孔祥瑞 作品数:44 被引量:57 H指数:4 供职机构: 解放军第309医院 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 首都卫生发展科研专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
急性移植肾排斥反应外周血NKT样细胞亚群比例分析 目的:CD3+CD56+NKT样细胞是一类同时表达T细胞抗原受体和NK细胞表面标记的异质性细胞群,其中包括CD4+、CD8+和CD4-CD8-细胞,其既兼有NK 和T细胞的特征,同时拥有天然和获得性免疫功能.NKT样细胞... 许晓光 肖漓 韩永 高钰 孔祥瑞 毕丽丽 马锡慧 石炳毅人类白细胞抗原-G阳性的脐带间充质干细胞体外诱导调节性T细胞的实验研究 2018年 目的探讨人类白细胞抗原(HLA)-G阳性的脐带间充质干细胞在体外诱导调节性T细胞(Treg)产生的效果。方法从新生儿脐带中分离脐带间充质干细胞,采用脂质体转染的方式将PEGFP-N1-HLA-G质粒转染到脐带间充质干细胞中,设为PEGFP-N1-HLA-G组;转染空载体PEGFP-N1质粒的脐带间充质干细胞设为PEGFP-N1组;相同条件下,未加入空载体的脐带间充质干细胞设为空白对照组。采用流式细胞仪检测脐带间充质干细胞标志物;采用蛋白质免疫印迹法鉴定各组细胞HLA-G蛋白的表达;各组细胞与健康人外周血中CD4+T细胞混合培养24 h和48 h后,采用流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+Treg占全部T细胞的比例。结果脐带间充质干细胞CD45、CD34和HLA-DR呈阴性表达,CD29、CD44和CD105呈阳性表达;PEGFP-N1-HLA-G组可以表达HLA-G蛋白,与空白对照组和PEGFP-N1组比较差异均有统计学意义(均为P<0.01)。PEGFP-N1-HLA-G组细胞在与CD4+T细胞混合培养24 h后,CD4+CD25+Foxp3+Treg占全部T细胞的(15.3±1.9)%,在培养48 h后,CD4+CD25+Foxp3+Treg占全部T细胞的(14.3±2.1)%,与空白对照组和PEGFP-N1组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 HLA-G基因修饰后脐带间充质干细胞能够有效地在体外诱导CD4+CD25+Foxp3+Treg的产生。 白剑 白剑 肖漓 林大勇 苗兰英 林大勇 刘鸿 高钰 陈文 毕丽丽 孔祥瑞关键词:脐带间充质干细胞 免疫排斥 CD4+T细胞 流式微球分析技术联合检测Cys C、NGAL方法的建立及其在肾移植术后CMV感染患者中的应用 被引量:2 2016年 目的建立流式微球分析技术联合检测胱抑素(Cys)C和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的方法,并初步研究两者在肾移植术后巨细胞病毒(CMV)感染患者血清中的含量变化。方法实验方法的建立包括检测微球包被的效果和稳定性,优化Cys C和NGAL的检测含量范围,确定生物素化抗体浓度,确定PE-链霉亲和素浓度,绘制标准曲线图确定相关系数。采用该法检测对照组(10名健康人)、CMV阴性组(10例肾移植术后CMV-pp65阴性患者)和CMV阳性组(20例肾移植术后CMV-pp65阳性患者)的血清Cys C和NGAL含量。结果成功建立流式微球分析技术联合检测Cys C和NGAL的方法。对照组、CMV阴性组和CMV阳性组的血清NGAL含量分别为8 759(1 465)pg/ml、10 472(856)pg/ml、12 817(4 533)pg/ml,依次升高且差异有统计学意义(P<0.001)。3组间Cys C比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验建立流式微球分析技术联合检测Cys C和NGAL标准曲线的方法相关性和重复性良好,并初步验证NGAL含量在肾移植术后CMV感染中明显升高,提示肾移植术后CMV活动性感染可能对肾小管造成急性损伤。 马锡慧 黄海燕 高钰 毕丽丽 孔祥瑞 刘一松 肖漓 石炳毅关键词:肾移植 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 巨细胞病毒 肾移植受者外周血中外泌体的HLA-G表达探讨 目的 验证肾移植受者外周血是否存在外泌体,分析中的血浆外泌体是否表达人类白细胞抗原-G(human leucocyte antigen G,HLA-G),探讨其表达与移植免疫的相关性,进一步利用外泌体实现免疫耐受提供理论... 肖漓 黄海燕 毕丽丽 高钰 孔祥瑞 何秀云 韩永 樊文梅 魏玉香 许晓光 石炳毅小鼠肾脏特异性miR-29c表达载体的构建与鉴定 被引量:1 2015年 目的构建载体实现miR-29c在肾脏组织的特异性表达。方法分别以质粒pc DNA 3.1(+)和小鼠基因组DNA为模板,扩增CMV增强子序列和肾脏特异性钙黏着素蛋白KSP-cadherin启动子序列;将连接成的单一片段酶切后替换p CAGGS载体上的CAG启动子构成目的载体p CMV-KSP。将GFP编码区序列或小鼠miR-29c前体及两侧序列克隆到构建的载体上观察转染后目的基因的表达。结果从相应的模板上扩增出的序列经验证后连接到了p CAGGS载体上,转染细胞后在荧光显微镜下观察到KSP启动子调控下的GFP在MDCK中表达,而在NIH-3T3细胞中仅见微弱荧光。p CMV-KSP-p CAGGS-miR-29c载体较对照载体在转染人胚肾293T细胞24 h后,成熟miR-29c的表达显著升高,其靶基因bcl-2表达相应降低。结论构建KSP启动子调控miR-29c表达的载体,为构建肾脏特异性表达miR-29c转基因小鼠,进一步研究miR-29c在肾移植后的各种病理过程中的作用奠定了基础。 黄海燕 肖漓 何秀云 许晓光 樊文梅 魏玉香 马锡慧 孔祥瑞 韩永 高钰 王新颖 石炳毅关键词:转录启动子 肾移植 微RNAS 钙黏着糖蛋白类 肾移植术后淋巴细胞亚群的变化与移植肾功能恢复状况分析 被引量:4 2015年 目的分析肾移植术后淋巴细胞亚群的变化与移植肾功能恢复状况的关系。方法收集2013年9月—2014年3月收治的40例术后2周未发生感染或排斥反应的肾移植受者,术后7 d血肌酐值仍>400μmol/L的病例为延迟恢复组(n=12),其余为功能稳定组(n=28)。分别采术前、术后3、7、14 d静脉血,监测T、B淋巴细胞亚群百分比及绝对计数。结果 T、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK)百分比及绝对计数在功能稳定组与延迟恢复组中有不完全相同的变化趋势;CD4+/CD8+比值变化也不明显。与功能稳定组相比,延迟恢复组术后3 d外周血CD3+百分比明显下降,NK百分比明显升高(P<0.05);术后7 d CD3+和CD4+百分比及绝对计数均明显下降(P<0.05);术后14 d CD4+和CD4+/CD8+比值明显下降(P<0.05)。结论监测肾移植受者T、B淋巴细胞亚群百分比及绝对计数有助于指导免疫抑制药物的合理应用。 高钰 肖漓 何秀云 黄海燕 樊文梅 魏玉香 马锡慧 孔祥瑞 韩永 许晓光 王新颖 石炳毅关键词:肾移植 B淋巴细胞亚群 T淋巴细胞亚群 免疫学 肾移植受者红细胞CD35、CD58、CD59表达变化 被引量:3 2015年 目的观察肾移植受者移植前后外周血红细胞膜表面CD35、CD58、CD59的表达情况。方法选择2013年1月—2015年1月肾移植受者25例及健康体检者25例,采用流式细胞术对肾移植术前、术后3、7、14 d外周血红细胞膜表面免疫分子CD35、CD58、CD59进行检测,观察红细胞免疫功能的变化情况。结果肾移植受者术前CD35、CD59表达明显低于对照组(P<0.05,P<0.01),CD35术后14 d明显低于术前,CD58术后3 d高于术前和术后14 d(P<0.05)。结论肾移植受者术前红细胞免疫功能低下,术后有所改善。红细胞免疫参与肾移植受者机体免疫功能的调节。 孔祥瑞 肖漓 刘志佳 高钰 毕丽丽 马锡慧 裴艳宏 白剑 石炳毅关键词:肾移植 红细胞 供者特异性抗体在肾移植中的作用研究进展 2015年 目前在临床中,肾衰竭有效的治疗方法之一就是肾移植。随着20世纪中期该技术的兴起,人们就对器官移植排斥反应原因展开过争论。主要以Peter Gorer和Medawar两方为代表的理论。前者认为是抗体抗原结合致其排斥反应;而后者则认为T细胞在排斥反应中起着举足轻重的作用。在随后的一段时期中,器官移植免疫学也快速发展起来。加上临床外科诊疗技术不断改善, 马锡慧 肖漓 裴艳宏 孔祥瑞 刘志佳 高钰 毕丽丽 白剑 石炳毅关键词:肾移植 抗体特异性 移植物排斥 环保脱蜡替代二甲苯在肝肾标本病理制片中的应用 【背景】肝、肾穿刺标本病理学检查是肝硬化检测及肾移植术后排斥反应诊断的'金标准',制作优质的石蜡切片尤为重要。在制作病理切片的过程中,最常用的透明剂是二甲苯,但二甲苯对人体神经毒性强并且对病理组织的收缩性强,易使组织变硬... 马锡慧 肖漓 高钰 孔祥瑞外周血标本处理方法和时间影响可溶型CD100的水平 被引量:2 2015年 目的观察血清和血浆标本不同处理方法和时间对外周血可溶型CD100(sCD100)水平的影响。方法用未加促凝剂血清采血管、含硅化涂层促凝管以及肝素抗凝管、乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管和枸橼酸钠抗凝管,分别在凝血1、4、8 h,分别收集2种血清收集管内血清标本。采用ELISA检测标本中sCD100水平,比较不同标本和时间处理对sCD100检测水平的影响。结果不同抗凝剂处理后的血浆标本中,sCD100检测结果无明显差异。血清标本sCD100水平明显高于血浆标本。使用促凝剂血清sCD100水平高于无促凝剂血清sCD100水平。在室温条件下,血清标本随着凝血时间的延长,sCD100水平逐渐升高。结论血清中sCD100水平显著高于血浆,处理时间延长可引起血清sCD100水平进一步增高。在定量检测白细胞和血小板膜分子的可溶型标志物时,应注意标本收集过程中的标准化。 刘志佳 张春梅 李琦 肖漓 孔祥瑞 许晓东 石炳毅关键词:血清 血浆 酶联免疫吸附法