李环
- 作品数：50 被引量：169H指数：7
- 供职机构：南京工业大学生物与制药工程学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 酶法拆分N-乙酰-D,L-蛋氨酸转化条件优化被引量：2
- 2009年
- 重组大肠杆菌BL21/pET22b-argE表达的N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶(NAOase)可用于脂肪族氨基酸的手性拆分,水解N-乙酰-D,L-氨基酸中的L-型底物,N-乙酰-D,L-蛋氨酸为其最合适的底物。为了确定NAOase拆分N-乙酰-D,L-蛋氨酸合适的转化条件,考察了反应温度、pH值、Co^(2+)浓度、转化时间、底物浓度和加酶量对产物的影响。结果表明,合适的反应条件为37℃,pH值7.0,Co^(2+1) mmol/L,转化时间20 min,底物浓度150 mmol/L,菌泥5 g/L。在上述反应条件下,N-乙酰-D,L-蛋氨酸的转化率可达81.4%。
- 李环金圣芳高浩峰韦萍
- 关键词：酶法拆分
- 重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体蛋白的柱上复性被引量：1
- 2008年
- N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶(NAO)具有广泛的底物选择性,可用于多种活性氨基酸的酶法拆分,具有广阔的工业应用前景。文中采用多种洗涤剂对重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体进行洗涤去杂,并用DEAE Sepharose Fast Flow层析柱和三缓冲体系作为复性系统对重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体进行复性实验。结果表明,4mol/L尿素与0.5%Triton X-100联合洗涤可以大量去除杂质;三缓冲体系能有效地实现重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体的柱上复性。在流速为0.5 mL/min,尿素梯度为21 mL,尿素终浓度为1.8mol/L,蛋白质上样量为0.99 mg的实验条件下,蛋白回收率和复性酶比活分别达到52%和10.27 U/mg。
- 黄东健姚忠刘步云李环
- 关键词：离子交换包涵体复性
- 沼气发酵和自养型淡水微藻培养的耦合方法
- 本发明属于环保和新技术能源领域，公开一种沼气发酵和自养型淡水微藻培养的耦合方法，其特征在于采用沼气发酵和自养型淡水微藻光合培养同时进行的方法，包括沼气的发酵、沼液的处理、自养型淡水微藻的接种和沼气的引入、自养型淡水微藻培...
- 欧阳平凯韦萍何若平李环周华应汉杰黄和
- 文献传递
- 乳糖对产木聚糖酶基因工程菌1020的诱导作用及碳氮源优化被引量：10
- 2005年
- 研究了国产及进口LB培养基对产嗜热性木聚糖酶基因工程菌1020生长及产酶的影响,并以国产原料为基准,优化了培养基。结果表明,国产的酵母膏及蛋白胨和进口原料相比,缺少某些成分,单纯增加用量不能弥补这种差别;乳糖可以代替昂贵的IPTG起到有效的诱导作用;10g·L-1的乳糖可兼起能源及诱导剂的双重效果,菌的生物量和产酶量达到最佳;发酵8h后补加5g·L-1乳糖,生物量及酶活皆有提高。复合氮源优于单一的无机或有机氮源。优化后的酶活从进口LB培养基的270U～290U提高到1700U～1800U。
- 李环陈悦朱孝霖韦萍欧阳平凯
- 关键词：乳糖
- 重组N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶的表达条件优化
- 2008年
- N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶(N-acetylornithine deacetylase,NAOase)为新型氨基酸拆分酶,可在重组菌BL21(DE3)-pET22b-argE中胞内诱导表达。为降低生产成本并提高酶活,优化了培养基成分及诱导条件。结果表明,进口的蛋白胨和酵母膏明显优于国产原料。5.0g/L的乳糖可以代替昂贵的IPTG(isopropy1β-D-1-Thiogalacto pyranoside,异丙基β-D硫代半乳糖苷)起到有效的诱导效果。最佳碳源为1.0g/L甘油,氮源为15.0ml/L玉米浆和5.0g/L蛋白胨。NAOase大多以不可溶的包涵体形式表达,少量为可溶的活性表达。降低诱导温度可增大活性表达的比例,而整菌表达量也随之降低。22℃诱导10h为活性表达的最适条件,生物量为6.91,酶活为392.65U/ml,分别为优化前的1.65倍和5.72倍。
- 李环朱大伟陈悦任真韦萍
- 关键词：包涵体
- 嗜热木聚糖酶的酶学性质及其在竹浆漂白中的应用被引量：1
- 2006年
- 研究了基因工程菌1020全细胞中嗜热木聚糖酶的酶学性质,并考察了含酶全细胞在竹浆漂白中的效果。结果表明,70℃时全细胞木聚糖酶有2个最适pH值,分别为7.0与9.0。该酶湿热稳定性及耐碱性能良好。在90℃,pH值7.0的条件下,全细胞预处理硫酸盐竹浆后,加入用量0.2%的H2O2漂白,白度提高了7%ISO。
- 李环朱宁朱孝霖韦萍
- 关键词：全细胞酶学性质竹浆漂白
- 产乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶基因工程菌的构建及遗传稳定性研究被引量：7
- 2008年
- 利用质粒pET22b(+)为表达载体,成功构建了产N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶基因工程菌BL21-pET22b(+)-argE,并考察了重组质粒的稳定性。双酶切鉴定了质粒构建正确,SDS-PAGE电泳证实了该菌可高效表达目的蛋白。连续传代50次实验表明重组质粒具有结构稳定性。无选择压力连续传代时,质粒丢失严重;有选择压力时连续传代未发生质粒丢失现象,具有较好的分离稳定性。发酵过程中,用羧苄青霉素代替氨苄青霉素,质粒稳定率由77.78%提高到86.42%。羧苄青霉素浓度为200μg/mL时,质粒稳定率提高到98.33%。
- 陈悦李环韦萍
- 关键词：基因工程菌重组质粒
- 表达条件对金属激活酶NAOase离子依赖的活性分析
- 2013年
- N-乙酰鸟氨酸脱酰基酶为一种新型手性拆分酶制剂,酶活性依赖于Mg2+、Mn2+、Zn2+及Co2+中的某种金属离子。以高表达NAOase的重组菌DH10B/argE-pHsh为研究对象,考察不同培养条件下Mg2+、Mn2+、Zn2+及Co2+4种离子对重组菌的生长、酶的表达活性及表达量的影响。结果发现:同种离子在不同条件下对重组菌的生长影响不大,但对酶活性影响显著。4种离子在合适浓度时皆能提高酶活性,促进强度从高到低依次为Mn2+、Mg2+、Co2+和Zn2+。在TB培养基中,Mn2+为15 mmol/L时:NAOase比酶活达到1 272.7 U/mL,是未添加时的4.67倍,激活作用显著高于其他离子。SDS-PAGE电泳实验表明4种离子的蛋白表达量基本相同。
- 吴圆丽李环张琛韦萍
- 关键词：金属离子
- 舟形藻生长、品质特性及转化筛选标记研究被引量：2
- 2012年
- 研究了舟形藻(Navicula tenera)细胞表型和积累模式,利用索式抽提法和气质联用(GC-MS)方法对其进行总油脂含量和脂肪酸组分的分析,并研究了舟形藻对氨苄青霉素(Amp)、卡那霉素(Kan)、草胺膦(PPT)、庆大霉素(Gen)、链霉素(Str)、遗传霉素(G418)、潮霉素(Hyg)以及氯霉素(Cm)这8种常用抗生素的敏感性。结果显示,舟形藻细胞以沉积底部的生长模式积累;其总油脂含量占其干物质重量的8.31%,脂肪酸种类主要有C16∶0,C16∶3(n-4)和C20∶5(n-3)(EPA),分别占总脂肪酸的64.13%、15.87%和19.62%;舟形藻对Cm和G418非常敏感,对Hyg较敏感,而对不同浓度的Amp、Kan、Gen、Str以及PPT极不敏感。为舟形藻基因工程筛选标记的确立,进而建立其遗传转化系统奠定了基础。
- 谭小力赵东华马忠岩李环贾红华韦萍
- 关键词：舟形藻油脂脂肪酸抗生素
- 乳糖诱导耐热木聚糖酶基因在大肠杆菌中表达被引量：4
- 2005年
- 考察乳糖代替IPTG诱导耐热木聚糖酶基因在重组大肠杆菌BL21中表达的可行性。分别以IPTG和乳糖作为诱导剂,对诱导时机、诱导剂浓度、诱导持续时间等主要因素进行了分析比较。结果表明,当菌体生长至发酵液吸光值OD600达1.3时加入乳糖其终浓度达29.2 mmol/L,37℃,持续诱导9.5 h,木聚糖酶活力达到最高,为3 587.5U,是IPTG优化条件下持续诱导7 h达到的最高酶活的2.07倍,而成本只有IPTG的1/204。
- 朱孝霖孙雷李环韦萍
- 关键词：耐热木聚糖酶乳糖SDS-PAGE
