马锡慧 作品数:51 被引量:103 H指数:5 供职机构: 解放军第309医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 首都卫生发展科研专项 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 轻工技术与工程 建筑科学 更多>>
流式微球分析技术联合检测Cys C、NGAL方法的建立及其在肾移植术后CMV感染患者中的应用 被引量:2 2016年 目的建立流式微球分析技术联合检测胱抑素(Cys)C和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的方法,并初步研究两者在肾移植术后巨细胞病毒(CMV)感染患者血清中的含量变化。方法实验方法的建立包括检测微球包被的效果和稳定性,优化Cys C和NGAL的检测含量范围,确定生物素化抗体浓度,确定PE-链霉亲和素浓度,绘制标准曲线图确定相关系数。采用该法检测对照组(10名健康人)、CMV阴性组(10例肾移植术后CMV-pp65阴性患者)和CMV阳性组(20例肾移植术后CMV-pp65阳性患者)的血清Cys C和NGAL含量。结果成功建立流式微球分析技术联合检测Cys C和NGAL的方法。对照组、CMV阴性组和CMV阳性组的血清NGAL含量分别为8 759(1 465)pg/ml、10 472(856)pg/ml、12 817(4 533)pg/ml,依次升高且差异有统计学意义(P<0.001)。3组间Cys C比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验建立流式微球分析技术联合检测Cys C和NGAL标准曲线的方法相关性和重复性良好,并初步验证NGAL含量在肾移植术后CMV感染中明显升高,提示肾移植术后CMV活动性感染可能对肾小管造成急性损伤。 马锡慧 黄海燕 高钰 毕丽丽 孔祥瑞 刘一松 肖漓 石炳毅关键词:肾移植 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 巨细胞病毒 人类白细胞抗原半相合供者外周血细胞因子诱导的杀伤细胞治疗晚期原发性肝癌二例 被引量:1 2011年 目的观察半相合供者细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗晚期肝癌的临床疗效。方法 2例无法手术且无法耐受化疗的晚期肝癌患者分别选取人类白细胞抗原(HLA)半相合健康供者体外培养CIK,14d后分次回输给相应患者,观察患者治疗前后瘤体大小、肿瘤标志物、免疫指标、临床症状、生活质量和卡氏评分等的变化。结果 2例患者治疗后肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)分别下降9835和7000ng/L,临床症状较治疗前有明显改善。结论初步结果显示,HLA半相合供者外周血CIK细胞治疗,能改善晚期肝癌患者症状,并提高生活质量。 叶扶光 许怡薇 姚尚志 张鑫 肖漓 马锡慧 高钰 冯凯 石炳毅关键词:人类白细胞抗原 晚期肝癌 免疫治疗 小鼠肾脏特异性miR-29c表达载体的构建与鉴定 被引量:1 2015年 目的构建载体实现miR-29c在肾脏组织的特异性表达。方法分别以质粒pc DNA 3.1(+)和小鼠基因组DNA为模板,扩增CMV增强子序列和肾脏特异性钙黏着素蛋白KSP-cadherin启动子序列;将连接成的单一片段酶切后替换p CAGGS载体上的CAG启动子构成目的载体p CMV-KSP。将GFP编码区序列或小鼠miR-29c前体及两侧序列克隆到构建的载体上观察转染后目的基因的表达。结果从相应的模板上扩增出的序列经验证后连接到了p CAGGS载体上,转染细胞后在荧光显微镜下观察到KSP启动子调控下的GFP在MDCK中表达,而在NIH-3T3细胞中仅见微弱荧光。p CMV-KSP-p CAGGS-miR-29c载体较对照载体在转染人胚肾293T细胞24 h后,成熟miR-29c的表达显著升高,其靶基因bcl-2表达相应降低。结论构建KSP启动子调控miR-29c表达的载体,为构建肾脏特异性表达miR-29c转基因小鼠,进一步研究miR-29c在肾移植后的各种病理过程中的作用奠定了基础。 黄海燕 肖漓 何秀云 许晓光 樊文梅 魏玉香 马锡慧 孔祥瑞 韩永 高钰 王新颖 石炳毅关键词:转录启动子 肾移植 微RNAS 钙黏着糖蛋白类 肾移植术后淋巴细胞亚群的变化与移植肾功能恢复状况分析 被引量:4 2015年 目的分析肾移植术后淋巴细胞亚群的变化与移植肾功能恢复状况的关系。方法收集2013年9月—2014年3月收治的40例术后2周未发生感染或排斥反应的肾移植受者,术后7 d血肌酐值仍>400μmol/L的病例为延迟恢复组(n=12),其余为功能稳定组(n=28)。分别采术前、术后3、7、14 d静脉血,监测T、B淋巴细胞亚群百分比及绝对计数。结果 T、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK)百分比及绝对计数在功能稳定组与延迟恢复组中有不完全相同的变化趋势;CD4+/CD8+比值变化也不明显。与功能稳定组相比,延迟恢复组术后3 d外周血CD3+百分比明显下降,NK百分比明显升高(P<0.05);术后7 d CD3+和CD4+百分比及绝对计数均明显下降(P<0.05);术后14 d CD4+和CD4+/CD8+比值明显下降(P<0.05)。结论监测肾移植受者T、B淋巴细胞亚群百分比及绝对计数有助于指导免疫抑制药物的合理应用。 高钰 肖漓 何秀云 黄海燕 樊文梅 魏玉香 马锡慧 孔祥瑞 韩永 许晓光 王新颖 石炳毅关键词:肾移植 B淋巴细胞亚群 T淋巴细胞亚群 免疫学 肾移植受者血他克莫司浓度对外周血自然杀伤细胞及其受体的影响 2012年 目的研究肾移植受者血他克莫司(Tac)浓度对外周血自然杀伤(NK)细胞及其受体的影响。方法将2007年12月至2009年7月间的60例受者纳入研究,术后受者均采用以Tac为基础的免疫抑制方案。根据术后6个月监测到的血Tac浓度将受者分为低浓度组和高浓度组[各为30例,术后6个月时血Tac浓度分别为(6.84±1.72)和(11.88±2.59)μg/L],另以20名健康志愿者作为对照组。术前和术后6个月,采用流式细胞术检测NK细胞及其抑制性受体(CD85j和CDl58d)和活化性受体(CD94、NKG2D)的表达情况,采用酶联免疫吸附试验法检测免疫耐受分子分泌型HLA-G5(sHLA-G5)的表达水平。结果术前低浓度组和高浓度组受者外周血NK细胞绝对值均较对照组显著降低(P〈0.05),术后6个月时低浓度组和高浓度组NK细胞比例及绝对值较对照组均显著降低(P〈0.05),低浓度组NK细胞绝对值显著高于高浓度组(P〈0.05)。术前两组间CD85j、CD158d、CD94、NKG2D表达的差异均无统计学意义(P〉0.05);术后6个月时低浓度组和高浓度组CD85j和CD158d的表达较术前升高,CD94和NKG2D的表达下降,而低浓度组CD85j和CD158d的表达显著高于高浓度组(P〈0.05)。经Spearman系数统计,CD85j和CD158d与sHLA-G5呈正相关(P〈0.01),NKG2D与sHLA-G5呈负相关(P〈0.01)。结论。肾移植受者血Tac浓度与外周血NK细胞数量及其受体的表达具有相关性,低血Tac浓度受者的NK细胞数量及其抑制性受体的表达升高,仍然能有效保护移植肾功能。 肖漓 石炳毅 周文强 高钰 马锡慧 何秀云 孔祥瑞 韩永 许晓光 黄海燕关键词:肾移植 他克莫司 杀伤细胞 肾移植受者红细胞CD35、CD58、CD59表达变化 被引量:3 2015年 目的观察肾移植受者移植前后外周血红细胞膜表面CD35、CD58、CD59的表达情况。方法选择2013年1月—2015年1月肾移植受者25例及健康体检者25例,采用流式细胞术对肾移植术前、术后3、7、14 d外周血红细胞膜表面免疫分子CD35、CD58、CD59进行检测,观察红细胞免疫功能的变化情况。结果肾移植受者术前CD35、CD59表达明显低于对照组(P<0.05,P<0.01),CD35术后14 d明显低于术前,CD58术后3 d高于术前和术后14 d(P<0.05)。结论肾移植受者术前红细胞免疫功能低下,术后有所改善。红细胞免疫参与肾移植受者机体免疫功能的调节。 孔祥瑞 肖漓 刘志佳 高钰 毕丽丽 马锡慧 裴艳宏 白剑 石炳毅关键词:肾移植 红细胞 供者特异性抗体在肾移植中的作用研究进展 2015年 目前在临床中,肾衰竭有效的治疗方法之一就是肾移植。随着20世纪中期该技术的兴起,人们就对器官移植排斥反应原因展开过争论。主要以Peter Gorer和Medawar两方为代表的理论。前者认为是抗体抗原结合致其排斥反应;而后者则认为T细胞在排斥反应中起着举足轻重的作用。在随后的一段时期中,器官移植免疫学也快速发展起来。加上临床外科诊疗技术不断改善, 马锡慧 肖漓 裴艳宏 孔祥瑞 刘志佳 高钰 毕丽丽 白剑 石炳毅关键词:肾移植 抗体特异性 移植物排斥 自体骨髓移植治疗儿童1型糖尿病 被引量:1 2012年 目的探讨自体骨髓移植治疗1型糖尿病的有效性及安全性。方法 16例1型糖尿病患者采集自体骨髓并予以冻存;采用环磷酰胺+兔抗人胸腺细胞球蛋白方案预处理后经静脉回输骨髓。观察移植前后胰岛素注射剂量、糖化血红蛋白(HbA1c)水平、C肽水平、血糖水平及不良反应。结果随访(62-365)d,中位随访时间265d,68.8%(11/16)患者术后停用胰岛素,开始停用胰岛素时间在骨髓移植后(5-114)d,中位时间为21d,最长停用胰岛素360d。11例停用胰岛素患者中2例于移植后2个月左右重新使用胰岛素,5例未停用者胰岛素用量均较移植前减少(P<0.05)。移植后患者C肽水平较移植前明显上升(P<0.05),所有患者未出现长期骨髓抑制等严重不良反应。结论自体骨髓移植治疗1型糖尿病,初步结果显示临床有效性及安全性,远期疗效有待进一步验证。 冯凯 许怡薇 叶扶光 肖漓 马锡慧 高钰 张鑫 姚尚志 石炳毅关键词:骨髓移植 离体消化法分离原代肝星状细胞 被引量:2 2012年 目的:改进大鼠肝星状细胞的分离方法,提高肝星状细胞分离的纯度和活力.方法:本研究主要依据Weiskirchen的方法并加以改进,灌注后即将肝脏从原位分离,随之使用0.25%的链霉蛋白酶E和0.025%的胶原酶Ⅳ消化,经DNA酶Ⅰ分散,筛网过滤、离心,将细胞沉淀用18%Nycodenz密度梯度离心,获取肝星状细胞.台盼蓝染色鉴定细胞活率,Desmin免疫细胞化学染色法鉴定肝星状细胞纯度.结果:本方法所建立的离体消化分离肝星状细胞方法,每只大鼠肝约获取2.7×107个肝星状细胞,活率、纯度分别为99%、90%.该方法可有效减少细胞污染、提高细胞活力,值得广泛应用.结论:本文所建立的大鼠离体消化法分离肝星状细胞,方法简单可行,较大程度避免了细胞污染,提高了细胞的存活率和纯度. 樊文梅 刘德忠 肖漓 马锡慧 石炳毅关键词:肝星状细胞 细胞分离 细胞培养 肾移植术后布鲁氏菌病1例报道并文献复习 2018年 目的分析并总结肾移植术后布鲁氏菌病的临床特点和诊疗经验。方法收集解放军第309医院2016年10月收治的1例肾移植术后布鲁氏菌病患者的临床资料,分析其临床特点和诊疗经过,并结合文献复习总结临床经验。结果患者肾移植术后3个月出现无明显诱因体温升高,以上午发热为主,持续时间3 d,感染途径不明、其他感染症状不明显,经验性抗感染治疗1周效果不佳。经血培养确诊为羊布鲁氏菌感染。及时给予利福平、多西环素、复方磺胺甲恶唑抗感染,积极防治并发症,保护肝、肾功能等治疗,疗效良好。随访至该患者出院后1年,移植肾功能稳定,再未出现发热等感染症状。结论肾移植术后感染途径不明的布鲁氏菌病极为罕见,常见症状为波浪热。当经验性抗感染治疗效果不佳时,应及早多次进行血培养等相关检测尽快确诊,治疗方案为利福平与多西环素联合使用。 马锡慧 肖漓 钱叶勇 李超 石炳毅关键词:终末期肾病 肾移植 机会性感染 布鲁氏菌病 人畜共患病 传染源