黄同列
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 供职机构：第四军医大学药学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 十五肽BPC-157通过p38 MAPK信号通路途径调节人脐静脉内皮细胞的功能被引量：1
- 2013年
- 目的:初步探究十五肽BPC-157调节人脐静脉内皮细胞(HUVEC)功能的信号通路作用机制。方法:首先利用生物芯片筛选BPC-157参与激活的细胞信号转导通路途径,进而通过real-time PCR证实BPC-157对候选信号通路中相关基因的mRNA表达水平的影响,最后采用Western印迹观察BPC-157对候选信号通路中相关蛋白的磷酸化水平影响。结果:10μg/mL BPC-157作用于HUVEC 24 h后,信号转导通路发现者芯片结果显示,与18条信号转导通路相关的96个关键基因中分别有4个基因的mRNA表达水平上调和下调,其中与MAPK信号通路相关的3个关键基因c-Fos、c-Jun和Egr-1的mRNA表达水平显著性上调;低剂量BPC-157(1μg/mL)作用于HUVEC 12 h后,能够促进早期即刻基因c-Fos、c-Jun和Egr-1的mRNA表达水平;10μg/mL BPC-157作用于HUVEC 30 min后,可明显促进ERK1/2、p38蛋白磷酸化。结论:BPC-157可能通过活化MAPK信号转导通路途径后,激活下游早期即刻基因转录,启动靶基因的表达,从而发挥促进HUVEC增殖、迁移等功能。
- 王丽丽黄同列李维娜刘楠楠张伟张伟
- 关键词：人脐静脉内皮细胞基因芯片信号通路
- miR-10b对滑膜成纤维细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及分子机制被引量：4
- 2018年
- 目的:探讨miR-10b对类风湿性关节滑膜成纤维细胞(RA-FLS)炎性因子分泌、增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法:首先,分离原代培养FLS细胞并进行microarray,筛选RA和OA中差异表达的miRNA分子。然后,用real-time PCR对筛选得到的结果进行验证,进而通过生物信息学分析、细胞转染等方法明确miR-10b在FLS细胞中下调的分子机制。最后,采用MTT比色法、划痕实验和Transwell实验等检测miR-10b对其FLS细胞增殖、侵袭和迁移水平的影响。结果:与OA FLS相比,芯片筛选发现176条miRNA在RA-FLS中上调,204条下调;其中,miR-10b在RA-FLS细胞中受肿瘤坏死因子(TNF-α)等多种炎性因子以NF-κB依赖的方式进行调控;miR-10b的下游靶基因为TAK1和TLR4,通过对这两个靶基因的调控,miR-10b一方面可以促进TNF-α的分泌和NF-κB的活化入核,从而激发TNF-α→NF-κB→miR-10b→TNF-α/NF-κB环路;另一方面促进FLS表面TLR4的表达以及LPS对于FLS的刺激作用,激发LPS→NF-κB→miR-10b→TLR4环路。此外,miR-10b的下调可促进FLS细胞的增殖、侵袭和迁移。结论:miR-10b在RA-FLS细胞中显著下调,其通过参与信号环路的调节可影响FLS细胞的炎性细胞因子分泌及其增殖、侵袭和迁移。
- 褚楚穆楠顾锦涛黄同列舒震赵金康郑朝晖张伟薛晓畅
- 关键词：类风湿性关节炎MICRORNAMIR-10B成纤维样滑膜细胞
- 重组质粒pFLAG-CMV2-FcDDR2的构建及应用
- 2015年
- 目的构建人盘状结构域受体2(DDR2)与IgG Fc段嵌合受体的重组质粒(pFLAG-CMV2-Fc DDR2),检测其自主磷酸化水平。方法设计Fc DDR2克隆引物,以质粒pSec Tag2B-Fc DDR2为模板,PCR扩增IgG Fc段与DDR2跨膜区和胞内区的c DNA序列(Fc DDR2),将其插入pFLAG-CMV2真核表达载体中。PCR扩增鉴定并测序验证重组质粒pFLAG-CMV2-Fc DDR2后,将其转染人胚肾HEK293T细胞,Western blot法验证HEK293T细胞中目标蛋白Fc DDR2的表达效率。将pcDNA3.1-DDR2转染HEK293T细胞,给予2型胶原蛋白刺激后作为阳性对照,用小鼠来源抗DDR2抗体免疫沉淀`pFLAG-CMV2-Fc DDR2阳性的HEK293T细胞及胶原刺激的pcDNA3.1-DDR2阳性的HEK293T细胞,4G10抗体分析DDR2的磷酸化水平,评价Fc DDR2的自主磷酸化能力。结果重组质粒pFLAG-CMV2-Fc DDR2的PCR扩增产物为大小约2800 bp左右的片段,与预期相符,测序验证正确。Western blot结果提示pFLAG-CMV2-Fc DDR2转染后的HEK293T细胞,FLAG-Fc DDR2表达水平显著上调。免疫沉淀结合Western blot分析提示FcDDR2的磷酸化水平与胶原刺激后的DDR2水平相当。结论成功构建了pFLAG-CMV2-FcDDR2真核表达载体,Fc DDR2的自主磷酸化与胶原蛋白刺激后DDR2的活化水平相当,可以用作DDR2经胶原蛋白刺激后的活化替代形式。
- 赵薇张昭黄同列穆楠田菲张伟
- 关键词：重组质粒磷酸化
- 重组猪生长抑素的基因克隆、表达与纯化
- 2009年
- 目的:在大肠杆菌中克隆表达猪重组生长抑素基因,并进行纯化和鉴定.方法:根据GenBank公布的猪生长抑素基因序列,按照大肠杆菌偏爱密码子设计并合成2条DNA单链,退火后获得猪生长抑素基因序列.克隆至原核表达载体pGEX-4T-1质粒中,转化感受态细胞DH5α,经IPTG诱导表达重组融合蛋白并用GST亲和柱对其进行纯化.结果:重组质粒经酶切鉴定和DNA序列测定证明基因完全正确,经IPTG诱导后在大肠杆菌DH5α中得到高水平表达,表达产物经超声和溶菌酶破碎和Glutathione Sepharose4B亲和层析纯化获得重组蛋白.结论:猪生长抑素基因得到了高水平表达,纯化后纯度达到95%以上,为表达产物的大量制备、重组疫苗的进一步优化及在畜牧业生产上的应用研究奠定了基础.
- 王志黄同列薛晓畅张英起
- 关键词：生长抑素基因表达重组融合蛋白质类
- 十五肽BPC-157对人脐静脉内皮细胞功能的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:观察十五肽BPC-157对人脐静脉内皮细胞株HUVEC增殖、周期、迁移及小管形成的影响。方法:用不同浓度(0、1、5、10、50、100μg/mL)的BPC-157作用于HUVEC细胞株,采用MTT法检测药物对内皮细胞增殖的影响,通过流式细胞仪观察细胞周期的变化,经细胞划痕和Transwell实验检测药物对内皮细胞迁移的影响,并且通过小管形成实验观察BPC-157对内皮细胞小管形成能力的影响。结果:HUVEC细胞株经BPC-157刺激48 h后,细胞增殖率和各时期细胞比例没有明显变化;而在刺激12 h时,BPC-157显著性促进细胞伤口愈合及穿膜细胞数的增加(P<0.01);刺激8 h时,给药组细胞开始聚合,形成复杂的管状网络结构,特别是5μg/mL剂量组。结论:十五肽BPC-157对人脐静脉内皮细胞株HUVEC增殖及细胞周期的改变基本没有影响,但对内皮细胞的迁移及小管形成能力具有明显的促进作用。
- 黄同列张昭舒震徐玉金赵薇张存张伟张伟
- 关键词：人脐静脉内皮细胞增殖细胞周期迁移小管形成
- 一种新型抗纤维化小肽AcSDKP的构建及活性初步研究
- 2012年
- 目的:以D型氨基酸替代的方式构建一种能抵抗血管紧张素转化酶(ACE)降解的异构体小肽AcSDKP,并对其抗纤维化活性进行初步研究,以期为AcSDKP在抗纤维化方面的应用提供依据。方法:用HPLC法检测D型氨基酸替代方式构建的AcSDKP异构体抗ACE降解的能力;用MTT法检测AcSDKP异构体对小鼠成纤维细胞L929和原代培养的心脏成纤维细胞增殖的影响;用流式细胞术检测AcSDKP异构体对骨髓干细胞(BMSC)向巨噬细胞分化的影响。结果:AcSDKP异构体均能抗ACE降解,能抑制L929细胞和心脏成纤维细胞增殖,能抑制BMSC向巨噬细胞分化。结论:构建了能抵抗ACE降解,在体外能抑制成纤维细胞增殖、巨噬细胞分化的AcSDKP异构体小肽,为该小肽进一步的体内研究及应用奠定了基础。
- 张昭黄同列徐天娇赵薇李萌张伟张伟
- 关键词：异构体抗纤维化骨髓干细胞心脏成纤维细胞
