张颂
- 作品数：30 被引量：106H指数：6
- 供职机构：中国人民解放军更多>>
- 发文基金：南京军区医学科技创新课题南京军区医学科学技术研究“十一五”计划课题更多>>
- 相关领域：医药卫生航空宇航科学技术生物学电子电信更多>>
- 一种体外扩增γδT细胞的新方法被引量：6
- 2011年
- 目的:建立一种新的γδT细胞扩增方法。方法:从健康人外周血中分离外周血单个核细胞(PBMCs),与用唑来膦酸预处理过的未成熟DCs按10:1混合,在含IL-2 400 U/ml和10%小牛血清的RPMI1640培养基中培养,用MTT法测定细胞增殖倍数。用流式细胞仪对γδT细胞进行表型分析并检测其细胞内的颗粒酶B、穿孔素和CD107a含量。用乳酸脱氢酶释放法(LDH)检测细胞杀伤活性。结果:经唑来膦酸预处理的树突状细胞与自身外周血单个核细胞共培养,到11天时γδT细胞增殖倍数达到(120±15)倍,第8天和11天γδT细胞百分率分别达到70.26%±3.56%、90.11%±4.67%。γδT细胞细胞内颗粒酶B、穿孔素及CD107a在第8天时分别为81.66%±4.32%、86.62%±5.21%和80.12%±3.78%,均高于对照组。培养的γδT细胞对SGC-7901、SW-1990、SW-480肿瘤细胞株杀伤活性至第8天时达到峰值。结论:此法能有效诱导γδT细胞体外扩增,培养的γδT细胞颗粒酶B、穿孔素及CD107a均显著高于对照组,并有较强的抗肿瘤活性。
- 吕小婷刘军权周忠海陈玲张娟张颂黄菲陈复兴
- 关键词：树突状细胞唑来膦酸ΓΔT细胞免疫治疗
- 阿司匹林对人γδT细胞杀伤消化系统肿瘤细胞的影响被引量：7
- 2008年
- 目的:探讨阿司匹林对人γδT细胞杀伤消化道肿瘤细胞株的影响。方法:用异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的阿司匹林诱导γδT细胞和消化道肿瘤SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116、LOVO细胞株,用乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性,用流式细胞术(FCM)检测阿司匹林诱导前后的γδT细胞和SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞凋亡百分率。结果:γδT细胞培养10d时从扩增前4.21%增加到70.35%。阿司匹林0.4～0.8mmol/L诱导24h后的γδT细胞对5种肿瘤细胞的杀伤活性最高,浓度超过3.2mmol/L时杀伤活性呈下降趋势;SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞经不同浓度的阿司匹林诱导24h后除药物浓度在0.4mmol/L时γδT细胞对SW-480、SW-1116和LOVO细胞株的杀伤活性略有增强外,其他组与对照组比较无明显变化。3.2mmol/L阿司匹林对γδT细胞诱导24h的凋亡率(52.71%)明显高于SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株(分别为7.88%、8.89%、6.21%、4.47%和%3.67)。结论:阿司匹林在临床常规使用的药物浓度时可增强γδT细胞杀伤肿瘤细胞作用,超过这一浓度可明显抑制γδT细胞的增殖能力和杀伤活性及增加γδT细胞的凋亡率,而对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株作用不明显。
- 刘军权陈复兴朱斌张颂张娟陶征中李佚
- 关键词：ΓΔT细胞阿司匹林
- 自身γδT细胞治疗乙型肝炎的临床观察被引量：1
- 2013年
- 目的观察γδT细胞和HepG212115细胞共培养后对其HBV复制和HBeAg表达的影响。评估用γδT细胞过继回输治疗乙型肝炎的疗效。方法在体外用异戊希焦磷酸法和IL-2激活人外周血PBMCs,细胞经10 d培养后用流式细胞术检测培养前后γδT细胞含量和Perforin、GranB、NKG2D表达量;将γδT细胞与HepG212115细胞按一定比例共孵育培养后,ELISA法测定上清中HBeAg的表达。将培养10 d的γδT细胞回输给患者;患者一个疗程接受γδT细胞总数在0.8×1010～7.0×1010。结果培养10 d时γδT细胞数为91.27%,其细胞表达的Perforin、GranB、NKG2D分别为和62.8%、72.7%和60.8%。所扩增的γδT细胞能够部分抑制HepG212115细胞中HBeAg的表达。治疗前138例HBeAg阳性者,治疗后有76例HBeAg(55.1%)转阴。总有效率为77.51%。结论γδT细胞能够降低HepG212115细胞中HBeAg表达;用自身γδT细胞过继回输治疗乙型肝炎后患者的HBeAg+HBV-DNA转阴率达74%。该治疗无毒副作用,对乙型肝炎是一种安全有效的治疗方法。
- 刘庆德王洪旗姬会春张颂周燏朱云孙阳刘军权
- 关键词：乙型肝炎ΓΔT细胞免疫治疗
- 结直肠癌化疗联合自体多种免疫细胞治疗疗效观察被引量：3
- 2011年
- 目的比较结直肠癌患者自体多种免疫细胞联合化疗与单纯化疗后细胞免疫功能变化和生存期差异。方法83例结直肠癌患者分为化疗组43例，化疗联合自身多种免疫细胞治疗组（联合组）40例；用血细胞分离机采集患者自身外周血单个核细胞（PBMC），将PBMC按常规方法分别诱导培养CD3AK细胞、CIK细胞、树突状细胞（DC）、7gT细胞和NK细胞；用流式细胞仪检测治疗前后患者外周血的CD3（＋）、CD4（＋）、CD8（＋）、CD19（＋）、CD16（＋）CD56（＋）、CD4／CD8和3,gT细胞比值及PBMC中穿孑L素、颗粒酶B和CD107a阳性表达率。2组患者化疗方案都采用草酸铂＋亚叶酸钙＋5-氟脲嘧啶静脉输注；联合组在化疗基础上接受免疫细胞治疗。结果联合组治疗后的免疫细胞亚群比值和绝对值显著高于化疗组。联合组与化疗组Karnofsky评分差异有统计学意义。联合组患者治疗后PBMC的穿孔素、颗粒酶B及CDl07a均高于治疗前，并且治疗后这3种指标数值均皿著高于化疗组。联合组患者1午、2年和5年生存率分别为70．o％、20．0％和10．0％，高于化疗组（分别为23．2％、7．0％和4．6％）；其中Ⅱ期、Ⅲ期患者的1年、2年和5年生存率及Ⅳ期患者的1午生存率2组间比较差异有统计学意义，而Ⅳ期患者的2年、5年生存率2组间比较差异无统计学意义。结论化疗联合自身综合性免疫细胞治疗进展期结直肠癌能提高患者的免疫功能，延长生存期。
- 朱云刘军权张南征陈复兴陈玲张颂杨宛莹周忠海徐永茂
- 关键词：结直肠癌免疫功能免疫细胞
- 自身γδT细胞联合阿司匹林治疗晚期胃癌的实验研究和临床疗效观察被引量：6
- 2009年
- 目的探讨阿司匹林对人γδT细胞功能影响,评估自身γδT细胞联合阿司匹林治疗晚期胃癌的疗效。方法按常规方法培养γδT细胞,收集培养第9天的γδT细胞用不同浓度的阿司匹林诱导24h 后收集上清液用于细胞因子 IFN_(-γ)、TNF—α、IL—12检测,沉淀细胞用于穿孔素、粒酶 B 和 NKG2D 流式细胞测定。17例晚期胃癌患者入院后接受阿司匹林0.1～0.3克/日,口服,3次/日,每4周为1周期,同时采集患者外周血单个核细胞(PBMC),经6～13天培养后分6次输注给患者,回输细胞总数为(2.1～6)×10^(10)个。17例患者中接受1个疗程治疗2例,2个疗程治疗6例,3个疗程治疗6例,4个疗程治疗以上有3例。结果经阿司匹林诱导后γδT细胞穿孔素、粒酶 B、NKG2D 受体表达量明显高于对照组,尤其在阿司匹林浓度为0.8mmol/L时最显著。经0.4～0.8mmol/L 阿司匹林诱导的γδT细胞分泌 IFN_(-γ)量明显高于对照组;分泌的 TNF-α和 IL-12含量与对照组比较无明显差异;当阿司匹林浓度高至3.2mmol/L 时,可以显著抑制 TNF-α的分泌。17例患者用γδT细胞联合阿司匹林治疗后,全组病例均可评价疗效:其中 CR 2例,PR 6例,NC 8例,PD 1例;近期客观有效率47.1%(8/17),中位生存期为12个月。其中有2例患者化疗后接受手术治疗。细胞免疫治疗后大多数患者食欲增加、疼痛减轻、睡眠改善、体重增加。经γδT细胞和阿司匹林联合治疗后患者 CEA 有10例减低,3例增加。结论经阿司匹林诱导后γδT细胞的穿孔素、粒酶 B、NKG2D 受体明显高于对照组,其培养上清液中 IFN_(-γ)含量也明显高于对照组。晚期胃癌经γδT细胞联合阿司匹林治疗后能提高患者生存期,改善患者临床体征,且无毒性不良反应,对晚期胃癌是一种安全有效的治疗方法。
- 刘军权陈复兴巩新建李慧忠蔡凯张宝福张颂张娟
- 关键词：ΓΔT细胞
- 多种活化因子共刺激对人外周血单个核细胞体外增殖和表型的影响被引量：11
- 2012年
- 目的:观察多种活化因子共刺激后对人外周血淋巴细胞增殖和表型的影响。方法:用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMC),根据加入刺激因子(CD3 mAb、CD28 mAb、IFN-γ、IL-1α、IL-2、IL-15和IL-21)种类和方法不同将实验分为7组。用全自动五分类血液分析仪计数不同细胞因子诱导培养的PBMC增殖力、流式细胞术测定诱导后共刺激细胞表面CD3,CD4,CD8,CD28,CD16、CD56+CD16,CD3+CD8+,CD3+CD4+,CD3+CD56+,CD45RO等分子的变化、乳酸脱氢酶释放法测定诱导后的共刺激细胞对SGC-7901、SW-1990和SW-116细胞株的杀伤活性。结果:在PB-MC培养体系中加入不同的刺激因子其细胞增殖能力有明显的差异,以含刺激因子CD3、CD28、IFN-γ、IL-2、IL-1α、IL-15和IL-21组增殖倍数最高,在培养第10 d时该组的增殖倍数为255.3 6.3,明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系组(166.6 5.5)(P<0.05)。在PBMC培养体系中加入不同的刺激因子其部分细胞表面标志有所差异,在培养体系中无IL-15时CD16+CD56+(NK细胞)细胞和CD3+CD56+细胞比例明显高于其他组;CD45RO+的记忆性T细胞以延迟3 d添加IL-15和IL-21组升高最明显。经不同活化因子刺激培养10 d的PBMC对SGC-7901、SW-1990和SW-1116细胞杀伤活性有明显差异,以延迟3 d添加IL-15和IL-21组最高(分别为76.2%、60.3%和70.6%),明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系的细胞组(分别为54.9%、44.6%和50.4%)(P<0.05)。培养的细胞对胃腺癌细胞SGC-7901杀伤活性最强。结论:不同刺激因子活化的PBMC其增殖能力、表面标记和杀伤活性有明显差异,在培养体系中增加相应的刺激因子对细胞定向培养有一定价值。
- 刘军权朱云陈复兴张南征吕小婷周忠海张娟张颂陶征中李昳
- 关键词：共刺激单个核细胞增殖杀伤活性
- 吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞的机理研究
- 刘军权陈复兴巩新建陶征中李慧忠蔡凯张宝福张颂张娟
- 尼美舒利提高γδT细胞杀伤胃癌细胞的机制探讨被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨尼美舒利对人γδT细胞功能影响。方法:按常规方法培养γδT细胞,收集培养第9天的γδT细胞用不同浓度的尼美舒利(分别为0.25、0.5、1、2、4μmol/L)诱导24 h后收集培养上清液检测细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-12,沉淀细胞流式细胞测定穿孔素、粒酶B和NKG2D,LDH法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞活性。结果:经尼美舒利诱导后γδT细胞穿孔素、粒酶B表达量(分别为62.8%和72.7%)明显高于对照组(分别为51.4%和60.9%)P<0.05,尤其尼美舒利浓度在1μmol/L时最显著;经尼美舒利诱导后γδT细胞分泌IFN-γ和TNF-α浓度(分别为262.3 ng/L和177.5 ng/L)明显高于对照组(分别为196.1 ng/L和158.5 ng/L)P<0.05;分泌的IL-12浓度与对照组比较无明显差异(P>0.05)。γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901和BCG-823的活性在1μmol/L时最高(分别为73%和70%),明显高于对照组(分别为54%和53%)P<0.05。结论:经尼美舒利诱导后γδT细胞的穿孔素、粒酶B含量和γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901、BCG-823活性明显高于对照组。其培养上清液中IFN-γ和TNF-α浓度也明显高于对照组。这一结果为临床尼美舒利预防和治疗消化道肿瘤提供了实验依据。
- 刘军权陈复兴巩新建李慧忠蔡凯张宝福张颂张娟
- 关键词：尼美舒利
- 基于多模式匹配和关联约束的协议识别方法与系统
- 本发明提出一种基于多模式匹配和关联约束的协议识别方法与系统，属于协议识别技术领域。包括：从一个标准协议中提取出多个标准协议特征序列，并将所述多个标准协议特征序列存储至标准协议库；提取所述多个标准协议特征序列之间的关联关系...
- 李鹏飞王军张祥虎陶业荣晋伊灿李文璋唐川张颂郭晋卢杰
- 阿司匹林对人γδT细胞和消化系统肿瘤细胞的作用比较
- 2009年
- 目的:比较阿司匹林对人γδT细胞和5株消化系统肿瘤细胞株的作用。方法:用不同浓度的阿司匹林诱导γδT细胞和消化系统肿瘤SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116、LOVO细胞株,用MTT法检测阿司匹林对这些细胞的抑制率和用乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性,用流式细胞术检测诱导前后的γδT细胞和SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞凋亡率。结果:培养前γδT细胞数为5.12%,CD44表达5.13%;培养10d时γδT细胞数为91.27%,CD44为94.00%。阿司匹林在3.2mmol·L-1时对γδT细胞的生长抑制率达41.3%,明显高于对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株抑制率(分别为19.6%,11.8%,9.2%,6.4%和1.6%)。0.4～1.6mmol·L-1阿司匹林诱导24h后的γδT细胞对5种肿瘤细胞的杀伤活性最高,浓度超过3.2mmol·L-1时杀伤活性呈下降趋势;SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞经不同浓度的阿司匹林诱导24h后γδT细胞对其杀伤活性除SW-1116和LOVO细胞株略有增强外,其他组与对照组比较无明显变化。3.2mmol·L-1阿司匹林对γδT细胞诱导24h的凋亡率(52.7%)显著高于SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株(分别为7.9%,8.9%,6.2%,4.5%和3.7%)。结论:阿司匹林在临床常规使用的药物浓度时对5种肿瘤细胞株和γδT细胞无抑制作用,但能增强γδT细胞杀伤5种肿瘤细胞株活性,超过这一浓度可明显抑制γδT细胞的增殖能力和杀伤活性及增加γδT细胞的凋亡率,而对5种肿瘤细胞株作用不明显。这一结果为临床阿司匹林预防消化道肿瘤的用量提供了一定的参考价值。
- 刘军权陈复兴朱斌张颂张娟孙蕾清陈桂林冯霞
- 关键词：ΓΔT细胞阿司匹林SW-480
