戴驭虎
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 供职机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外培养包埋透明质酸/壳聚糖/质粒DNA纳米粒的壳聚糖支架负载软骨细胞被引量：2
- 2014年
- 目的 观察包埋透明质酸（HA）/壳聚糖（CS）/质粒DNA （pDNA）纳米粒的壳聚糖支架对软骨细胞生物学性状的影响及基因转染能力,探讨其作为基因活化软骨组织工程支架的可行性.方法 构建包埋HA/CS/pDNA纳米粒的壳聚糖支架,负载兔关节软骨细胞体外培养,1～2周后通过扫描电镜、组织学、免疫组织化学、倒置相差显微镜及激光共聚焦显微镜检测支架对软骨细胞表型及功能的影响,以及基因转染的能力.结果 支架孔径为100～300 μm,孔孔隙率为（86.0±1.2）％;软骨细胞在包埋HA/CS/pDNA纳米粒的支架中贴附良好,维持表型稳定,1～2周时实验组分泌蛋白多糖及Ⅱ型胶原等软骨细胞外基质较对照组明显增多,1周时测得支架中的HA/CS/pDNA纳米粒介导基因转染软骨细胞并表达绿色荧光蛋白.结论 包埋HA/CS/pDNA纳米粒的壳聚糖支架细胞相容性良好,能转染培养的软骨细胞表达绿色荧光蛋白.
- 卢华定吕璐璐赵慧清戴驭虎
- 关键词：壳聚糖软骨细胞
- 曲霉菌内切型壳聚糖酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2014年
- 背景:壳聚糖酶是高效、特异降解壳聚糖的酶,因此高效稳定地表达具有较高活性的壳聚糖酶可有效提高壳聚糖介导的基因治疗效果。目的:构建一种可高效降解壳聚糖的壳聚糖酶基因,探讨其在大肠杆菌中的表达及影响其活性的主要因素。方法:根据GenBank公布的曲霉菌CJ22-326内切型壳聚糖酶基因序列信息(EU302818),设计并合成23条重叠引物,PCR法扩增壳聚糖酶基因片段,构建原核表达质粒pET28a-His6-CSN,将其转化大肠杆菌,收集融合蛋白His6-CSN,检测融合蛋白的表达及酶活性,同时检测不同pH值及温度对壳聚糖酶活性的影响。结果与结论:Western-blot证实融合蛋白His6-CSN成功表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测显示表达的融合蛋白相对分子质量约为29 000,二硝基水杨酸比色法测定壳聚糖酶对壳聚糖的降解活性显著高于溶菌酶(P<0.05),但低于灰色链霉菌壳聚糖酶(P<0.05)。壳聚糖酶的最适pH值和最适温度分别为6.0和50℃,当pH值在4.0-7.0、温度在30-50℃范围内具有较高的酶活性。
- 卢华定连礼熠陈明伟戴驭虎
- 关键词：生物材料国家自然科学基金
- 聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒的制备及介导体外转染关节软骨细胞被引量：3
- 2013年
- 背景:壳聚糖对软骨细胞具有良好的生物相容性和可降解性,但存在基因转染效率偏低的缺陷。目的:构建负载增强型绿色荧光蛋白基因的聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒,检测其理化性能,以及体外对关节软骨细胞的基因转染效率。方法:将聚乙烯亚胺共价连接于壳聚糖骨架上构建聚乙烯亚胺-壳聚糖复合物,再将聚乙烯亚胺-壳聚糖与负载增强型绿色荧光蛋白基因的质粒DNA以复凝聚法制成纳米粒,以扫描电镜检测纳米粒形态,Zeta电位粒度分析仪测定其粒径、表面电位;凝胶电泳阻滞实验观察聚乙烯亚胺-壳聚糖和质粒DNA的结合力。以聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒、裸质粒DNA、脂质体2000及壳聚糖/DNA纳米粒转染体外培养的兔关节软骨细胞,流式细胞仪及荧光显微镜检测基因转染率;激光共聚焦显微镜检测DNA的入核情况。结果与结论:聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒多呈球形,粒径为(154.6±18.6)nm,表面Zeta电位为(24.68±6.82)mV,可有效保护质粒DNA免受DNaseⅠ的降解。体外转染实验证明聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒能介导增强型绿色荧光蛋白基因转染关节软骨细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白,转染率达(23.80±1.74)%,转染率高于裸质粒DNA组及壳聚糖/DNA纳米粒组(P<0.05),与脂质体2000组无显著差别(P=0.522)。表明聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒能有效保护质粒DNA免受核酸酶降解,对关节软骨细胞有良好的基因转染能力。
- 卢华定戴驭虎连礼熠吕璐璐赵慧清
- 关键词：壳聚糖聚乙烯亚胺非病毒基因载体
- 经后路减压椎弓根钉棒内固定椎间融合治疗高龄腰椎退行性疾病的疗效被引量：9
- 2016年
- 本文高龄患者主要特指80岁及以上患者，腰椎退行性疾病主要包括腰椎管狭窄症和腰椎滑脱。高龄患者多数症状重，病程长，保守治疗效果不佳，同时合并多种基础疾病，如骨质疏松、围术期心肺功能也面临巨大挑战，如何成功地开展手术治疗以显著提高生活质量，成为治疗的关键。本院对高龄腰椎退行性疾病患者采用经后路减压椎弓根钉棒内固定椎间融合治疗。
- 姚辉徐义春侯刚陈碧英戴驭虎
- 关键词：高龄腰椎退变
- 壳聚糖-聚乙烯亚胺/质粒DNA纳米粒介导体外基因转染关节滑膜细胞被引量：1
- 2013年
- 目的 以聚乙烯亚胺（PEI）共价连接壳聚糖（CS）骨架上构建CS-g-PEI（CP）/质粒DNA（pDNA）纳米粒,探讨其在体外对关节滑膜细胞的转染能力.方法 复凝聚法制作CP/pDNA纳米粒,扫描电镜检测纳米粒形态,Zeta电位粒度分析仪测定其粒径、表面电位；凝胶电泳阻滞实验观察CP和pDNA的结合力；体外转染兔关节滑膜细胞,48 h后流式细胞仪及荧光显微镜检测转染效率；激光共聚焦显微镜检测1 ～2h时DNA的入核情况.结果 CP/pDNA纳米粒略呈球形,粒径为（142.0±20.3） nm,表面Zeta电位为（25.99 ±8.48） mV,可有效保护pDNA免受DNase I的降解.体外转染实验证明CP/pDNA纳米粒能介导pEGFP转染滑膜细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白,转染率达（22.25±1.89）％,比裸pDNA及CS/pDNA纳米粒组有更高的转染效率（P＜0.05）.结论 CP/pDNA纳米粒是一种有效的新型非病毒基因转染系统,对关节滑膜细胞具有良好的基因转染能力.
- 卢华定戴驭虎赵慧清吕璐璐
- 关键词：壳聚糖聚乙烯亚胺基因载体滑膜细胞
