刘伯英
- 作品数：18 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家新药研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 丁酰苷菌素生物合成酶基因的分子克隆Ⅰ.重组质粒No.2和No.11的构建及其性质
- 1989年
- 环状芽孢杆菌B.circulans NRRL-B 3312是丁酰苷菌素的产生菌。用鸟枪法克隆其抗生素生物合成关键酶——α-羟基-γ-氨丁酰酰化酶基因。用EcoR Ⅰ分别酶切其染色体DNA和pUB110质粒,经T4-DNA连接酶连接,转化至枯草芽孢杆菌B.subtilis 168的感受态细胞,以卡那霉素抗性标记挑选转化子。其中,No.2和No.11重组质粒对卡那霉素和新霉素的抗性较pUB110有所提高.构建了这两种重组质粒的限制性内切酶图谱。分子杂交实验确证,两个重组质粒DNA中均有B.circulans NRRL-B 3312的同源DNA序列。
- 李元石莲英刘伯英王硕昌
- 关键词：质粒
- 生米卡链霉菌丙酰化酶基因定位及其核苷酸序列测定被引量：1
- 1993年
- 我们已往的工作已经确定在重组质粒pIJM9中,生米卡链霉菌来源的4.16kb插入DNA片段带有丙酰化酶基因,为了进一步确定该基因在4.16kb插入片段中的位置,我们以BamHI对pIJM9进行酶切,在此基础上进行缺失重组亚克隆,在所获得的转化子中,No.5转化子含重组质粒pIJM95,分子量为5.0kb,插入DNA片段为0.53kb。以No.5转化子对螺旋霉素进行生物转化实验,其转化产物经薄层层析,生物显迹,高压液相色谱及质谱(FAB)分析表明,与标准丙酰螺旋霉素一致,这说明No.5转化子具有将螺旋霉素生物转化为丙酰螺旋霉素的能力,丙酰化酶基因位于重组质粒pIJM95 0.53kb插入DNA片段上。 DNA序列测定结果表明,该片段G+C含量为68.2%,70多种限制性内切酶具有酶切位点。从No.54至No.393核苷酸有一开放阅读框架,编码一个122个氨基酸的多肽,起始密码子为ATG,终止密码子为TGA。
- 崔丽微李元刘伯英
- 关键词：DNA
- 人肿瘤坏死因子基因在变铅青链霉菌中的克隆与表达
- 1993年
- 以质粒pIJ486为载体,将来源于质粒pHT1的肿瘤坏死因子(TNF-α)cDNA克隆至变铅青链霉菌(Streptomyces lividans TK54),以新毒素(30μg/ml)为选择标记,获得了数百转化子,实验表明No.7转化子S.lividans TK54-HT所含重组质粒pIJT7已克隆有TNFcDNA。L929细胞毒实验结果表明该转化子TNF表达量可达10^(?)活性单位/升以上,中和实验确证其表达产物为人TNF-α。 SDS—PAGE表明克隆菌株裂解上清液于17000遭尔顿处有明显蛋白带,与TNF-α分子量相当,这表明TNF基因在变铅青链霉菌中获得了成功的克隆与表达。
- 刘菊萍李元刘伯英
- 关键词：变铅青链霉菌肿瘤坏死因子基因
- 克隆有鲑鱼降钙素基因的变铅青链霉菌的构建方法
- 本发明涉及克隆有鲑鱼降钙素(SCT)基因的变铅青链霉菌的构建方法。本发明采用基因工程技术，以质粒P<Sup>IJ680</Sup>为载体。其中包括采用PCR(多聚酶反应)扩增技术，分别扩增获得鲑鱼降钙素(SCT)基因和分...
- 李元洪斌李嗣英陈松森刘伯英郭强王醒郭连宏高萍
- 文献传递
- 一种酰胺化重组多肽及其制备方法
- 本发明涉及一种包含至少一种编码α－酰胺化酶的核酸序列以及待酰胺化的目标多肽的核酸序列之核酸构建体,本发明进一步涉及含有所述核酸构建体的表达载体、原核宿主细胞。本发明还涉及通过利用所述核酸构建体在原核宿主中表达,制备酰胺化...
- 李元洪斌武兵元刘伯英郭连宏王醒姜蓉李宝义吴剑波
- 文献传递
- 微生物多糖,其制备方法和含有它的药物组合物
- 本发明涉及分离的微生物多糖或其盐或具有IL－1受体拮抗活性的水解产物,其特征在于所述微生物多糖的重均分子量Mw=1×10<Sup>5</Sup>－12×10<Sup>5</Sup>;其含有鼠李糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、...
- 吴剑波李元张治平吴倩刘伯英郭连宏张洋姜蓉李宝义
- 文献传递
- 具有IL－1受体拮抗活性的微生物多糖或其盐或水解产物，其制备方法和含有它的药物组合物
- 本发明涉及分离的微生物多糖或其盐或具有IL-1受体拮抗活性的水解产物，其特征在于所述微生物多糖的重均分子量Mw＝1×10<Sup>5</Sup>-12×10<Sup>5</Sup>；其含有鼠李糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、...
- 吴剑波李元张治平吴倩刘伯英郭连宏张洋姜蓉李宝义
- 文献传递
- 克隆有丙酰化酶基因的螺旋霉素链霉菌的构建方法
- 本发明涉及微生物领域，特别是克隆有丙酰化酶基因的螺旋霉素链霉菌的构建方法。本发明采用基因工程方法，其中包括采用质粒PIJ702为载体对生米卡链霉菌总DNA进行鸟枪克隆，转化至变铅青链霉菌TK54，挑选转化子和提取重组质粒...
- 李元李焕娄石莲英刘伯英李晓平
- 文献传递
- 克隆有人肿瘤坏死因子－α(TNF)基因的变铅青链霉菌的构建方法
- 本发明涉及克隆有人肿瘤坏死因子-α基因的变铅青链霉菌的构建方法。本发方法采用基因工程技术，以质粒P<Sup>IJ486</Sup>为载体，其中包括通过T4-DNA连接酶将分别用EcoRI-HindⅢ双酶切得到的质粒P<S...
- 李元刘菊萍李焕娄石莲英刘伯英
- 文献传递
- 白细胞介素1受体新型拮抗剂研究被引量：3
- 2002年
- 采用基因重组白细胞介素1可溶性受体(sIL-1R_1)为靶位,构建了新型ELISA高通量筛选模型,从微生物产物中筛选白细胞介素1受体拮抗剂,目前已从放线菌139中分离出一种新型白细胞介素1受体拮抗剂139A,研究表明是一种多糖,对其化学性质进行了深入研究,动物实验显示它对类风湿性关节炎有显著预防和治疗作用,有可能发展成为一种有应用前景的新药。
- 李元张治平吴倩刘伯英郭连宏张洋吴剑波
- 关键词：白细胞介素1受体拮抗剂基因克隆基因表达
