发病机制中的意义提供了一定的科学数据。
- 王新董辰方石琦石崧王桂荣雷艳君安润徐琨姜慧英韩俊赵玉军董小平
- 关键词：朊病毒细胞毒作用
- 一种基于连续PMCA的PrP^Sc体外扩增方法的建立被引量：1
- 2008年
- 为建立一种基于蛋白质错误折叠循环扩增(PMCA)的体外稳定扩增方法以观察PrPSc是否能在体外连续传代,我们分别制备了正常仓鼠和羊瘙痒病因子263K感染的发病仓鼠的全脑匀浆,将两种脑匀浆以不同体积比混合后,分别进行144个循环的直接PMCA和每轮48个循环、共8轮的连续PMCA,用Western blot对PrPSc的扩增情况进行检测。结果显示,与常规的直接PMCA方法相比,连续PMCA能更有效地使低浓度的PrPSc扩增到可检出的水平,表明连续PMCA可以支持羊瘙痒因子263K在体外长期稳定的复制。连续PMCA方法是一种体外高效地扩增PrPSc的方法,有潜力成为一种Prion体外培养方法,用于研究Prion错误折叠和复制机制,以及检测脑组织、外周组织和体液样品中的微量PrPSc。
- 石崧董辰方张宝云石琦王桂荣王新韩俊董小平
- 关键词：PRION病
- 感染羊瘙痒因子263K和139A仓鼠脑组织中tau、磷酸化tau、GSK3β和β-tubulin变化的研究
- 前言朊病毒病又称传播性海绵状脑病,是一类以脑内出现海绵状病理改变为特征的致死性神经退行性疾病,被认为是细胞内正常PrP蛋白转化为PrPSc所致,包括人类的克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJ...
- 王桂荣石崧高晨张宝云田婵董辰方周瑞敏李晓丽陈操韩俊董小平
- 文献传递
- 人tau蛋白外显子2和外显子3特异性抗体的制备
- 2009年
- 目的制备人微管相关蛋白tauN端的外显子2和外显子3特异性多克隆抗体。方法从人外周血DNA中获得tau蛋白外显子2及外显子3序列并连接至原核表达载体pGEX-2T，表达纯化重组融合蛋白GST—E2、GST-E3；以此融合蛋白免疫家兔及小鼠制备抗血清，通过ProteinG／A、偶联GST蛋白的溴化氰（CNBr）活化柱对抗血清进行亲和纯化；用WesternBlot及ELISA方法确定所制备抗体的特异性和敏感性。结果在大肠埃希菌中表达纯化出人tau外显子2和外显子3重组融合蛋白GST-E2和GST-E3，相对分子质量为29×10^3。免疫实验动物后获得抗血清，经系列纯化后WesternBlot和ELISA检测显示，制备的抗人tau蛋白外显子2和外显子3抗体具有良好的特异性和免疫反应效价。结论成功制备了4种人tau外显子2和外显子3特异性抗体，为进行tau蛋白在神经退行性疾病中的作用研究提供了基础。
- 陈操王桂荣石琦张宝云梅国勇李媛王新周瑞敏韩俊赵玉军董小平
- 关键词：蛋白质类外显子抗体病毒朊病毒病
