申利红
- 作品数：10 被引量：14H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HBX基因对肝前体细胞增殖凋亡及分化的影响
- 随着肿瘤干细胞理论的提出，大量证据显示正常肝干细胞可以作为癌起源细胞在肝癌的发生发展中起作用。HBV病毒编码的HBx蛋白与肝癌的发生密切相关，但目前对HBx调节肝前体细胞生物学行为的研究甚少。
本研究主要集中在HB...
- 申利红
- 关键词：HBX蛋白肝前体细胞肝细胞肝癌增殖凋亡
- Wnt3a对小鼠破骨细胞分化调控的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨Wnt3a对小鼠破骨细胞分化调控的影响。方法将细胞分为4组:阴性对照组(即空白组)、实验对照组(感染Ad-GFP组)、阳性对照组(50 ng/ml RANKL诱导组)、实验组(感染Ad-Wnt3a组)。分别给予处理因素后常规细胞培养6 d,通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞的分化成熟情况;Western blot检测TRAP、Cathep-sin K蛋白的表达;分别于处理因素后3、6、9 d提取细胞总RNA,荧光定量Real time(RT-PCR)检测核因子κB受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(Cathepsin K)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因的表达。结果TRAP染色显示50 ng/mL RANKL诱导组能成功诱导RAW 264.7成多核(核≥10),空白组和Ad-GFP组有少量多核细胞(3≤核≤5),Ad-Wnt3a组为单核有个别双核;Western blot检测显示Ad-Wnt3a组TRAP、Cathepsin K蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测Ad-Wnt3a组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K、MMP-9基因的表达。结论Wnt3a能抑制RAW264.7分化成成熟的破骨细胞。
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- 关键词：WNT3ARANKLTRAP
- 稳定表达HBX蛋白的肝干细胞株的构建和鉴定
- 目的:构建稳定表达HBX的肝干细胞株,为进一步研究HBX蛋白对肝干细胞增殖、分化的影响奠定了基础。方法:将重组质粒pSEB-Flag-HBX转染至HEK 293细胞,包装产生逆转录病毒;病毒感染肝干细胞,稻瘟菌素(Bla...
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- 关键词：HBX肝干细胞
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒X蛋白对小鼠胚胎肝干细胞凋亡及相关蛋白表达的影响被引量：2
- 2013年
- 目的研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X蛋白(HBx)对小鼠胚胎肝干细胞(embryonic liver stemcell,ELSC)凋亡及相关蛋白Bcl2、Mcl1、Bax表达的影响。方法采用表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的腺病毒载体系统将HBx基因转入小鼠胚胎肝干细胞ELSC14.5中,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中HBx基因mRNA的转录和蛋白的表达;Hoechst33342染色法观察细胞核的改变;TUNEL法和流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Real-time PCR和Western blot法检测抗凋亡因子Bcl2、Mcl1和促凋亡因子Bax基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果重组腺病毒Ad-GFP-HBx能有效感染ELSC14.5细胞,HBx基因和蛋白均能特异性表达;感染的ELSC14.5细胞核呈现固缩,且边缘化的细胞数减少,细胞凋亡率降低;细胞中Bcl2和Mcl1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均增高,而Bax的表达降低。结论 HBx可通过调节Bcl2家族中抗凋亡因子和促凋亡因子的比例失衡,来抑制小鼠胚胎肝干细胞的凋亡,促进其存活。
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- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝癌
- 乙肝病毒X蛋白对肝前体细胞分化的影响被引量：4
- 2012年
- 目的:检测乙肝病毒X(Hepatitis B virus X,HBx)蛋白对肝前体细胞分化的影响,以探讨HBx蛋白能否促进肝干细胞的恶性转化。方法:以腺病毒Ad-HBx和Ad-GFP感染肝前体细胞株Hp14-19,RT-PCR和Western blot证实HBx蛋白在肝前体细胞内的表达。RT-qPCR和免疫荧光检测早期和晚期分化指标的变化,并于诱导后11 d用PAS染色观察细胞的分化成熟程度。结果:Ad-HBx能有效感染肝前体细胞株Hp14-19并表达。与对照组(感染Ad-GFP)相比,实验组(感染Ad-HBx)细胞分化早期指标穿膜蛋白(Delta like homolog,DLK)、肌酸激酶19(Creatine kinase19,CK19)和甲胎蛋白(Alpha fetal protein,AFP)表达降低减慢,而晚期指标CK18和白蛋白(Albumin,ALB)表达升高不明显。PAS染色阳性率降低。差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:HBx可抑制肝前体细胞的分化,这可能是最终导致肝前体细胞恶性转化的原因之一。
- 白光文申利红卢永良李红丽冯涛黄佳祎
- 关键词：乙肝病毒X蛋白肝前体细胞分化肿瘤干细胞
- HBx诱导小鼠肝前体细胞上皮-间质转化被引量：3
- 2013年
- 目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)能否诱导肝前体细胞(HPCs)发生上皮-间质转化(EMT)。方法将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,经稻瘟菌素(blasticidin)筛选,获得稳定表达HBx的HP14.5细胞。观察其形态变化,通过实时定量PCR(real time-PCR)及Western blot法检测其间质细胞标志物和上皮标志物在mRNA和蛋白水平的表达量,并采用划痕实验检测其细胞迁移能力的变化。结果 HP14.5细胞稳定表达HBx蛋白后细胞由多角形变为长梭形;与对照组相比,神经钙黏素(N-cadherin)、Snail、vimentin的mRNA和蛋白水平表达均升高,具有统计学差异(P<0.05)而上皮性钙黏素(E-cadherin)、细胞角蛋白18(CK18)的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05;同时其迁移能力显著升高(P<0.05)。结论 HBx能诱导肝前体细胞发生EMT,并增强其迁移能力。
- 芦永良申利红李红丽胡代曦张锡峰冯涛黄佳祎
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝前体细胞上皮-间质转化
- 乙肝病毒X蛋白对肝前体细胞中β-连环素表达及定位的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B Virus X,protein,HBx)对肝前体(Hepatic progenitor,HP)14-19细胞中β-连环素(β-catenin)表达及定位的影响,为研究HBV相关性肝癌的发生机制提供实验依据。方法分别用重组腺病毒Ad-GFP-HBx和Ad-GFP感染HP 14-19细胞,RT-RCR法检测HBx基因mRNA的转录;Real-time PCR法检测β-catenin基因mRNA的水平;Western blot法检测HBx、总糖原合成酶激酶3β(total-glycogen synthase kinase 3β,t-GSK3β)、磷酸化GSK3β(Phospho-GSK3β,p-GSK3β)及β-catenin蛋白的表达;免疫细胞化学法检测β-catenin的分布情况。结果重组腺病毒Ad-GFP-HBx和Ad-GFP均能高效感染HP 14-19细胞,感染效率均可达到90%;在重组腺病毒Ad-GFP-HBx感染的HP 14-19细胞中可检测到HBx基因mRNA的转录和蛋白的表达;与Ad-GFP感染组相比,Ad-GFP-HBx感染组t-GSK3β蛋白相对表达量无明显变化(P>0.05),但p-GSK3β蛋白相对表达量增加(P<0.05);β-catenin在基因和蛋白水平上表达明显增高(P<0.05),并在胞质中大量积聚,且有向胞核转位的趋势。结论 HBx可通过促进HP 14-19细胞中GSK3β磷酸化,抑制β-catenin的降解,从而导致β-catenin在胞质中大量积聚并向核内转移。HBx对肝前体细胞中经典Wnt信号通路的激活,可能是导致肝前体细胞恶性转化的分子基础。
- 申利红芦永良李红丽吴迪冯涛黄佳祎
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白Β-连环素肝前体细胞肝癌WNT信号通路
- 稳定表达HBx的肝前体细胞株的构建及其对增殖的影响被引量：4
- 2013年
- 目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,稻瘟菌素(blasticidin)筛选出稳定表达HBx基因的细胞克隆并扩大培养(HP14.5/HBx组),设HP14.5/Rv(空质粒pSEEB-Flag感染组)及空细胞组HP14.5组为对照组。MTS比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期中各时相所占的比例,荧光定量PCR检测cyclin D1和c-myc mRNA的表达量,Western blot法检测HBx、GSK3β、p-GSK3β(ser-9)、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等蛋白的表达。结果 RT-PCR和Westernblot法检测到HBx基因和蛋白阳性表达,与对照组相比,HP14.5/HBx细胞增殖活力显著增加(P<0.05);G1细胞比例明显减少(P<0.05),S期和G2细胞比例显著升高(P<0.05);cyclin D1和c-myc mRNA的表达量显著升高(P<0.05);GSK3β蛋白水平表达无明显变化(P>0.05),p-GSK3β、β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。结论成功筛选出稳定表达HBx的肝前体细胞株,HBx通过活化Wnt/β-catenin信号途径促进肝前体细胞的增殖。
- 芦永良申利红李红丽胡代曦张锡峰胡斌冯涛黄佳祎
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝前体细胞WNT
- 全反式维甲酸诱导肝前体细胞向肝细胞分化的研究
- 2012年
- 目的:探讨全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)对肝前体细胞分化的影响。方法:取孕14.5 d胎鼠制备肝前体细胞,瞬时转染带白蛋白启动子(Albumin promoter)的荧光素酶报告质粒pALB-Luc,以便实时检测细胞的分化状态。优化ATRA诱导条件,分别于诱导后3、6、9 d收集细胞总RNA,半定量RT-PCR检测分化相关指标的变化。并于诱导后11 d用苏木精-伊红染色法观察细胞形态的改变,PAS染色观察细胞的分化成熟程度。结果:ATRA浓度为1μmol/L时对肝前体细胞分化诱导作用最强。与对照组相比,随培养时间的延长,ATRA组分化早期指标膜蛋白(Delta like,DLK)、细胞角蛋白(Cytokeratin19,CK19)表达降低更为明显,而甲胎蛋白(Alpha fetal protein,AFP)、白蛋白(Albumin,ALB)表达更为升高。形态学观察细胞体积增大,呈多边形,核浆比率降低,相嵌紧密排列,可见双核细胞。PAS染色阳性率上升。结论:浓度1μmol/L的ATRA对肝前体细胞分化诱导作用最强,ATRA能诱导肝前体细胞分化为类肝细胞。
- 白光文李红丽申利红芦永良冯涛
- 关键词：肝前体细胞全反式维甲酸诱导分化
- Wnt/β-catenin信号途径抑制Raw264.7分化被引量：3
- 2013年
- 目的了解Wnt/β-catenin信号途径对小鼠单核/巨噬细胞Raw264.7的分化调控。方法将细胞分为4组:阴性对照组(即空Raw264.7组)、实验对照组(即感染Ad-GFP组)、阳性对照组(即50 ng/mL RANKL诱导组)和实验组(即感染Ad-β-catenin组)。分别给予上述4组处理因素后常规细胞培养3、6和9 d提取细胞总RNA,荧光定量real-time(RT-PCR)检测核因子受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(Cathepsin K)及金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达,再于同样处理因素培养6 d通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察Raw264.7的分化情况;Western blot检测TRAP、Cathepsin K蛋白的表达。结果 RT-PCR检测Ad-β-catenin组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K和MMP-9 mRNA的表达;TRAP染色显示50 ng/mL RANKL诱导组能成功诱导Raw264.7成多核细胞,空白组和Ad-GFP组有个别多核细胞,Ad-β-catenin组为单核细胞;Westernblot检测显示Ad-β-catenin组TRAP、Cathepsin K蛋白表达降低(P<0.05)。结论 Wnt/β-catenin信号途径能抑制RAW264.7分化成熟为破骨细胞。
- 李红丽芦永良申利红冯涛黄佳祎
- 关键词：WNTΒ-CATENINRANKLTRAP
