董建一
- 作品数：24 被引量：108H指数：7
- 供职机构：大连医科大学实验动物中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省科学技术计划项目教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 甲状腺激素对Ras癌基因诱导的肝肿瘤抑制作用研究被引量：7
- 2015年
- 目的甲状腺激素(thyroid hormones,THs)对肿瘤发生发展的作用机制尚存争议。本研究探讨THs对Ras癌基因诱导小鼠肝肿瘤发生发展的影响作用。方法采集3、5、7、9个月龄的非转基因和H-ras12V转基因雄鼠(48只)的肝组织和血清样本,统计肝/体质量比,并用酶联免疫法检测血清中总T3、T4水平和游离T3、T4水平;RT-qPCR法和蛋白质印迹法检测9个月龄的非转基因和转基因雄鼠肝组织中THs结合蛋白(thyroid binding globulin,TBG)的mRNA水平和Cyclin D1的蛋白水平。将36只SPF级3个月龄转基因雄鼠按随机数表法分为对照组、甲亢组(饲喂甲状腺片)、甲减组(饲喂丙硫氧嘧啶片),每组12只,处理4个月,7个月龄时采样,检测小鼠血清中总T3和T4水平,统计肝/体质量比、肝肿瘤大小及数量。结果 3、5、7、9个月龄的转基因雄鼠肝/体质量比随月龄的增大逐渐增高,并显著高于同月龄非转基因雄鼠,P<0.01。与9个月龄的非转基因雄鼠相比,同月龄转基因雄鼠血清中总T3和T4水平显著升高(P<0.01),但游离T3和T4水平没有显著变化。与9个月龄的非转基因雄鼠肝组织及转基因雄鼠的肝癌旁组织相比,肝癌组织中TBG的mRNA表达水平和Cyclin D1蛋白水平都显著升高,P<0.01。与对照组相比,甲亢组的T3和T4水平显著升高(P<0.05),甲减组的显著降低,P<0.05。与甲减组相比,甲亢组的肝/体质量比和肝肿瘤总数都显著下降,P<0.05。与甲减组相比,甲亢组直径≥2mm的肝肿瘤数量显著下降(P<0.05),但<2mm的肝肿瘤数量差异无统计学意义。结论 THs对Ras癌基因诱导的肝肿瘤发展具有显著抑制作用,但对肝肿瘤发生没有显著影响。
- 张敏聂鑫董建一李慧玲王福金王爱国王靖宇
- 关键词：RAS癌基因甲状腺激素肝肿瘤转基因小鼠
- 建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型的探讨被引量：6
- 2010年
- 目的探讨Ⅱ型糖尿病SD大鼠模型的稳定性与耐受性。方法采用连续4周喂养高脂饲料后,空腹一次性注射25 mg/kg链脲佐菌素的方法,建立Ⅱ型糖尿病SD大鼠模型。结果造模7 d后血糖值均高于6.78 mmol/L。持续观察22 d,血糖值后期略有波动,但稳定性与耐受性良好(均高于6.78 mmol/L)。结论采用高脂饮食,联合空腹一次性注射25 mg/kg链脲佐菌素的方法能成功建立Ⅱ型糖尿病SD大鼠模型。该方法建立模型简单、用药量小,有良好的稳定性与耐受性。
- 董建一王亮王福金李慧玲詹红微王靖宇
- 关键词：SD大鼠模型稳定性耐受性
- 标准品制备方法对FQ-PCR定量基因表达水平的影响被引量：2
- 2012年
- 实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准曲线法准确定量基因表达的关键在于标准品与待检样本的扩增效率是否一致.为检测DNA标准品与样本cDNA扩增效率的一致性,探讨定量用标准品的最佳制备方法,本研究以脂肪酸结合蛋白5(Fabp5)、过氧化物酶体增殖活化受体α(Ppar-α)及β肌动蛋白(β-Actin)的3个基因为对象,分别采用质粒纯化法、PCR产物直接纯化法、PCR产物凝胶回收法制备DNA标准品,10倍梯度稀释后用FQ-PCR制作标准曲线.并以10倍梯度稀释的样本cDNA标准曲线的参数为对照,进行比较分析.结果表明,不同方法制备的DNA标准品的扩增效率差异较大,并且与cDNA的扩增效率不一致,不能对cDNA样本进行准确定量.另外,虽然目的基因在cDNA样本中的拷贝未知,不能对基因表达水平进行绝对定量,但因不同cDNA样本的同一基因的扩增效率一致,可对基因的表达进行准确的相对定量.
- 陈军李慧玲董建一王福金王爱国王靖宇
- 关键词：实时荧光定量PCRCDNA
- 小鼠肝肿瘤细胞原位灌注分离培养方法的建立被引量：1
- 2015年
- 目的建立一种有效分离小鼠肝肿瘤细胞的原代培养方法,为肝癌发生发展的机制研究提供有效的实验手段。方法以9月龄H-ras12V转基因肝癌小鼠为实验材料,采用传统的小鼠肝细胞原代培养的灌注分离法,并对其进行改进,即在灌注的同时,用剪刀剪去肿瘤表面阻塞的血管和组织,疏通灌注液流,达到有效消化肿瘤组织的目的。对用此改良灌注法分离的肝肿瘤细胞和肿瘤周围组织细胞进行成活率计数,并进行后续的原代细胞培养,观察第3、5、7天的细胞生长状态和形态特征。结果通过对传统的灌注分离肝细胞法进行改良,分离的肝肿瘤细胞成活率由未改良前的10%提升到40%。原代培养的结果表明,分离的肝肿瘤细胞与肝肿瘤周围的正常肝细胞的形态和随时间延长的凋亡变化状态没有显著差异。结论改良的灌注法能够有效的分离小鼠肝肿瘤细胞,并显著提高其存活率和细胞质量,可用于后续的原代细胞培养并开展相关的实验。另外,本文对改良灌注法的详细叙述也为相关的科研工作者提供了切实可行的操作规程。
- 李学凤陈军庄云芳董建一李慧玲王福金王爱国王靖宇
- 关键词：肝肿瘤原代细胞培养
- 三种SPF小鼠垫料的比较被引量：8
- 2012年
- 目的对杨木刨花、纸屑、玉米芯的物理性状、微生物含量及毒性等进行比较,寻找适合作为SPF小鼠垫料的材料。方法通过吸水试验、干燥试验、隔热试验、保温试验、适应性观察、微生物检测、粉末率测定、急性毒性试验、饥饿试验,比较小鼠对3种材料的适合性及安全性。结果 3种垫料吸水性和保湿性较好,差异不显著;保温性和隔热性能玉米芯优于杨木刨花和纸屑;小鼠对3种垫料的适应性均较好;3种垫料对小鼠均无毒性;粉末率玉米芯和纸屑为零;玉米芯中无可维持小鼠生命的营养,优于其他两种垫料。结论玉米芯在所有检测项目中均符合垫料标准,是一种较理想的SPF小鼠垫料。
- 詹红微王福金刘亚奇高丽波邱泽文高文婷董建一王靖宇
- 关键词：垫料适合性安全性
- 一种简便、高效的实时荧光PCR相对定量方法的建立被引量：5
- 2012年
- 目的建立一种简便、高效的实时荧光PCR相对定量方法。方法采用严格一致的引物参数,对Fabp5、Ppar-α及β-Actin三个基因分别设计特异性扩增引物,制备相应的质粒标准品,10倍梯度稀释后制作标准曲线。并以这三个标准曲线分别单独定量正常小鼠肝组织、H-ras12V转基因小鼠肝肿瘤周围组织和肿瘤组织中的Fabp5、Ppar-α和β-Actin的表达水平,以β-Actin为内参,分别采用双标准曲线法、2-△△Ct法和单标准曲线法对Fabp5和Ppar-α的表达进行相对定量分析。结果单标准曲线法与双标准曲线法测定的Fabp5和Ppar-α差异性表达的相对定量值没有显著差异,而用2-△△Ct法获得的相对定量值与双标准曲线法相比,波动较大。结论在引物参数严格一致的基础上,单标准曲线法是一种可行、简便、高效的实时荧光PCR相对定量方法。
- 陈军王银李慧玲董建一王福金王爱国王靖宇
- 关键词：实时荧光定量PCR
- HCV NS5A转基因小鼠的遗传不稳定性分析
- 目的:探讨HCV NS5A转基因小鼠的肝癌发生与遗传不稳定的关系以及其中ROS的作用.方法:选取小鼠10个微卫星位点,用微卫星标志物的聚合酶链反应检测NS5A转基因小鼠肝肿瘤和其周围组织的微卫星杂合性缺失(LOH)、杂合...
- 李慧玲陈红董建一王福金李鹏王爱国王靖宇
- 关键词：肝肿瘤病理机制基因检测
- 文献传递
- 三种麻醉药物对小鼠麻醉效果的比较被引量：16
- 2012年
- 目的比较三种常用麻醉药阿佛丁、水合氯醛、乌拉坦的麻醉效果,探索最适合于C57BL/6J品系小鼠的麻醉方法。方法三种麻醉药物分别以剂量梯度对C57BL/6J小鼠进行腹腔注射,比较不同剂量下的麻醉起效时间、麻醉深度、麻醉维持时间及恢复时间。结果阿佛丁(1.2%)以0.60～0.65mL/20g剂量效果最好,水合氯醛(4%)以0.20mL/20g剂量效果较好,乌拉坦不适用于C57BL/6J小鼠的麻醉实验。结论腹腔注射阿佛丁(0.60mL/20g)和水合氯醛(0.20mL/20g)是适合于C57BL/6J品系小鼠全身麻醉的起效时间最短,维持时间和麻醉深度适度,死亡率为0,麻醉效果较佳的麻醉方法。
- 詹红微邱泽文李慧玲董建一王爱国王福金王靖宇
- 关键词：C57BL/6J麻醉水合氯醛
- 气质测试在导盲犬培育中的应用被引量：10
- 2012年
- 传统的导盲犬培育方法不仅成功率低(30%～40%),而且成本高(约15万元/只),与我国1 691万视障人士的需求相比,存在着极大的差距。因此,为提高导盲犬的培训成功率,急需寻求经济实用、有效的早期筛选和培育的方法,气质测试便是良好候选方法之一。犬的气质是指具有规律性,稳定倾向性,能持续地决定各种情境下的行为特征。气质测试已广泛地应用于犬的行为评估,但在应用预测使犬成为导盲犬的报道较少。本文就气质测试在预测成功培训犬达到能为视障人士服务的导盲犬的应用、分析方法及影响因素等方面进行了概述。
- 王爱国王福金王亮李慧玲董建一王靖宇
- 关键词：导盲犬气质
- LXR-alpha/SREBP-1c通路参与HCV NS5A诱导的肝细胞脂质代谢紊乱被引量：5
- 2014年
- 肝细胞脂肪变性是丙型肝炎患者的突出病理特征,但丙肝病毒（HCV）诱导脂肪变性的分子机制尚不清楚.为探究HCV非结构蛋白5A（NS5A）参与诱导脂肪变性的可能分子机制,本研究以HCV NS5A转基因小鼠为研究对象,采集3～16月龄NS5A转基因小鼠和同窝非转基因小鼠的肝组织,进行病理学检测,并用气相色谱-质谱（GC-MS）法分析脂质主要成分胆固醇酯的含量.采用RT-PCR法检测肝细胞中与脂质代谢密切相关基因肝X受体（LXR-alpha）、固醇调节元件结合蛋白（SREBP-1c）、脂肪酸合成酶（FAS）、硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD1）、过氧化物酶体增殖物受体alpha（PPAR-alpha）的mRNA表达水平.结果表明,与同窝非转基因对照小鼠相比,3～5月龄NS5A转基因小鼠的肝组织没有发生显著的病理性变化,但6～16月龄的NS5A转基因小鼠的肝脏发生了显著的脂肪变性（47.1%vs 13.0%;P=0.003）.与此相一致,胆固醇酯的含量在NS5A转基因小鼠的肝脏中显著升高（P〈0.01）.RT-PCR检测结果表明,与对照小鼠相比,14月龄NS5A转基因小鼠肝组织中与脂质代谢相关的基因LXR-alpha、SREBP-1c、FAS、SCD1的mRNA表达水平显著增高（P〈0.05）,而PPAR-alpha的表达则没有显著变化（P〉0.05）.以上结果提示,NS5A在小鼠肝细胞中可能通过调高LXR-alpha/SREBP-1c信号通路相关基因的表达,进而促进脂质重新合成,诱导脂肪变性.
- 陈军邱泽文高文婷李慧玲董建一王福金王爱国王靖宇
- 关键词：非结构蛋白5A脂肪变性
