田文标
- 作品数：14 被引量：46H指数：5
- 供职机构：第三军医大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位重组蛋白纯化及免疫活性研究被引量：3
- 2001年
- 王缚鲲邹全明张卫军杨珺田文标郭学青郭红
- 关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白免疫活性
- 靶向性抗肿瘤融合蛋白RGD-hIL-24的构建、表达和体外活性研究被引量：5
- 2006年
- 目的构建靶向性抗肿瘤融合蛋白RGD-hIL-24,并对其体外抗肿瘤效应和肿瘤靶向性进行初步研究。方法利用PCR技术将GRGDS序列融合至hIL-24的N端,并将融合基因连接至表达载体pET-22b后,在大肠杆菌BL21(DE3)内进行表达。亲和层析法纯化RGD-hIL-24,复性后采用MTT比色法、荧光染色分析其体外抗肿瘤活性,并通过细胞黏附实验评价其肿瘤靶向性。结果获得RGD-hIL-24基因,序列分析正确。SDS-PAGE和Western blot证明融合基因在大肠杆菌表达相对分子质量(Mr)约为20×103的RGD-hIL-24,占全菌蛋白的26．47％,主要以包涵体形式存在。纯化后的蛋白纯度达90％以上。复性后的RGD-hIL-24能够诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡,显著抑制其生长,并具有肿瘤靶向性。结论大肠杆菌成功表达RGD-hIL-24融合蛋白,体外实验证实RGD-hIL-24具有显著的抗肿瘤活性和肿瘤靶向性,为其在体内抗肿瘤效应和靶向性研究奠定了基础。
- 肖斌杨珺朱永红田文标邹全明
- 关键词：RGD人IL-24抗肿瘤活性肿瘤靶向性
- 重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的纯化及生物学活性鉴定被引量：5
- 2003年
- 目的 纯化rLTB并对其生物学功能进行初步研究。方法 重组基因工程菌发酵后 ,以包涵体形式表达的rLTB经过洗涤、变性溶解后 ,分别采用QSepharoseTM HighPerformance阴离子交换层析和PhenylFF(highsub)疏水层析对其进行纯化并透析复性 ,然后采用SDS PAGE和HPLC检测纯度 ,并选用ELISA、动物实验和Western blotting实验对纯化蛋白的生物学活性进行鉴定。结果 得到纯度达 97 85 %的rLTB ,复性的rLTB经检测具有良好的生物学活性。结论 得到纯度较高、生物学活性较好的rLTB 。
- 田文标邹全明吴超张卫军杨珺冉向阳王缚鲲
- 关键词：不耐热肠毒素B亚单位纯化生物学活性
- 腺病毒介导的人白介素24和p16基因体外治疗肺腺癌细胞株A549的实验研究
- 肺癌是人类最常见和最难治愈的恶性肿瘤之一，其发生、发展和转移是一个极其复杂的多基因调控异常的过程。该病确诊时多非早期，故疗效较差。最新统计表明，肺癌死亡率上升幅度居各类肿瘤之首[1]。肺癌在临床上分为非小细胞肺癌(NSC...
- 田文标
- 关键词：非小细胞性肺癌重组腺病毒载体人白介素24P16基因
- 文献传递
- 从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位被引量：10
- 2002年
- 目的 建立一种有效的方法，从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位（rUreB）。方法重组大肠杆菌发酵后，表达的rUreB包涵体经洗涤、变性、复性，采用Q Sepharose Performance阴离子交换层析和Pheny1 Sepharose High Performance疏水层析分离纯化。使用 SDS－PAGE和HPLC检测纯度，选用 ELISA和 Western－bloning对纯化蛋白的生物学活性进行鉴定。结果 rUreB包涵体经洗涤和溶解后，rUreB的纯度＞70％。包涵体溶解液经阴离子交换层析和疏水层析后纯度超过95％。rUreB纯品具有良好的生物学活性。结论 建立了从包涵体中获得高纯度的rUreB的工艺，为进一步的研究打下了基础。
- 王缚鲲邹全明张卫军田文标朱永红杨珺毛旭虎
- 关键词：人幽门螺杆菌尿素酶包涵体层析B亚单位
- PELA疫苗微球载体的正交优化工艺研究被引量：5
- 2002年
- 目的 利用正交设计的数学方法进行实验设计 ,以牛白蛋白为包裹模型 ,寻求制备不同疫苗微球载体的最佳条件。方法 采用W /O/W法制备PELA微球 ,考察不同因素对疫苗微球平均粒径、成球率与蛋白包裹率 (三指标 )的影响。结果 五因素对疫苗微球成球性影响的主次顺序为PVA浓度 >搅拌速度 >PELA浓度 >油外 /外水相体积比 >内水相体积 ;而对粒径与蛋白包裹率的顺序则为PELA浓度 >PVA浓度 >搅拌速度 >油相 /外水相体积比 >内水相体积和PELA浓度 >PVA浓度 >搅拌速度 >内水相体积 >油相 /外水相体积比。结论 控制工艺条件 。
- 任建敏邹全明彭承琳田文标张玮
- 液质联用技术鉴定rLTB的结构
- 2004年
- 目的 利用电喷雾离子化为接口 (ESI)的高效液相色谱 /质谱联用技术 (HPLC -MS) ,鉴定重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (rLTB)氨基酸序列结构的正确性。方法 利用SDS -PAGE分离、呈现蛋白混合物 ,胰蛋白酶原位水解rLTB ,HPLC -MS联机制备肽指纹图 ,分析肽指纹图获得rLTB氨基酸全序列信息。结果 rLTB的全序列结构与理论的全序列结构完全一致。结论 改进的HPLC -MS测定条件稳定 ,提高了质谱灵敏度 ,结合肽指纹图的分析结果 。
- 杨珺田文标朱永红邹全明
- 关键词：液质联用技术DNA重组技术指纹图谱
- 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因工程菌发酵工艺的研究被引量：4
- 2005年
- 目的 研究建立大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因工程菌的发酵工艺。方法 先通过摇瓶培养初步确定工程菌的最适生长条件 ,然后以此为基础在发酵罐中比较、筛选影响菌体生长和目的蛋白表达率的各种条件 ,并进一步对发酵工艺进行改良优化。结果 经试验确定了rLTB基因工程菌发酵罐培养的各项条件的最佳组合 ,优化后工程菌菌体产量平均可达 40 5g/L ,目的蛋白的表达率平均为 3 0 6%。结论 建立了稳定、高效的工程菌发酵工艺。
- 田文标邹全明张卫军
- 关键词：发酵
- PELA幽门螺杆菌口服疫苗微球黏膜免疫研究被引量：9
- 2002年
- 目的 应用复乳挥发法制备PELA泛影葡胺显影微球与幽门螺杆菌超声上清口服疫苗微球 ,并进行靶向与黏膜免疫研究。方法 采用CT技术 ,研究显影微球的靶向 ;PELA幽门螺杆菌超声上清口服疫苗微球口服免疫小鼠后 ,运用ELISA法检测血清、唾液、肠粘液的抗体改变情况 ,ELISPOT法分析派伊尔氏结 (PP结 )抗原特异性抗体形成细胞 (ASC)的数量增减。结果 口服粒径在 10 μm以下的微球 ,首先粘附在胃肠黏膜表面 ,后投递于PP结 ;H .pylori疫苗微球免疫后可诱导较高的唾液sIgA水平和肠道sIgA反应 ,PP结抗原特异性抗体形成细胞 (ASC)数量与肠道sIgA水平密切相关。
- 任建敏邹全明王缚鲲田文标鲁东水曾纬锟
- 关键词：幽门螺杆菌口服免疫抗体分泌细胞微球
- 人IL-24基因重组腺病毒的构建及其在A549细胞中的表达
- 2005年
- 目的构建含有人IL-24基因的重组腺病毒载体,并转染肺腺癌细胞A549细胞观察其感染能力,为进一步的基因治疗奠定实验基础。方法采用基因工程技术将人IL-24基因cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,采用PAdEasy系统进行细菌内同源重组,后通过脂质体将正确重组体包裹并转染293T细胞以包装并扩增病毒。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检定;最后采用免疫组化法对IL-24在A549中的表达进行检测。结果酶切和PCR结果证实IL-24基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达1.2×1010pfu/ml,能够成功转染A549细胞并在其中进行表达。结论成功构建了有较强感染能力的含人IL-24基因的重组腺病毒载体。
- 田文标陈丽芬邹全明
- 关键词：腺病毒
