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抗猪瘟病毒野毒株E2蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用: 本发明公开了一种抗猪瘟病毒野毒株E2蛋白的单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本发明采用环磷酰胺免疫抑制法，用杆状病毒表达的猪瘟兔化弱毒疫苗株E2蛋白作为耐受原，以石门株E2蛋白作为免疫原，免疫小鼠，经细胞融合...; 仇华吉夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元涂长春; 文献传递

猪瘟病毒野毒株E2蛋白特异性单抗免疫抑制制备法的建立被引量：8: 2008年; 采用环磷酰胺免疫抑制法制备特异性识别猪瘟病毒(CSFV)野毒株的单克隆抗体,用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原,Shimen-E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了1株能稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,结果显示,该单克隆抗体能够与CSFV石门株发生反应,同时能与1.1、2.1、2.2和2.3基因亚群CSFV野毒发生特异性反应,并具有中和活性,而与CSFV兔化弱毒疫苗株不发生反应。表明,该单克隆抗体可以用于鉴别CSFV野毒株和兔化弱毒疫苗株。; 夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒 E2蛋白重组杆状病毒免疫抑制

猪瘟重组腺病毒及其在制备猪瘟基因工程疫苗中的用途: 本发明公开了一株重组腺病毒rAdV－E2，其微生物保藏号是：CGMCC No.2429。本发明应用复制缺陷型腺病毒载体系统，构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV－E2，并以家兔作为模型，评价了rAdV－E2的免...; 仇华吉孙元祁巧芬梁冰冰李娜于墨阳王宇飞成丹朱庆虎涂长春; 文献传递

猪瘟病毒实时荧光定量RT-PCR的建立及其对人工感染猪体内猪瘟病毒的检测被引量：12: 2007年; 本研究应用猪瘟病毒通用引物和野毒特异性TaqMan探针,并以质粒作为阳性标准品,结合Corbett公司的RotorGene3000荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测猪瘟病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。该方法在10^8-10^1范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中10拷贝/μL的病毒核酸,与本实验室建立的RT-套式PCR（RT-nPCR）具有相近的敏感性,二者对152份不同样品检测符合率达94.7%。应用本方法对人工感染10^6TCID50猪瘟石门强毒的猪只感染后0-14 d全血中猪瘟病毒RNA进行了定量检测,揭示了猪瘟病毒在猪体内复制的动态变化,证实了感染猪临床表现与病毒滴度存在明显的时间相关性。此外发现,在同居感染猪出现猪瘟临床症状前3-4 d可从其全血中检出病毒RNA。; 赵建军成丹李娜史子学孙元赵和平朱庆虎涂长春仇华吉; 关键词：猪瘟病毒荧光定量RT-PCR

用免疫抑制法制备猪瘟病毒野毒株E2蛋白的特异性单克隆抗体: 采用环磷酰胺免疫抑制法,用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原,Shimen-E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选获得一株稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体...; 夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元仇华吉; 关键词：猪瘟病毒 E2蛋白重组杆状病毒单克隆抗体; 文献传递

同时检测猪瘟病毒和北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的复合荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：10: 2009年; 应用猪瘟病毒(CSFV)及北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)特异性引物和TaqMan水解探针,建立一种同时检测CSFV和PRRSV的复合荧光定量RT-PCR方法。该方法可检测到3.2 TCID50的CSFV和1.8TCID50的北美洲型PRRSV,比常规PCR方法敏感性高50倍以上。用复合荧光定量RT-PCR方法对155份现地样品进行检测,结果73份为PRRSV阳性,16份为CSFV阳性,13份为CSFV和PRRSV混合感染,与常规RT-PCR的符合率高达99.4%。该复合荧光定量RT-PCR方法敏感、特异、重复性好。; 成丹赵建军李娜孙元周艳君朱妍田志军涂长春童光志仇华吉; 关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒

猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株复合实时荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立被引量：18: 2007年; 根据GenBank中的猪瘟病毒强毒和弱毒株基因组序列设计了1对针对猪瘟病毒的通用引物和2条分别针对猪瘟病毒强毒和猪瘟兔化弱毒疫苗株的特异性TaqMan水解探针，建立了一种能区分猪瘟病毒强毒和兔化弱毒疫苗株的复合实时荧光定量RT—PCR检测方法。结果显示，该方法能将我国大陆流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒株与猪瘟兔化弱毒疫苗株完全区分开来，而不与其他猪源病毒发生非特异反应，分别可检测到初始模板中41．8和81．5个拷贝的病毒RNA，与已建立的复合RT-套式PCR的敏感性相近，两种方法对152份样品检测的符合率达96．9％～100％。通过对8份猪瘟兔化细胞疫苗效价的检测，证实本方法与兔体反应热测定法有一定的相关性，可用于猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗的定量和鉴别检测。; 赵建军成丹李娜孙元史子学涂长春童光志仇华吉; 关键词：猪瘟病毒猪瘟兔化弱毒疫苗

同时检测猪瘟病毒和北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的复合荧光定量RT-PCR方法的建立: 本研究应用猪瘟病毒(CSFV)及北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)特异性引物和TaqMan水解探针,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测CSFV和PRRSV的复合荧光定量RT-PCR方法。该方法可检测到3....; 成丹赵建军李娜孙元周艳君朱妍田志军涂长春童光志仇华吉; 关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒; 文献传递

表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒的构建及其在兔体内的免疫原性分析被引量：13: 2008年; 为了构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗,通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2。测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blotting检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用猪瘟兔化弱毒疫苗株(C株)进行攻击,攻毒后3 d取其脾脏,用实时荧光定量RT-PCR检测C株病毒RNA。结果表明,该重组腺病毒传至第10代时,毒价可达1.0×1010 TCID50/mL;外源基因可在其中得到稳定表达;rAdV-E2接种兔免疫后2周产生猪瘟特异性抗体,免疫后5 w抗体达到峰值,攻毒后rAdV-E2接种兔和C株接种兔均未出现定型热反应,从其脾脏也未检测到C株病毒RNA,而野生型腺病毒接种兔均出现了定型热反应,并且从其脾脏检测大量C株病毒RNA,其含量达到了103拷贝/μL以上。由此表明,rAdV-E2可望开发为猪瘟候选疫苗。; 孙元祁巧芬梁冰冰成丹李娜于墨洋王宇飞刘霓虹朱庆虎仇华吉; 关键词：猪瘟病毒 E2基因重组腺病毒免疫原性

同时检测猪瘟和北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的复合荧光定量RT-PCR方法的建立: 猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征都是对养猪业造成严重危害的疾病,并产生相似的临床症状/(高温、神经症状、呼吸道症状及繁殖障碍/),因此导致两种病毒的鉴别诊断非常困难。此外,CSFV和PRRSV的混合感染在中国也时常发生。所以,建...; 成丹; 关键词：猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒 TAQMAN探针; 文献传递

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成丹