阴彬
- 作品数：64 被引量：87H指数：6
- 供职机构：中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Sirt6基因脑特异性敲除对老年小鼠大脑皮层的影响被引量：1
- 2021年
- 目的研究衰老基因沉默信息调节因子6(silent information regulator 6,Sirt6)敲除后对于老年小鼠大脑皮层的影响。方法构建Sirt6-flox转基因小鼠,利用Emx1-Cre工具鼠对小鼠脑组织进行特异性Sirt6基因敲除。根据基因分型,将11只野生型小鼠作为对照组(WT组),10只Sirt6基因敲除小鼠作为条件敲除组(cKO组)。对老年小鼠的体型和体质量进行测量,HE染色比较大脑皮层厚度;EdU标记分析大脑神经再生,Western blot检测衰老相关RNA结合蛋白HuR和凋亡相关蛋白Caspase-3的表达,同时检测皮层内组蛋白乙酰化水平。结果成功构建Sirt6脑组织特异性敲除小鼠,12月龄组实验中,与WT组小鼠脑组织面积[(2.07±0.22)cm^(2)]和皮层厚度[(970.56±80.91)μm]相比,Sirt6 cKO组脑组织面积[(1.61±0.14)cm^(2)]和皮层厚度[(822.88±53.94)μm]均偏小,均差异有统计学意义(均P<0.05);EdU掺入神经细胞实验显示,与WT组每100个室管膜区神经细胞中EdU掺入细胞数目[(10.29±1.93)个]相比,Sirt6 cKO组室管膜区神经细胞EdU掺入数目偏少[(4.75±1.48)个],且差异具有统计学意义(P<0.001);在17月龄组实验中,与WT组体型、体质量[(35.25±4.17)g]和脑组织面积[(1.98±0.18)cm^(2)]相比,Sirt6 cKO组小鼠体型偏小、体质量[(29.00±1.08)g]偏低且脑组织面积[(1.54±0.55)cm^(2)]偏小,差异具有统计学意义(均P<0.05)。这两个月龄段小鼠脑皮层蛋白中Caspase-3、HuR表达降低(t=2.95,5.38,均P<0.05),且H3K9ac、H3K56ac的表达增高(t=3.53,2.78,均P<0.05),但同源基因Sirt1表达无变化(t=1.26,P>0.05)。结论Sirt6的脑组织特异性缺失会导致老年小鼠大脑神经再生减少,衰老加剧,凋亡增加,这可能是导致其大脑皮层变薄,脑组织萎缩的原因,推测其分子机制与Sirt6敲除后乙酰化水平升高有关。
- 王新寰侯琳阴彬刘伟彭小忠
- 关键词：组蛋白乙酰化神经再生衰老
- 应用cDNA微阵列分析脊髓损伤后基因表达的差异
- 2010年
- 背景:基因芯片可以大规模地平行检测分析上千个基因的表达模式,克服了传统的一次实验仅能对单个或数个基因表达水平进行分析的局限。目的:应用含有1176条人类全长基因的cDNA表达谱芯片,对大鼠急性脊髓损伤模型中基因表达水平的变化进行动态观察。方法:雌性SD大鼠70只随机分成正常对照组、手术对照组、损伤4h,24h,3d,7d,10d组7组。损伤组切除T7、T8的椎板,并用钢棒从高处自由落下致脊髓损伤。手术对照组仅进行T7、T8椎板切除。正常组和各损伤组于伤后各时间段,手术对照组于术后3d取T6～T10段脊髓,提取总RNA,运用AtlasImageTM2.01软件(Clontech)对放射自显影基因表达谱进行分析,各个处理组与正常组相比,灰度值差异超过3倍的基因定为有表达差异。结果与结论:结果显示共有显著表达差异基因81条,其中表达上调的基因有46条,表达下调的基因有35条,并在国内外首次观察到神经激肽B、神经肽Y、垂体后叶加压素V2受体等数个基因在脊髓损伤中的变化。结果表明利用基因芯片技术结合实验动物模型能大规模、高通量地观察急性脊髓损伤继发性损伤的基因表达谱,筛选疾病相关基因,对进一步阐明疾病在基因水平上的发病机制,有重要的意义。
- 强华周严刘瑾陈雄生黄晓伟张斌阴彬袁建刚贾连顺
- 关键词：急性脊髓损伤基因表达谱CDNA微阵列基因芯片
- 疟疾DNA疫苗免疫接种方法对小鼠体液免疫应答的影响被引量：10
- 2001年
- 目的 探讨DNA疫苗免疫接种方法对抗体水平及辅助性T细胞极化的影响。方法 利用DNA重组技术构建恶性疟原虫红内期多表位DNA疫苗 ,通过基因枪、肌肉注射、皮内注射等接种方法免疫小鼠 ,经ELISA测定该疫苗诱导产生特异性抗体的总量、亚型及表位特异性 ,比较不同免疫接种方法对DNA疫苗诱导产生抗体及辅助性T细胞极化的影响。结果 接种DNA疫苗的小鼠经 3次免疫后都产生了较高滴度的抗重组蛋白抗体。基因枪组单位DNA诱导抗体滴度是肌注组的 12 0倍。基因枪组小鼠血清抗体以IgG1升高为主 ,而肌注和皮内注射组小鼠血清抗体均以IgG2a升高为主。各免疫接种组诱导产生的抗表位多肽抗体特异性相同。结论 不同免疫接种方法不但会影响血清总免疫球蛋白水平 ,还能使辅助性T细胞向不同方向极化。肌注和皮内注射诱导产生以IgG2a为主的TH1型免疫应答 ,基因枪接种诱导产生以IgG1为主的TH2型免疫应答。DNA疫苗的摄取方式可明显影响辅助性T细胞的极化。
- 石宁董敏阴彬徐蓓何湘云李晋芳刘宝丰王恒
- 关键词：DNA疫苗辅助性T细胞基因枪疟疾
- 抗SARS-CoV病毒N蛋白的单链抗体(scFv)筛选被引量：2
- 2007年
- 目的筛选出抗SARS-CoV病毒N蛋白的单链抗体。方法利用原核表达所获得的SARS病毒N蛋白,筛选人源单链抗体噬菌体展示库,经特异性的检测,以期得到抗SARS-CoV病毒N蛋白的特异单链抗体。结果获得了8个抗SARS病毒N蛋白的候选克隆。经测序,获得了编码抗体可变区的基因序列,并进行了原核表达。结论筛选得到的抗SARS-CoV病毒N蛋白单链抗体具有高度的特异性,可以用作临床实验或研究SARS病毒过程中快速检测SARSN蛋白或SARS病毒粒子的候选抗体。
- 师珍艳阴彬魏群彭小忠
- 关键词：N蛋白
- 人HGLP cDNA的克隆和原核表达被引量：2
- 2001年
- 克隆了人HGLP cDNA, 编码蛋白具有G蛋白偶联受体类似的7个跨膜区, 具有视紫红质样G蛋白偶联受体超家族的基序(motif). Northern杂交分析发现HGLP广泛表达. 将HGLP的N, C端非跨膜区片段克隆到pET30a+表达载体中, 在E. coli中获得了高效表达.
- 周海军黄晓玮周严李光涛阴彬马艳玲彭小忠袁建刚强伯勤
- 关键词：G蛋白偶联受体CDNA原核表达膜受体
- 血管生成抑制因子canstatin基因的克隆及表达
- 2001年
- Canstatin是最近发现的能抑制新生血管生成和肿瘤生长的又一血管生成抑制因子 .从胎盘组织中提取总RNA ,根据已知canstatin基因序列 ,设计特异引物 ,应用RT -PCR方法扩增出该基因片段 .DNA序列测定表明 ,与文献报道的该基因比较 ,核苷酸序列完全一致 .将扩增得到的该基因克隆于原核表达载体 pPROEX HTb中 ,在大肠杆菌E .coliBL2 1中经IPTG诱导获得了表达 ,表达量约占菌体总蛋白量的 2 0 %以上 .
- 吴成军叶力建马志刚阴彬彭小忠
- 关键词：RT-PCR血管生成抑制因子基因克隆基因表达
- 人神经系统特异表达RNA结合蛋白HuC cDNA的克隆、表达及纯化
- 2006年
- 目的克隆人神经系统表达RNA结合蛋白HuC的cDNA并原核表达纯化。方法提取人神经母细胞瘤SHSY5Y细胞株总RNA,经RT-PCR扩增得到人HuC全长cDNA的克隆。将HuC cDNA克隆到原核表达载体pGEX4T-3载体中,并转化到大肠杆菌中,在获得高效表达后,利用GST纯化系统,对HuC重组蛋白进行纯化。结果经过表达及纯化条件的摸索,最终获得重组HuC蛋白。结论HuC蛋白是一种神经系统表达RNA结合蛋白,重组HuC蛋白的获得为HuC抗体的制备及进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
- 强华王先平狄文娜胡洁淼彭小忠贾连顺阴彬
- 关键词：CDNA克隆原核表达纯化
- Mef2c真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建小鼠Mef2c基因真核表达质粒并转染HEK293T细胞。方法采用RT-PCR方法从小鼠心脏组织的总cDNA中扩增出小鼠的Mef2c的基因,采用基因重组技术将Mef2c的cDNA片段插入真核表达载体pcD-NA3.1(+),构建小鼠Mef2c真核表达质粒,脂质体转染HEK293T细胞进行表达。结果酶切和测序结果证实Mef2c真核表达质粒构建成功,经脂质体转染293T细胞后,Western blot检测证明Mef2c蛋白在真核细胞中成功表达。结论成功构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Mef2c,为进一步研究小鼠Mef2c在心肌分化过程中的作用及其调控机制奠定了实验基础。
- 温见燕于长安杨鹏阴彬李耿柯元南廖文强
- 关键词：基因表达
- 神经系统RNA结合蛋白Musashi1 RRM1的初步结晶
- 2009年
- 目的对Musashi1发挥功能的RRM1结构域进行结晶,得到可用来衍射的蛋白晶体,为之后的结构解析打基础。方法通过构建Musashi1 RRM1的原核表达载体,并在BL21中表达、纯化高纯度的蛋白质,通过筛选结晶体条件得到蛋白晶体。结果通过系统筛选和优化晶体生长条件得到了蛋白晶体。结论Musashi1 RRM1的蛋白晶体质量较好,满足蛋白晶体衍射和数据收集的要求。
- 王先平赵理朱镜羲彭小忠阴彬
- 关键词：RNA结合蛋白RRM1
- ShcD通过PTB和SH2结构域和TrkC受体相互作用
- 2009年
- 目的探讨ShcD与TrkC的相互作用,以深入认识TrkC下游信号转导的分子机制。方法利用酵母双杂交技术,将TrkC及TrkC各种突变体的胞内区分别克隆到酵母质粒pAS2-1中,将ShcD及ShcD的4个结构域(CH2、PTB、CH1和SH2结构域)分别克隆到酵母质粒pACT2中,将它们分别共转化酵母菌后,通过β-半乳糖苷酶活性检测它们之间的相互作用。将TrkC克隆进pmRFP载体(带红色荧光蛋白),ShcD克隆进pEGFP载体(带绿色荧光蛋白),并将pmRFP-TrkC和pEGFP-ShcD共转染至293T细胞中,采用荧光共聚焦显微镜观察其定位情况。结果ShcD可以和TrkC但不能和激酶失活突变体TrkCM1(K572A)结合;PTB和SH2结构域均可以与TrkC受体结合并且PTB结构域结合于TrkC的NPQY模体;ShcD和TrkC在293T细胞中共同定位于胞膜和胞浆中。结论ShcD通过PTB和SH2结构域以依赖于受体激酶活性的方式结合TrkC。
- 尤元刚李玮琦阴彬彭小忠
- 关键词：TRKCPTBSH2共定位
