王来城
- 作品数：52 被引量：197H指数：8
- 供职机构：山东大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金高等学校骨干教师资助计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 慢性阻塞性肺疾病患者ADAM33基因单核苷酸多态性的研究被引量：2
- 2011年
- 目的检测ADAM33基因S2位点多态性在慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者中的分布频率,探讨S2位点单核苷酸多态性与COPD的相关性,寻找COPD发病的易感基因,为COPD高危人群的筛选、早期预防和临床治疗提供理论依据。方法采用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)技术及DNA测序的方法,对112例COPD患者(COPD组)及105例健康人(对照组)进行ADAM33基因S2位点单核苷酸多态性分析。结果 ADAM33基因S2位点COPD组和对照组中基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律;ADAM33基因S2位点3种基因型CC、CG、GG在COPD组的分布为54.5%、34.8%、10.7%,在对照组的分布为69.5%、26.7%、3.8%,两组比较P均<0.05。COPD组ADAM33基因S2位点等位基因C和G的频率分别为0.719、0.281;对照组ADAM33基因S2位点等位基因C和G频率分别为0.829、0.171。COPD组与对照组C及G等位基因频率比较P均<0.05。结论 ADAM33基因S2位点存在CC、CG、GG多态性;ADAM33基因S2位点多态性与COPD有明显相关性。
- 迟翔宇肖伟王建平姜洪娟王来城王静
- 关键词：肺疾病慢性阻塞性ADAM33单核苷酸
- ADAM33基因多态性与支气管哮喘易感性的研究被引量：10
- 2012年
- 目的检测ADAM33基因位点多态性在支气管哮喘（简称哮喘）患者中的分布频率，探讨ADAM33单核苷酸多态性与哮喘的相关性。方法采用等位基因特异性聚合酶链反应（Allele—SpecificPolymerasechainreaction，AS-PCR）技术及DNA测序的方法，对126例哮喘患者及121名健康人进行ADAM33基因F＋1、S2、T2和V4位点单核苷酸多态性分析。结果ADAM33基因位点病例组和对照组中基因型分布均符合Hardy-Weinburg平衡定律；哮喘组与对照组F＋1、T2和V4位点基因型比较差异无统计学意义（X^2=1．638，P=0．441〉0．05；X^2=1．050，P=0．592〉0．05；X^2=0．310，P=0．856〉0．05）。哮喘组与对照组s2位点基因型及等位基因频率差异均具有统计学意义（X^2=6．929，P〈0．05）。根据病情严重程度把哮喘患者分为轻、中、重3组，经非参数检验分析，s2位点y。值为0．335，P=0．855＞0．05，s2位点多态性与哮喘病情严重度差异无统计学意义。方差分析计算基因型构成和肺功能指标FEV1实／预、FVC实／预和FEV1／FVC的关联，s2位点的P值分别为0．255、0．143、0．404，均〉0．05，S2位点多态性与肺功能指标无显著相关性。结论ADAM33基因位点在哮喘人群中存在多态性；ADAM33基因s2位点基因多态性与哮喘明显相关，与哮喘患者病情严重程度和肺功能没有显著关联。
- 迟翔宇肖伟王学群李青王静姜洪娟王来城王建平
- 关键词：ADAM33基因多态性哮喘
- ADAM33基因F+1位点单核苷酸多态性与支气管哮喘的相关性研究被引量：3
- 2010年
- 目的检测裂解素-金属蛋白酶33基因(ADAM33)F+1位点单核甘酸多态性在支气管哮喘患者中的分布频率,并探讨其与支气管哮喘的相关性。方法采用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)技术及DNA测序的方法,对哮喘组126例患者及对照组121例健康者进行ADAM33基因F+1位点单核苷酸多态性分析。结果 ADAM33基因F+1位点哮喘组和对照组基因型分布均符合Hardy-Weinburg定律;ADAM33基因F+1位点3种基因型(CC、CT、TT)在哮喘组分布分别为68(54.0%)、48(38.1%)、10(7.9%),在对照组分布分别为70(57.9%)、46(38.0%)、5(4.1%),无显著性差异(χ2=1.638,P>0.05)。哮喘组和对照组ADAM33基因F+1位点等位基因C和T的频率分别为0.730、0.270、0.769、0.231,两组等位基因频率比较差异无显著性(χ2=0.970,P>0.05)。结论 ADAM33基因F+1位点在支气管哮喘患者中存在CC、CT、TT多态性,ADAM33基因F+1位点基因多态性与支气管哮喘无明显相关性。
- 迟翔宇李青王来城王静
- 关键词：哮喘等位基因聚合酶链反应
- 人白细胞介素26的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2006年
- 克隆人白细胞介素-26(human interleukin-26,hIL-26)基因,构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。对GenBank上报道的hIL-26基因进行序列分析后设计合成引物,利用RT-PCR技术从人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA中反转录并扩增得到人成熟肽IL-26基因。将得到的基因克隆到pMD18-T载体中,菌落PCR筛选、酶切鉴定并进行DNA序列分析。用BamHI和EcoRⅠ将目的片段切下,插入表达载体pBV220相应的位点。42℃热诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析显示表达蛋白约占菌体总蛋白的20%,Western印迹法证实重组蛋白为特异性蛋白,分子筛纯化后纯度达90%以上。表达的重组蛋白经谷胱甘肽复性缓冲液复性,用RT-PCR检测复性的重组蛋白能促进PBMC合成IFN-γ。
- 刘义庆陈子江张雪王来城焦玉莲张捷马春燕崔彬高新谱刘正敏吴侃赵跃然
- 关键词：白细胞介素
- 先天性心脏病合并肺动脉高压患者BMPR2基因新突变
- 目的探讨骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPR2)基因外显子突变与先天性心脏病合并肺动脉高压之间的关系。方法本研究收集66例无血缘关系的先天性心脏病合并肺动脉高压的患儿,均为汉族,其中男39例,女27例,其中室间隔缺损25例,房间...
- 魏美丽韩波王来城孙瑾
- 人HMGB1基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达和纯化被引量：1
- 2010年
- 目的构建人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因的原核表达载体,观察表达水平并纯化重组蛋白。方法根据GenBank中人HMGB1基因序列,用OptimumGeneTM行密码子优化并合成目的基因,经PCR扩增,NdeⅠ和XhoⅠ双酶切,插入原核表达载体pQE-T7-2的相应位点,构建原核表达质粒pQE-T7-2/HMGB1。经菌落PCR、酶谱分析及序列分析鉴定重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,采用SDS-PAGE和Westernblot印迹法鉴定重组蛋白,Ni-NTA树脂亲和纯化目的蛋白。结果成功构建人HMGB1克隆载体和表达载体;表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的20%以上,Westernblot法显示,重组蛋白能与抗HMGB1抗体和抗His抗体特异结合,亲和层析纯化后纯度达90%以上。结论成功构建高效稳定的重组人HMGB1原核表达载体,获得纯化人HMGB1蛋白,为进一步研究HMGB1的功能奠定基础。
- 崔彬王来城朱敏焦玉莲辛玮马春燕张捷赵跃然
- 关键词：高迁移率族蛋白质类大肠杆菌原核细胞纯化
- 真核表达载体pVAX1-mSLC的构建及在COS-7细胞中的表达
- 2005年
- 目的:构建小鼠次级淋巴组织趋化因子(mSLC)高效真核细胞表达载体pVAX1-mSLC。方法:用BamHⅠ和XbaⅠ双酶切重组克隆pMD-mSLC,胶回收约410bp的SLC基因片段,以亚克隆法构建于真核表达载体pVAX1的相应酶切位点。转化后进行菌落PCR分析和HinDⅢ酶切鉴定。阳性克隆提取质粒,体外电穿孔法转染COS-7细胞,用Westernblot检测转染细胞中mSLC的瞬时表达。结果:菌落PCR和HinDⅢ酶切鉴定证实,mSLC基因片段正确插入到真核表达载体pVAX1中。Westernblot检测表明,以重组质粒pVAX1-mSLC转染的COS-7细胞能表达mSLC,表达产物的相对分子量同预期的结果相一致。结论:成功地构建小鼠SLC基因的真核表达质粒pVAX1-mSLC,用它转染COS-7细胞后,能瞬时表达mSLC,为下一步mSLC的肿瘤基因治疗研究奠定了基础。
- 侯丽马金龙王来城张捷焦玉莲马春燕崔彬赵跃然
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子真核表达COS-7细胞电穿孔
- ERAP1基因与山东汉族人群强直性脊柱炎的相关性被引量：2
- 2011年
- 目的利用基于群体的病例对照关联分析方法,探讨ERAP1基因是否为北方汉族人群的易感基因。方法从山东省立医院收集了311例临床确诊的强直性脊柱炎病例及320例正常对照资料,利用Taqman探针法对ERAP1基因内的两个单核苷酸多态性位点rs7711564和rs27434分型,利用PLINK软件行Hardy-Weinberg遗传平衡检验、等位基因及基因型频率分布分析。样本统计学效能采用CaTS软件计算。结果两个位点在病例组及对照组中均达到遗传平衡,其中rs7711564位点罕见等位基因频率在病例组及对照组分别为0.430 9和0.489 1(OR=1.26,P=0.04),rs27434位点罕见等位基因频率在病例组和对照组分别为0.483 9与0.421 9(OR=0.78,P=0.03)。结论 ERAP1基因内的遗传变异与北方汉族人群强直性脊柱炎相关,进一步证实了该基因是强直性脊柱炎的易感基因。
- 夏羽王来城孙慧唐宏伟马春燕崔彬赵跃然
- 关键词：强直性脊柱炎汉族人群
- 人NKp46基因克隆及其在大肠杆菌中的表达和纯化
- 2006年
- 目的:对人NKp46进行基因克隆并探讨其在大肠杆菌中重组表达和纯化。方法:用RT-PCR法自人外周血单个核细胞总RNA扩增hNKp46片段(约900 bp),克隆至质粒载体pMD18-T,并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制酶EcoRⅠ和NcoⅠ消化pMD18-T-hNKp46重组质粒,分离hNKp46片段,并插入原核表达载体pET30a(+)的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pET30a(+)-hNKp46。转化菌株BL21(DE3)经IPTG诱导,用SDS-PAGE和Western Blotting鉴定表达的重组蛋白。采用His.BindPurification Kit对重组蛋白进行纯化。结果:RT-PCR扩增的DNA片段与hNKp46 cDNA大小一致。重组质粒pMD18-T-hNKp46的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列与文献报道的hNKp46的cDNA序列一致。SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为38.5 kD,其表达量达菌体总蛋白的40%左右。Western Blotting分析显示,重组蛋白能特异地与抗His.Tag抗体结合。纯化得到纯度为95.5%的重组蛋白,纯化回收率达40%。结论:成功构建了人NKp46表达载体,并获得了稳定表达的工程菌株,纯化了重组蛋白。
- 高新谱刘正敏王来城焦玉莲刘义庆张雪赵跃然
- 关键词：基因克隆原核表达大肠杆菌蛋白纯化
- 串联表达大鼠心肌细胞Kir2·1shRNA载体的构建及其体外效应被引量：11
- 2005年
- 目的构建串联表达5个针对大鼠kir2·1基因shRNA的真核表达载体,观察其对该基因表达的影响。方法选择5个针对大鼠kir2·1基因的RNA干扰位点,分别设计合成相应的5对寡核苷酸链,形成双链后分别连入带有U6启动子的相应载体,反复酶切连接将表达5个kir2·1shRNA的目的基因依次连接入载体pEGFP6-1,构建成串联真核表达载体pEGFP6-1Kir2·1,将其转染培养的大鼠心肌细胞,RT-PCR和Western印迹检测其对Kir2·1mRNA转录和蛋白表达的影响。结果成功构建串联表达5个大鼠Kir2·1基因shRNA的真核表达载体,该载体对大鼠心肌细胞Kir2·1mRNA转录的抑制率为83·5%,对心肌细胞Kir2·1蛋白表达的抑制率为68·1%。结论串联表达多个大鼠心肌细胞Kir2·1基因shRNA真核表达载体介导的RNA干扰可以特异性抑制该基因的表达,可能成为制造生物起搏器的一种新方法。
- 雷印胜张海洲王来城郭兰敏范全心邹承伟李红昕王安彪
- 关键词：基因疗法RNA干扰
