刘高科
- 作品数：11 被引量：16H指数：3
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- sCR1-SCR15-18蛋白减轻补体介导的大鼠脑缺血/再灌注损伤被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨补体在大鼠大脑缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤中的作用及重组人可溶性补体受体Ⅰ型SCR15-18蛋白(sCR1-SCR15-18)的保护作用。方法:75只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、I/R组和sCR1-SCR15-18保护组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型(middle cerebral artery occlusion MCAO),缺血2h,再灌注24h后,进行神经功能学评分,测定脑梗死体积、大脑皮质髓过氧化物酶(myeloperoxi-dase,MPO)活性,观察大脑皮质区补体C3b沉积和病理改变。结果:缺血/再灌注24h后,sCR1-SCR15-18保护组神经功能学评分,脑梗死体积及脑皮质MPO活性明显低于I/R组(P<0.05);sCR1-SCR15-18保护组缺血脑组织补体C3b沉积明显减少,病理损伤减轻。结论:补体在脑I/R损伤中起一定作用,sCR1-SCR15-18蛋白对大鼠I/R损伤脑具有保护作用。
- 何莉杨永涛郭光金刘高科汪正清
- 关键词：补体脑缺血再灌注损伤炎症
- 补体在肠缺血再灌注损伤中的作用及机制被引量：4
- 2010年
- 肠缺血再灌注后补体经典途径、MBL途径和旁路途径有不同程度的活化,补体活化产物C3a、C4a、C5a和攻膜复合物(MAC)能引起组织炎症损伤,其机制有MAC介导的直接效应,有C3a、C5a和亚溶解数量的MAC刺激白细胞和血管内皮细胞产生一系列炎症介质,导致肠黏膜损伤,甚至累及远端器官功能障碍的间接效应。目前,已有多种补体抑制剂用于对肠缺血再灌注损伤的保护研究。
- 刘高科汪正清
- 关键词：补体缺血再灌注炎症补体抑制剂
- 人补体受体1型活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定
- 补体系统是先天和获得性免疫的重要组成部分,但过量的补体活化片段也是炎症反应的始动因子。体内补体级联的活化受到一系列膜蛋白和血浆蛋白的抑制调节,补体异常过度活化则可以引起缺血再灌注损伤、超敏反应、移植反应和肾小球肾炎等多种...
- 刘高科何莉杨永涛汪正清
- 文献传递
- 双功能域小分子CR1衍生物的构建、表达、纯化及生物功能鉴定
- 补体是存在于人和脊椎动物血清与组织液中的一组具有酶活性的蛋白质,在机体抗感染第一线防御中起重要作用。补体系统的异常过度活化是缺血再灌注损伤、异种器官移植急性排斥反应等许多炎症性疾病的发生和发展的重要始动因素之一。血清补体...
- 杨永涛何莉刘高科谭兵汪正清
- 双功能域小分子补体受体1型衍生物的构建、表达、纯化及生物功能鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的克隆表达出能够抑制补体活化的双功能域小分子补体受体1型（complement receptor type 1，CR1）衍生物。方法从外周血提取总RNA，进行RT—PCR扩增出功能性片段I（CR1-SCR1—3）；以本室构建的pET-32a—CR1-SCR15—18为模板扩增功能性片段Ⅱ（CRl-SCR15—17）；利用重叠延伸PCR（SOE—PCR）法扩增出包含双功能域的融合基因。将融合基因重组于pET-32a（＋）载体，转化大肠杆菌Rosetta，经酶切及DNA序列测定鉴定后，IPTG诱导表达，SDS—PAGE和Western blot对表达蛋白质进行分析鉴定。蛋白质经Ni柱亲和层析及透析复性后，采用50％补体溶血抑制试验（CH50）进行功能鉴定。结果酶切及DNA序列测定证实成功构建出了pET-32a—CR1-SCR（1-3＋15-17）重组表达载体，IPTG诱导表达后在相对分子质量（Mr）为63×10^3处有一明显的条带，经Western blot鉴定为目的蛋白，Ni柱亲和层析获得纯度约为92％的目的蛋白，功能试验证实，在0～200μg／ml的融合蛋白剂量范围内，随着浓度的增加，补体抑制活性增强。结论成功构建并在大肠杆菌内表达了具有较高生物活性的重组双功能域小分子CR1衍生物，为体内保护实验研究提供实验数据。
- 杨永涛何莉刘高科谭兵汪正清
- 关键词：补体受体1型重叠延伸PCR原核表达蛋白纯化生物学活性分析
- Dax1调控胚胎干细胞及诱导多能性稳态的分子机制
- 胚胎干细胞(ESCs)来自胚胎内细胞团，能通过体外培养保持自我更新和多能性。ESCs可以定向分化成包括免疫细胞在内的各种类型的细胞。阐明ESCs多能性及其稳态调控机制不仅可以推动组织工程、胚胎发育（包括免疫系统发育）、细...
- 刘高科
- 关键词：胚胎干细胞细胞功能分子机制
- 文献传递
- 人CR1功能域SCR15-18在毕赤酵母中的表达及其对肠缺血再灌注损伤的保护作用
- 肠缺血再灌注(I/R)损伤是外科常见的组织器官损伤之一,发生于严重感染、创伤、休克、肠道梗阻以及腹主动脉瘤修补和器官移植的手术过程中。肠I/R损伤发病机制极其复杂。近年来的研究表明：补体系统过度活化的片段在肠I/R损伤的...
- 刘高科何莉杨永涛鲜尽红汪正清
- 人CR1功能域SCR15-18在毕赤酵母中的表达及其对肠缺血再灌注损伤的保护作用
- 肠缺血再灌注损伤/(ischemia reperfusion injury, I//R/)是外科常见的组织器官损伤之一,在严重感染、创伤、休克、心肺功能不全等疾患的病理演变过程中起重要作用,死亡率高。肠I//R损伤是多种...
- 刘高科
- 关键词：补体补体受体1型毕赤酵母小肠缺血再灌注损伤
- 文献传递
- 重组人补体受体1型SCR15-18片段对肠缺血再灌注损伤的保护作用被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨人补体受体1型功能域SCR15-18(CR1-SCR15-18)对大鼠肠缺血再灌注损伤的保护作用。方法:SD大鼠随机分为假手术组(SO)、缺血再灌注组(I/R)和CR1-SCR15-18保护组(CR1)。结扎肠系膜上动脉30 min,再灌注60 min,建立小肠缺血再灌注模型,再灌注前5 min注射CR1-SCR15-18蛋白(30 mg/kg)。测定肠黏膜血管的通透性、组织髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;HE染色观察小肠病理改变并根据Chiu's方法评分;免疫组织化学法检测补体C3组分的沉积。结果:与SO组相比,I/R组通透性增加,MPO活性和MDA含量显著升高,而SOD活性降低,肠黏膜病理损伤严重且有大量补体C3组分沉积。与I/R组相比,CR1组肠黏膜血管通透性显著降低,MPO活性和MDA含量显著降低,而SOD活性升高,肠黏膜损伤明显减轻,只有少量补体C3组分沉积。结论:CR1-SCR15-18蛋白抑制肠缺血再灌注时补体的活化,减轻肠组织损伤。
- 汪晓艳刘高科何莉汪正清
- 关键词：补体补体受体1型小肠再灌注损伤
- 重组工程菌pET32a-CR1-SCR15-18/BL21(DE3)高密度发酵工艺研究被引量：2
- 2011年
- 目的建立重组工程菌pET32a-CR1-SCR15-18/BL21(DE3)的高密度发酵工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,扩大至发酵罐发酵,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如发酵培养基、培养温度、pH值、活化时间、诱导时间及分批补加营养物质等条件进行优化。结果采用改良M9-CA培养基、37℃活化4 h后以0.2 mmol/L IPTG诱导表达4 h,以甘油为碳源,在生长期和诱导期分别以40 ml/h和70 ml/h的速率连续流加补料,全程滴加氨水保持培养基pH值保持在7.5,调节转速控制溶解氧在40%左右。最终菌体产量提高至40 g/L以上,CR1-SCR15-18蛋白表达率达28%以上。结论高密度发酵工艺显著提高了工程菌的产量和CR1-SCR15-18蛋白的表达水平。
- 何莉鲜尽红刘高科杨永涛汪正清
- 关键词：高密度发酵大肠杆菌
