于慧慧
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：贵州大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：贵州省国际科技合作计划留学人员科技活动项目择优资助经费国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 磷酸钙法将MMP-2,MMP-3双基因干扰载体转入HEK293T细胞的效率观察被引量：2
- 2009年
- 检测用磷酸钙法能否将修饰后用于沉默MMP-2,MMP-3基因的慢病毒载体有效地转入到HEK293T细胞。利用磷酸钙法,MMP-2,MMP-3双基因干扰载体(MMP组)与对照质粒(对照组)被分别转染HEK293T细胞,在转染后的第24,48及72 h,通过计算绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞数的百分比来判断转染效率。转染24 h后,两组细胞均生长状况良好,荧光显微镜下观察,已有大量绿色荧光出现,计算MMP组转染效率为(91.5±6.2)%,对照组转染效率为(80.3±4.7)%;转染后48-72 h,两组感染效率均未见明显下降。与对照相比,插入了MMP-2,MMP-3shRNA模板序列的慢病毒载体没有降低磷酸钙法转染HEK293T细胞效率,反而有所增高。
- 焦德敏于慧慧张铸业李宙阳刘爱和王彦刈
- 一种简单的慢病毒载体介导的同时沉默双基因的方法被引量：1
- 2010年
- 目的建立一种简单的慢病毒载体介导的同时沉默双基因的方法。方法该研究在慢病毒载体的3'LTR区同时插入沉默两个基因p18和MAD1的shRNA(Small hairpin RNA),通过包装细胞293T和包装质粒包装成假病毒颗粒,感染NIH/3T3细胞。其沉默基因的效果用Western blotting来检测。结果载体构建成功,被感染的NIH3T3细胞中,p18和MAD1基因的蛋白表达被显著抑制。结论该载体构建方法操作简单,无需PCR,及多次连接反应,且可达到两种基因同时被稳定、高效沉默的目的,为相关研究提供了方便。
- 左雨娜焦德敏于慧慧张铸业李宙阳袁军刘爱和王彦刈
- 关键词：SHRNA慢病毒载体
- 基于造血干细胞为靶细胞的基因治疗被引量：1
- 2011年
- 在基因治疗中,造血干细胞因为具有自我更新及分化为各种血细胞系的能力而成为一种很有吸引力的靶细胞。将外源目的基因导入造血干细胞,以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病,特别是血液疾病已取得重要进展,例如:腺苷脱氨酶缺陷病、血友病、地中海贫血症及镰状细胞性贫血症等。而慢病毒以其转染效率高,能够感染非分裂期细胞的特点成为转染造血干细胞的最适合载体,本文就造血干细胞的特性、载体的选择及临床应用和基因治疗的安全性等方面作一综述。
- 张铸业于慧慧王彦刈
- 关键词：造血干细胞基因治疗慢病毒载体
- 人红白血病细胞株K562培养上清对外周血单个核细胞的影响被引量：1
- 2011年
- 目的了解人红白血病细胞株K562分泌物对外周血单个核细胞(PBMC)的影响及其机制。方法选择K562细胞上清处理总的外周血单个核细胞(PBMC),首先用流式细胞术检测K562细胞上清对PBMC活化标志CD69和HLA-DR表达的影响,并通过改良的流式细胞术检测其增殖(数量)情况。然后进一步用流式细胞仪检测PBMC细胞的增殖指数和凋亡率以及各亚群细胞表面标志分子的表达情况。结果在K562细胞上清作用下,PBMC表面活化标志CD69和HLA-DR表达阳性细胞百分率显著增加,但是在K562细胞上清的影响下,PBMC数量明显下降。在检测对照组的增殖指数和凋亡率时,发现在培养72 h后,PBMC细胞的增殖指数明显上升,且凋亡率也显著增加。此外,在进一步对PBMC亚群的检测发现,与对照组相比,T细胞阳性细胞百分率明显下降,B细胞和单核细胞的百分率则显著上升,NK细胞无明显变化。CD4/CD8比值虽有所增加,但变化不明显。结论 K562上清虽能够诱导PBMC细胞活化,但也会诱导亚群中T细胞的大量凋亡,这可能是导致K562逃避免疫监视的原因之一。
- 于慧慧王彦刈
- 关键词：PBMC增殖活化免疫逃逸
