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H9N2亚型禽流感病毒辽宁分离株HA1蛋白的原核表达被引量：4: 2013年; 为表达H9N2亚型禽流感病毒的HA1蛋白,从H9N2亚型禽流感病毒辽宁分离株中扩增其HA1基因片段,将扩增得到的HA1基因克隆至原核表达载体pGEX-6p-1中,转化到BL21(DE3)中进行表达。结果表明,IPTG诱导融合蛋白表达条件确定最佳诱导时间为8h,IPTG最佳终浓度为0.8mmol/L。经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,表达产物的分子质量约为61ku。; 陈欣张乐萃卢春晓尹燕博; 关键词：H9N2亚型禽流感病毒疫苗大肠埃希菌

CDV、CPV和CPIV多重PCR检测方法的建立被引量：8: 2013年; 为了建立一种快速诊断犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的多重PCR方法,参照GenBank中的犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬副流感病毒(CPIV)基因序列,设计了3对引物分别用于特异扩增犬瘟热病毒F基因、犬细小病毒VP2基因和犬副流感病毒F基因上的目的片段。通过优化反应条件,建立同时扩增CDV(740bp)、CPV(419bp)和CPIV(559bp)的多重PCR方法。结果表明特异性和敏感性良好,对CDV、CPV、CPIV 3种病毒的最低核酸检测量为1ng/μL。临床样品的多重PCR检测结果表明,建立的多重PCR方法能够对CDV、CPV、CPIV单个感染或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。; 康泰毕玉敏陈欣孙忠晟王祖荣尹燕博; 关键词：多重PCR 犬瘟热病毒犬细小病毒犬副流感病毒

丛枝菌根真菌多样性研究: 刘润进李敏陈欣赵之伟郭绍霞; 该项目对崂山、泰山植被区、崂山茶区、农田、蔬菜保护地、云南干热河谷、湿热环境、水生环境、铅锌矿区等生态系统中丛枝菌根真菌(AMF)资源、多样性、分布状况及其生态学进行了研究。共分离到AMF6属89种。其中，新记录种5个，...; 关键词：; 关键词：丛枝菌根真菌生态系统

H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术的建立与应用: 2014年; 为建立H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,参考Gen Bank登录的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA、M基因序列,利用Primer Premier5.0软件设计3对可扩增HA、NA、M基因的特异性引物以及反转录引物。3对引物扩增的c DNA片段大小分别为1 742、1 410、1 027 bp。结果:通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,与目的片段大小相符的片段,经测序均正确,且与其他常见禽病病原不存在交叉反应。该方法对HA基因的最低检出量为10-2μg/μL c DNA,对NA基因的最低检出量为10-2μg/μL c DNA,对M基因的最低检出量为10-3μg/μL c DNA。通过对30份H9N2阳性病毒液进行三重PCR,均可同时扩出HA、NA、M基因。结果表明,本试验建立了H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,为提高H9N2亚型禽流感病毒HA、NA、M基因序列分析的效率奠定基础。; 陈欣尹燕博张乐萃卢春晓; 关键词：H9N2亚型禽流感 HA基因 NA基因 M基因

猪流行性腹泻病毒S蛋白部分抗原表位基因的原核表达及表达产物的免疫原性分析被引量：5: 2014年; 为获取具有免疫原性的猪流行性腹泻病毒S蛋白,并能有效研究其免疫原性,从山东省猪流行性腹泻病毒感染的某猪场病料中扩增S蛋白基因具有免疫原性的4个片段(Sa,Sb,Sc和Sd)。将得到的目的片段导入原核表达载体pGEX-6P-1中,转化到BL21(DE3)感受态细胞中进行表达。将表达的蛋白免疫家兔以研究其免疫原性。结果表明,IPTG诱导融合蛋白表达条件的最佳诱导时间为8h,IPTG的最佳终浓度为1.0mmol/L。SDS-PAGE和Western-blot分析表明,四个表达产物的分子质量分别约为61ku(Sa)、46ku(Sb)、41ku(Sc)、43ku(Sd)。经琼脂扩散试验测定,它们免疫后效价分别约为24(Sa)、25(Sb)、22(Sc)、24(Sd)。该研究表明,表达的4段蛋白均具有免疫原性,这为后期亚单位疫苗的研制奠定了基础。; 毕玉敏陈欣李昌静刘永举朱丰龙时超尹燕博; 关键词：猪流行性腹泻病毒 S基因免疫原性

比格犬β-防御素cBD1基因的原核表达与鉴定: 2014年; 为获得比格犬β-防御素cBD1基因的表达产物,根据GenBank中登录的犬β-防御素基因cBD1(canis familiarisβ-defensin-like peptide 1)的序列设计引物,提取比格犬睾丸组织总RNA,利用PCR扩增cBD1基因,然后将其克隆至pET-32a(+)载体,构建原核表达质粒pET-32a-cBD1,通过PCR、酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了约28ku的表达产物,与预期大小的β-防御素cBD1的分子质量相一致。Westernblot分析表明,表达产物与抗His标签鼠单克隆抗体发生反应,显示重组蛋白获得了表达。结果表明,成功表达的cBD1为新型抗菌制剂的研制奠定了试验基础。; 冯培祥潘福星毕玉敏郭学金陈欣杨莉徐守振王建琳郭妍妍尹燕博; 关键词：比格犬 Β-防御素原核表达

一种H9N2亚型禽流感病毒三个基因的多重逆转录扩增方法: 本发明目的是提供一种H9N2亚型禽流感病毒三个基因的多重逆转录扩增方法，可快速同时扩增H9N2亚型禽流感病毒的HA、NA、M三个全长基因。本发明首先提供能够同时扩增H9N2亚型禽流感病毒的HA、NA、M三个全长基因的引...; 张乐萃陈欣尹燕博单虎; 文献传递

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陈欣