李慧玲
- 作品数：31 被引量：105H指数：7
- 供职机构：大连医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省科学技术计划项目大连市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 小鼠肝肿瘤细胞原位灌注分离培养方法的建立被引量：1
- 2015年
- 目的建立一种有效分离小鼠肝肿瘤细胞的原代培养方法,为肝癌发生发展的机制研究提供有效的实验手段。方法以9月龄H-ras12V转基因肝癌小鼠为实验材料,采用传统的小鼠肝细胞原代培养的灌注分离法,并对其进行改进,即在灌注的同时,用剪刀剪去肿瘤表面阻塞的血管和组织,疏通灌注液流,达到有效消化肿瘤组织的目的。对用此改良灌注法分离的肝肿瘤细胞和肿瘤周围组织细胞进行成活率计数,并进行后续的原代细胞培养,观察第3、5、7天的细胞生长状态和形态特征。结果通过对传统的灌注分离肝细胞法进行改良,分离的肝肿瘤细胞成活率由未改良前的10%提升到40%。原代培养的结果表明,分离的肝肿瘤细胞与肝肿瘤周围的正常肝细胞的形态和随时间延长的凋亡变化状态没有显著差异。结论改良的灌注法能够有效的分离小鼠肝肿瘤细胞,并显著提高其存活率和细胞质量,可用于后续的原代细胞培养并开展相关的实验。另外,本文对改良灌注法的详细叙述也为相关的科研工作者提供了切实可行的操作规程。
- 李学凤陈军庄云芳董建一李慧玲王福金王爱国王靖宇
- 关键词：肝肿瘤原代细胞培养
- 615小鼠染色体组型与G带带型分析被引量：1
- 2007年
- 目的建立615小鼠标准染色体组型与G带染色体核型,提供可靠的细胞遗传学背景资料。方法成年615小鼠8只,雌雄各半,提取骨髓细胞,制片,镜检。确立615小鼠体细胞染色体数目。选择10个典型细胞测量染色体基本数据。G带染色。结果615小鼠的染色体数目为40条,XX为雌性,XY为雄性。所有染色体均为中部着丝点。X染色体相对长度仅次于第1对染色体,Y染色体的相对长度在第4对染色体和第5对染色体之间。G显带条数与小鼠有很大差异,接近于大鼠。结论615小鼠的核型为2n=40=2×19m+(x)m+(y)m,G显带共262条。
- 王曦李红霞李慧玲高文婷王靖宇
- 关键词：小鼠染色体组型
- 长爪沙鼠的生理及行为研究初探被引量：2
- 2007年
- 观察40只长爪沙鼠的生活及生产行为系列特征,测定了20只长爪沙鼠血液生理生化指标20项。长爪沙鼠的行为学特征研究表明,长爪沙鼠的食性广泛,部分长爪沙鼠有囤积食物行为,饮水少,耐干旱;性情温顺,行动敏捷,喜欢群居。在繁殖时期,长爪沙鼠一雌一雄制交配行为较为明显。在长爪沙鼠离乳时合笼,能和睦生活、交配、产仔、哺乳。成年后合笼,则雌鼠可能拒绝交配,如果在饲养过程中雌鼠或雄鼠死亡,则不容易再给存活的种鼠配对。同一长爪沙鼠种群里,在部分血液生化指标的比较中,UA,CHO,TG,ALP,GOT和LDH的测定值存在显著差异,其中UA,GOT和LDH的含量雌性高与雄性。血液生理指标测定表明,雌雄个体之间在,WBC,RBC,PLT,MCHC,WS,WM和WL上存在显著差异,其中,RBC,WM和WL的含量雌性高于雄性,其余无显著差异。结果表明:长爪沙鼠的繁殖宜采用一雌一雄方式,离乳时合笼。性别对其部分血清生化指标和血液生理指标有显著影响。
- 朱景丽王靖宇李慧玲
- 关键词：长爪沙鼠清洁级行为学
- 偏侧性测试在预测成功导盲犬中的应用被引量：13
- 2012年
- 对偏侧性测试在预测成功导盲犬中的应用进行了论述,介绍了偏侧性的概念、分类、主要测试方法、测试时机及注意事项等。
- 王福金王爱国王亮李慧玲董建一王靖宇
- 关键词：导盲犬
- miR-146a/b在Hep3B细胞中的表达及上下游调控机制探讨被引量：2
- 2016年
- 目的:探究miR-146a/b在Hep3B的表达及其上游调控机制和下游靶标蛋白。方法:MTT法检测人正常肝细胞株LO2和人肝癌细胞株HepG2、Hep3B的增殖活性。分别提取3个细胞的总RNA和蛋白,应用RT-qPCR和蛋白印记法分别检测细胞株中miR-146a/b的表达和细胞外调节激酶1/2(ERK)、磷酸化ERK 1/2(p-ERK1/2)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、NF-κB抑制蛋白α亚基(IκBα)、白介素1受体关联激酶1(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)的蛋白水平。用抑制剂分别抑制Hep3B细胞PI3K、AKT、ERK、NF-κB信号分子的活性并检测miR-146a/b的表达水平及IRAK1、TRAF6的蛋白水平。结果 Hep3B细胞增殖活力和miR-146a/b表达水平显著高于LO2和HepG2(P<0.01)。蛋白印记结果显示,以LO2为对照组,Hep3B细胞的pERK1、ERK1、p-AKT、IκB的蛋白水平明显升高,分别为LO2的10.87、24.68、6.67和1.92倍;IRAK1、TRAF6的蛋白水平明显降低,分别为LO2的0.23和0.003倍。与LO2细胞相比,HepG2细胞的IκB和IRAK1蛋白表达明显升高,分别为LO2的4.46和2.69倍。抑制Hep3B细胞的PI3K和AKT活性12 h和24 h,miR-146a和miR-146b的表达水平显著降低(P<0.05);抑制ERK和NF-κB的活性12 h和24 h,miR-146a/b的表达水平没有显著变化。抑制PI3K、AKT、ERK、NF-κB信号通路活性均可上调TRAF6和下调IRAK1的蛋白表达水平。结论:在恶化程度较高的Hep3B细胞中,PI3K/AKT可通过上调miR-146a/b的表达进而下调TRAF6的蛋白水平,这一机制为肝肿瘤发生发展的机理研究提供了重要线索。
- 董建一王欣欣王康伟陈军李慧玲王福金王爱国王靖宇
- 关键词：PI3K/AKTTRAF6
- HCV NS5A转基因小鼠的遗传不稳定性分析
- 目的：探讨HCV NS5A转基因小鼠的肝癌发生与遗传不稳定的关系以及其中ROS的作用。方法：随机选取小鼠10个微卫星位点,用微卫星标志物的聚合酶链反应检测NS5A转基因小鼠肝肿瘤和其周围组织的微卫星杂合性缺失(LOH)、...
- CHEN Hong陈红LI Hui-ling李慧玲DONG Jian-yi董建一Wang Fu-jin王福金Li Pen李鹏WANG Ai-guo王爱国WANG Jing-yu王靖宇
- 关键词：实验动物稳定性分析肝肿瘤
- 甲状腺激素对Ras癌基因诱导的肝肿瘤抑制作用研究被引量：7
- 2015年
- 目的甲状腺激素(thyroid hormones,THs)对肿瘤发生发展的作用机制尚存争议。本研究探讨THs对Ras癌基因诱导小鼠肝肿瘤发生发展的影响作用。方法采集3、5、7、9个月龄的非转基因和H-ras12V转基因雄鼠(48只)的肝组织和血清样本,统计肝/体质量比,并用酶联免疫法检测血清中总T3、T4水平和游离T3、T4水平;RT-qPCR法和蛋白质印迹法检测9个月龄的非转基因和转基因雄鼠肝组织中THs结合蛋白(thyroid binding globulin,TBG)的mRNA水平和Cyclin D1的蛋白水平。将36只SPF级3个月龄转基因雄鼠按随机数表法分为对照组、甲亢组(饲喂甲状腺片)、甲减组(饲喂丙硫氧嘧啶片),每组12只,处理4个月,7个月龄时采样,检测小鼠血清中总T3和T4水平,统计肝/体质量比、肝肿瘤大小及数量。结果 3、5、7、9个月龄的转基因雄鼠肝/体质量比随月龄的增大逐渐增高,并显著高于同月龄非转基因雄鼠,P<0.01。与9个月龄的非转基因雄鼠相比,同月龄转基因雄鼠血清中总T3和T4水平显著升高(P<0.01),但游离T3和T4水平没有显著变化。与9个月龄的非转基因雄鼠肝组织及转基因雄鼠的肝癌旁组织相比,肝癌组织中TBG的mRNA表达水平和Cyclin D1蛋白水平都显著升高,P<0.01。与对照组相比,甲亢组的T3和T4水平显著升高(P<0.05),甲减组的显著降低,P<0.05。与甲减组相比,甲亢组的肝/体质量比和肝肿瘤总数都显著下降,P<0.05。与甲减组相比,甲亢组直径≥2mm的肝肿瘤数量显著下降(P<0.05),但<2mm的肝肿瘤数量差异无统计学意义。结论 THs对Ras癌基因诱导的肝肿瘤发展具有显著抑制作用,但对肝肿瘤发生没有显著影响。
- 张敏聂鑫董建一李慧玲王福金王爱国王靖宇
- 关键词：RAS癌基因甲状腺激素肝肿瘤转基因小鼠
- 原代培养对成年小鼠肝组织及肝癌组织理化特性的影响
- 2017年
- 目的探讨体外培养对成年小鼠肝组织及肝癌组织理化特性的影响。方法采取9月龄H-ras12V转基因雄性小鼠的肝癌组织和癌旁组织及C57/BL6J正常雄性小鼠的正常肝组织进行体外培养,苏木精-伊红染色法检测肝组织在12 d内的生长状态;考马斯亮蓝染色法检测组织中总体蛋白在48 h内的变化趋势;Western blot法检测48 h内培养组织中p-ERK、p-AKT、p-mTOR、GAPDH和Cyclin D1的蛋白表达水平;RT-qPCR法检测48 h内培养组织中18s RNA、Cyclin D1、GAPDH、UQCRB的mRNA表达水平。结果体外培养6 d内,正常雄性小鼠肝组织、H-ras12V转基因雄性小鼠肝癌及癌旁组织的细胞形态变化相似,存活状态良好。体外培养6 d后,正常肝细胞和癌旁细胞逐渐减少,相比之下,肝癌细胞开始出现大量死亡,但出现少数克隆样细胞团。考马斯亮蓝染色检测结果显示,正常肝组织、肝癌组织和癌旁组织的总体蛋白变化趋势相似,随培养时间的延长,在130~170 k D之间的蛋白条带丰度先升高再降低,40~130 k D之间的蛋白条带丰度逐渐增加。Western Blot检测结果显示,随着体外培养时间的延长,组织中p-ERK、p-AKT、p-mTOR、GAPDH和Cyclin D1的蛋白表达水平呈逐渐下降趋势。RT-qPCR检测结果显示,Cyclin D1在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞和GAPDH在正常肝细胞、癌旁细胞中随培养时间的延长,呈现逐级升高趋势;而GAPDH在肝癌细胞和UQCRB在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞中随培养时间的延长,呈现先下降后又逐渐升高的趋势;18s RNA的mRNA表达水平在正常肝细胞、肝癌细胞及癌旁细胞中没有规律性趋势变化。结论成年小鼠肝组织及肝癌组织在体外培养期间,虽然肝细胞的形态学变化不明显,存活良好,但短时间内,众多基因在mRNA和蛋白的表达水平上发生了显著的变化,对实验结果将有较大的影响。
- 庄云芳樊婷婷童仁洋李学凤李慧玲王福金王爱国王靖宇
- 关键词：肝组织肝癌组织成年小鼠
- SPF级615小鼠的制作
- 目的：通过剖腹产法获得无特定病原体动物（SPF）级健康615小鼠。 方法：在无菌条件下，将孕19天的普通级615小鼠断颈处死，用2﹪过氧乙酸消毒，剖腹进行子宫摘除术，然后将子宫消毒移入超净台内，用无菌水冲洗，剖开子宫取出...
- 李慧玲
- 关键词：实验动物
- 文献传递
- 肝癌细胞miR-183表达及上下游调控机制探讨被引量：3
- 2016年
- 目的 miR-183的显著上调已成为临床肝肿瘤发生的普遍特征,但其在肝癌发生中的分子机制亟待阐明。本研究探讨肝癌细胞Hep3B中miR-183的表达及其上游调控机制和下游靶标蛋白变化。方法 MTT法检测人正常肝细胞株LO2及人肝癌细胞株HepG2、Hep3B的细胞增殖活性。提取细胞的总RNA和蛋白,采用RT-qPCR和蛋白印迹法分别检测细胞株中miR-183的表达和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(phospho-ERK1/2,p-ERK1/2)、磷酸化胞内磷脂酰肌醇激酶(phospho-phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-AKT)、NF-κB抑制蛋白α亚基(nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor,alpha,IκBα)和程序性细胞死亡因子4(programmed cell death factor 4,PDCD4)的蛋白水平。用抑制剂分别抑制Hep3B细胞ERK、PI3K、AKT和NF-κB信号分子的活性并检测miR-183的表达水平及PDCD4蛋白表达水平。结果 LO2、HepG2和Hep3B细胞在48h的增殖倍数分别为8.76±0.22、16.61±1.59和19.86±0.69,F=159.90,P<0.001。与LO2(41.68±9.62)和HepG2(41.53±1.20)细胞相比,Hep3B(69.15±11.02)的miR-183细胞表达水平显著升高,F=10.250,P=0.012。与LO2相比,Hep3B细胞的p-ERK1、ERK1、p-AKT和IκBα的蛋白水平明显升高,分别为LO2的10.87、24.68、6.67和1.92倍;PDCD4的蛋白水平明显下降,为LO2的0.14倍。与LO2细胞相比,HepG2细胞的IκBα和PDCD4蛋白表达明显升高,分别为LO2的4.46和7.90倍。抑制ERK的活性后24h,miR-183表达水平显著上升,F=215.459,P<0.001;抑制Hep3B细胞的PI3K活性后12和24h,miR-183表达水平显著降低,F=80.215,P<0.001;抑制AKT的活性后12和24h,miR-183表达水平显著下降,F=101.947,P<0.001;抑制NF-κB的活性后12和24h,miR-183表达水平没有显著变化,F=1.826,P=0.216。抑制ERK和NF-κB信号分子活性对PDCD4的蛋白表达没有显著影响。抑制PI3K和AKT信号分子活性可明�
- 王欣欣崔海鹏董建一李慧玲陈军王福金王爱国王靖宇
- 关键词：ERKPI3K/AKTNF-KBPDCD4肝癌
