夏纪毅
- 作品数：27 被引量：67H指数：4
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- shRNA抑制C-erbB-2基因表达对小鼠Lewis细胞凋亡的影响
- 2014年
- 目的:探讨shRNA抑制C-erbB-2基因表达对小鼠肺腺癌Lewis细胞凋亡的影响。方法:构建4个pGPU6/RFP/Neo-erbB-2质粒和pGPU6/RFP/Neo-shNC。应用Lipofectamine 2000转染pGPU6/RFP/Neo-shNC至小鼠肺腺癌Lewis细胞,应用荧光显微镜观察荧光,确定最佳转染效率。应用RT-PCR检测C-erbB-2 mRNA的水平,应用Western blotting检测该蛋白的表达,筛选干扰效果最好的质粒。应用流式细胞术检测空白组、pGPU6/RFP/Neo-shNC组和最佳干扰组细胞的凋亡率。结果:pGPU6/RFP/Neo-shNC(μg):Lipofectamine(μl)为0.4:1时,转染效果最好。4个pGPU6/RFP/Neo-erbB-2质粒均能降低C-erbB-2 mRNA水平和蛋白的表达,其中干扰效果最好的是pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669,用于后续实验。pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669质粒组的凋亡率高于空白组和pGPU6/RFP/Neo-shNC组(P<0.05)。结论:pGPU6/RFP/NeoerbB-2-mus-3669质粒能抑制小鼠Lewis细胞C-erbB-2基因的表达,诱导细胞凋亡。
- 曹新梅张岱权夏纪毅王栩
- 关键词：C-ERBB-2SHRNA凋亡
- SET7/9在2型糖尿病大血管病变中的作用被引量：2
- 2013年
- 目的探讨SET7/9在2型糖尿病大血管病变中的作用。方法随机选取10例2型糖尿病无大血管病变患者(DM组)和10例2型糖尿病并大血管病变患者(DV组),以10名健康志愿者作对照(NC组),分别检测各组外周血中组蛋白甲基化酶SET7/9和炎症因子kappa B(NF-κB)的表达,并比较各组结果。结果与NC组相比,DM组和DV组的SET7/9和NF-κB表达均增高(P<0.05);且DV组较DM增高(P<0.05)。结论糖尿病患者体内存在SET7/9表达失调,这种表达失调进而激活NF-κB可能是2型糖尿病大血管并发症发生、发展的重要表观遗传机制。
- 陈果高陈林徐勇阳诚唐小平夏纪毅
- 关键词：大血管病变表观遗传学
- 黄芩素对宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用及机制探讨被引量：9
- 2014年
- 目的观察黄芩素对宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能机制。方法体外培养的宫颈癌Hela细胞分为3组,A组加入100μmol/L黄芩素,B组加入200μmol/L黄芩素,C组加入不含黄芩素的无血清DMEM高糖培养基,处理24 h。相差显微镜观察细胞形态及数量,流式细胞技术检测细胞周期,明胶酶谱法检测细胞培养基中基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9活性,RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9、大鼠肉瘤蛋白(Ras)、细胞周期素D1(CyclinD1)、整合素β1(Integrinβ1)mRNA,Western blotting法检测MMP-2、MMP-9、Ras、CyclinD1、Integrinβ1蛋白。结果与C组相比较,A、B组细胞数量减少,细胞形态从不规则类圆形转变为多角梭形。A、B、C组S期细胞百分比分别为24.58%、19.41%、34.05%,G1期细胞百分比分别为72.67%、79.17%、64.88%,A、B组与C组比较,P均<0.05。A、B、C组培养基中MMP-2活性分别为32.651±0.571、28.987±1.033、36.127±1.184,MMP-9活性分别为33.217±0.660、29.277±0.868、39.613±0.318,A、B组与C组比较,P均<0.05。A组MMP-2、MMP-9、Ras、CyclinD1、Integrinβ1 mRNA表达水平分别为1.012±0.045、1.009±0.030、0.988±0.036、1.013±0.034、0.983±0.036,B组分别为0.849±0.026、0.914±0.027、0.626±0.029、0.806±0.037、0.799±0.037,C组分别为1.199±0.029、1.087±0.024、1.413±0.026、1.203±0.029、1.224±0.025,A、B组与C组比较,P均<0.05。A组MMP-2、MMP-9、Ras、CyclinD1、Integrinβ1蛋白表达水平分别为0.693±0.025、0.886±0.032、1.127±0.028、1.061±0.028、1.159±0.031,B组分别为0.326±0.022、0.754±0.024、0.782±0.183、0.321±0.027、0.481±0.028,C组分别为1.914±0031、1.487±0.016、1.323±0.303、1.816±0.025、1.467±0.036,A、B组与C组比较,P均<0.05。结论黄芩素可抑制宫颈癌Hela细胞增殖,其机制可能为将细胞阻滞于G1期,降低细胞培养基中MMP-2、MMP-9活性,下调细胞MMP-2、MMP-9、Ras、CyclinD1、Integrinβ1 mRNA及蛋白表达。
- 卢科莲喻小兰夏纪毅毛熙光
- 关键词：黄芩素宫颈癌HELA细胞细胞周期素D1整合素Β1
- 黄芩素抑制宫颈癌HeLa细胞迁移作用机制的研究被引量：1
- 2014年
- 目的:观察不同浓度黄芩素干预宫颈癌HeLa细胞后,细胞迁移、细胞培养基中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase,MMP9)活性的变化,以及MMP2、MMP9 mRNA和蛋白表达水平的变化。方法:体外培养宫颈癌HeLa细胞,分空白对照(Control)组、50、100、200、300μmol/L干预组,培养12、24、48 h。镜下观察细胞形态及数量的变化;流式细胞技术法检测细胞周期的变化;细胞迁移实验观察细胞迁移的改变;明胶酶谱法检测细胞培养基中的MMP2、MMP9活性变化;RT-PCR检测MMP2、MMP9 mRNA表达水平的变化;Western Bloting检测MMP2、MMP9蛋白表达水平的变化。结果:黄芩素干预24 h后,与空白对照组相比较,各黄芩素干预组的细胞G1期均受阻滞,阻滞程度与黄芩素干预浓度成正向变化;黄芩素能有效抑制HeLa细胞的迁移,迁移距离与黄芩素干预浓度成反向变化;细胞培养基中MMP2及MMP9的活性受抑制,抑制程度与黄芩素干预浓度成正向变化;MMP2及MMP9 mRNA及蛋白表达随黄芩素干预浓度增加,呈逐渐降低的趋势(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩素可有效抑制宫颈癌HeLa细胞的迁移,阻滞细胞周期中G1期、降低MMP2、MMP9活性,下调MMP2和MMP9的表达,发挥抑制宫颈癌HeLa细胞增殖的作用。
- 卢科莲喻小兰夏纪毅毛熙光
- 关键词：黄芩素宫颈癌HELA细胞MMP2MMP9
- C-erbB-2 shRNA对小鼠肺腺癌细胞化疗敏感性的影响及其机制被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨人表皮生长因子受体2短发夹RNA(C-erbB-2shRNA)对小鼠肺腺癌Lewis细胞化疗敏感性的影响及其机制,为非小细胞肺癌尤其是腺癌的治疗提供新的思路。方法:常规培养小鼠肺腺癌Lewis细胞,分为未转染组、pGPU6/RFP/Neo-shNC组和pGPU6/RFP/Neo-erbB-2组;应用Lipofectamine 2000将质粒快速转染各组Lewis细胞;应用RT-PCR法检测各组细胞C-erbB-2mRNA表达水平;应用Western blottting法检测各组细胞C-erbB-2蛋白表达水平。将Lewis细胞分为未转染对照组、pGPU6/RFP/Neo-shNC组、卡铂组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2+卡铂组和pGPU6/RFP/Neo-shNC+卡铂组;应用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;应用Western blotting法检测各组细胞Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果:pGPU6/RFP/Neo-erbB-2组C-erbB-2mRNA和蛋白表达水平均低于未转染组和pGPU6/RFP/Neo-shNC组;pGPU6/RFP/Neo-erbB-2+卡铂组细胞凋亡率高于其他各组(P<0.01);与其他各组比较,pGPU6/RFP/Neo-erbB-2+卡铂组Bcl-2蛋白表达水平下降、Bax蛋白表达水平增加。结论:C-erbB-2shRNA能增强小鼠肺腺癌Lewis细胞对卡铂的敏感性,其机制可能是通过上调Bax蛋白、下调Bcl-2蛋白表达,进而增强卡铂诱导的细胞凋亡。
- 曹新梅张岱权王栩夏纪毅黄黎高燕
- 关键词：人表皮生长因子受体2短发夹RNA肺腺癌细胞
- 丙型肝炎病毒非结构蛋白4B对肝癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨丙型肝炎病毒非结构蛋白4B(HCV-NS4B)对肝癌细胞增殖及增殖细胞核抗原(PCNA)和周期素D1(cyclinD1)蛋白表达的影响。方法采用构建好的HCV-NS4B表达载体,以脂质体转染法转染HepG2细胞。RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳证实HCV-NS4B在HepG2细胞稳定表达。MTT法绘制生长曲线,观察NS4B对肝细胞生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期的情况;免疫细胞化学法检测PCNA和cyclinD1的表达。结果转染后,生长曲线显示NS4B可促进肝细胞生长;细胞周期检测显示转染NS4B的HepG2细胞进入S期和G2/M期增多(P<0.05),处于G0/G1期细胞降低(P<0.05)。PCNA和cyclinD1的表达均较空白载体组升高(P<0.05)。结论HCV-NS4B可干扰肝癌细胞周期,促进肝癌细胞增殖,其作用与上调PCNA、cyclinD1表达有关。
- 杨春陈文钟晓琳王忠琼陈枫夏纪毅
- 关键词：肝肿瘤增殖细胞核抗原
- 黄芩素和U0126体外抗人乳腺癌的作用及机制研究被引量：4
- 2017年
- 目的:探讨黄芩素和U0126体外对乳腺癌的作用及其机制。方法:用黄芩素、U0126单独处理以及二者联合处理人乳腺癌细胞株MCF-7细胞,采用CCK8检测细胞增殖变化;流式细胞术检测MCF-7细胞周期以及凋亡变化;显微镜观察细胞数量变化;TUNEL法检测细胞凋亡改变;划痕实验分析细胞迁移情况;Western blot实验检测细胞凋亡相关因子的蛋白水平变化,分析黄芩素与U0126对乳腺癌细胞的增殖、凋亡和迁移的影响。结果:黄芩素或U0126可抑制细胞的增殖且具有浓度依赖性(P<0.05);黄芩素阻滞MCF-7细胞周期进入S期,增加G0~G1期细胞比例(P<0.05),降低S期细胞比例(P<0.05),诱导细胞凋亡(P<0.05);降低ERK1/2和JNK蛋白的磷酸化水平和CyclinD 1的蛋白水平表达;黄芩素与U0126联合处理MCF-7细胞,与黄芩素单独处理组相比较,S期细胞比例明显降低(P<0.05),细胞凋亡更加明显(P<0.05),ERK1/2和JNK的磷酸化水平(P<0.05)、CyclinD 1的蛋白表达量降低更加明显(P<0.05);同时黄芩素可有效抑制人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的迁移(P<0.05)。结论:黄芩素和U0126通过降低ERK1/2、JNK的磷酸化水平表达,降低CyclinD 1的水平表达,有效抑制MCF-7细胞增殖和迁移,诱导MCF-7细胞凋亡并且二者具有协同作用。因此,黄芩素和U0126联合有望用于临床治疗乳腺癌。
- 安宏元向川南喻小兰唐小平张宇骄夏纪毅
- 关键词：黄芩素U0126凋亡迁移
- Ras、CyclinD1在宫颈癌中的表达及黄芩素对其表达的影响被引量：4
- 2014年
- 目的观察通过使用不同浓度黄芩素干预宫颈癌细胞后,Ras及CyclinD1 mRNA及蛋白水平表达变化。方法体外培养Hela细胞株,分为空白对照(control)组、100μmol/L干预组、200μmol/L干预组。培养24 h后,相差显微镜下观察细胞形态及数量的变化;流式细胞技术检测细胞周期的变化;RT-PCR法检测Ras及CyclinD1 mRNA水平的表达变化。Western Blot法检测Ras及CyclcinD1蛋白水平的表达变化。结果黄芩素干预24 h后,与空白对照(control)组相比较,各黄芩素干预组细胞周期G1期受到阻滞,阻滞程度随黄芩素浓度增加而增强(P<0.05);Ras及CyclinD1的mRNA及蛋白表达与黄芩素干预浓度浓度相关,呈逐渐降低的趋势(P<0.05)。结论黄芩素可通过抑制Ras信号通路,阻滞细胞周期G1期,影响细胞周期D1(CyclinD1)的表达,致宫颈癌Hela细胞凋亡。
- 喻小兰卢科莲夏纪毅毛熙光
- 关键词：黄芩素HELA细胞RASCYCLIND1
- 血管紧张素-(1-7)对醛固酮激活大鼠肾间质成纤维细胞的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对醛固酮(ALD)激活大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)及细胞外基质分泌的影响并初步探讨其机制。方法:体外培养大鼠肾间质成纤维细胞,分为对照组、Ang-(1-7)组、ALD组、ALD+Ang-(1-7)组。培养48 h后,运用免疫细胞化学染色法检测细胞激活标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中Ⅰ型胶原(ColⅠ)的含量;按上述实验分组干预30 min后,运用Western blot法检测细胞裂解液中磷酸化ERK1/2(pERK1/2)及总ERK1/2(tERK1/2)的表达。结果:与对照组比较,ALD组及ALD+Ang-(1-7)组细胞α-SMA、ColⅠ及ERK1/2相对表达量则显著增加(P<0.05);与ALD组比较,ALD+Ang-(1-7)组细胞α-SMA、ColI及ERK1/2相对表达量明显减少(P<0.05)。结论:Ang-(1-7)可抑制ALD介导的肾间质成纤维细胞激活,减少细胞外基质成份ColⅠ的分泌,ERK1/2信号通路在这一过程中具有一定作用。
- 谭剑夏纪毅贺红焰陈枫樊均明欧三桃刘建
- 关键词：醛固酮肾间质成纤维细胞细胞外信号调节激酶
- 糖尿病大鼠阴茎海绵体CBS和CSE表达及其意义被引量：3
- 2014年
- 目的:内源性硫化氢(H2S)是新发现的气体信号分子,对于平滑肌细胞的舒张具有重要的调节功能。本文探讨糖尿病(DM)大鼠阴茎海绵体组织H2S信号通路及其与DM勃起功能障碍(ED)的关系。方法:8周龄健康雄性SD大鼠20只,随机分成4组:正常对照4周组(A)、DM 4周组(B)、正常对照6周组(C)、DM 6周组(D)。采用腹腔注射链脲佐菌素(50 mg/kg)制作DM模型,对照组给予等量生理盐水腹腔注射。测定各组大鼠阴茎海绵体内压/平均颈动脉压(ICPmax/MAP),取阴茎标本测定组织内H2S浓度、免疫组化和Western印迹检测阴茎海绵体组织内胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)蛋白含量。结果:电压5V和7 V刺激盆神经节测定ICPmax/MAP比值,B组(0.19±0.03,0.29±0.04)较A组(0.46±0.07,0.68±0.09),D组(0.14±0.04,0.25±0.04)较C组(0.43±0.07,0.65±0.16)均显著降低(P<0.05)。各组大鼠血清睾酮水平比较,B组[(359.08±60.06)ng/dl]与A组[(469.19±126.46)ng/dl]比较无显著差异性(P>0.05),D组血清睾酮水平[(297.01±96.58)ng/dl]与C组[(470.44±209.28)ng/dl]比较无显著差异性(P>0.05)。血浆及阴茎组织内H2S浓度,B组较A组、D组较C组均显著降低(P均<0.05)。阴茎海绵体组织内CBS和CSE蛋白表达量,B组较A组、D组较C组均显著降低(P<0.05),D组较B组亦显著降低(P<0.05)。结论:DM大鼠阴茎海绵体内H2S浓度降低、CBS和CSE表达下降,提示H2S信号系统可能与DM的ED病理机制相关。
- 黄一鸣夏纪毅姜睿
- 关键词：糖尿病勃起功能障碍胱硫醚-Β-合成酶胱硫醚-Γ-裂解酶
