郝丽英 作品数:123 被引量:302 H指数:8 供职机构: 中国医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 辽宁省教育厅高等学校科学研究项目 美国中华医学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 自然科学总论 更多>>
二硫苏糖醇提取纯化Cavl.2钙通道片段CT3蛋白 被引量:2 2015年 目的探讨二硫苏糖醇(DTT)有助于Pre Scission蛋白酶切除重组蛋白GST-CT3标签GST的方法。方法在大肠埃希菌BL21中转化入p GEX-6P-3/CT3重组质粒并诱导其表达,用B-PER提取纯化重组蛋白GST-CT3,在10 mmol/L DTT存在的情况下Pre Scission蛋白酶切除GST标签得到高浓度的CT3蛋白,进行SDS-PAGE电泳鉴定CT3蛋白。结果不含DTT情况下,Pre Scission蛋白酶很难切除重组蛋白GST-CT3的标签蛋白GST,而在10 mmol/L DTT存在的情况下,Pre Scission蛋白酶能够切除重组蛋白GST-CT3的标签蛋白GST,得到高浓度的CT3蛋白。结论 10 mmol/L DTT有助于Pre Scission蛋白酶切除重组蛋白GST-CT3的标签蛋白GST,得到高浓度的CT3蛋白。 孙宇 封瑞 杨磊 毛楠 胡慧媛 孙雪菲 郝丽英关键词:重组蛋白 心肌细胞 钙通道 壬基苯酚对H9c2心肌细胞钙信号和细胞增殖的影响及其作用机制 被引量:1 2015年 目的探讨壬基苯酚(NP)对H9c2心肌细胞内钙离子浓度和细胞增殖的影响以及GPR30受体的作用。方法采用细胞内钙测定方法来记录H9c2心肌细胞内钙离子浓度变化,采用MTT法来观察H9c2心肌细胞增殖程度。结果 1×10-10mol/L NP使细胞内钙离子浓度升高的幅度增加,并促进H9c2细胞增殖,而1×10-6mol/L NP使细胞内钙离子浓度升高的幅度降低,并抑制细胞增殖。G15可以阻断1×10-10mol/L NP对细胞内钙离子浓度和细胞增殖的促进作用,但不能阻断1×10-6mol/L NP对细胞内钙离子和细胞增殖的抑制作用。结论 NP对H9c2细胞的快速钙信号变化和细胞增殖具有非单调的剂量依赖性作用,其机制可能是由于GPR30受体在不同浓度下参与的机制不同。 高青华 刘水策 郭凤 刘书源 于向沉 夏尔巴提吾马尔 孙雪菲 毛楠 赵美眯 朱彤 郝丽英关键词:壬基苯酚 H9C2细胞 细胞增殖 GPR30 脑线粒体膜钙通道检测方法的实验研究 2009年 目的建立线粒体膜钙通道的检测方法,为分离纯化钙通道蛋白提供更可靠的手段。方法采用分光光度技术,于吸光度540nm波长下测定30例沙士鼠脑线粒体膜钙通道在不同温度(30~35℃)、pH值(6.5~7.6)、蛋白质量浓度(0.2~0.6mg/ml)下的渗透性变化,以吸光度及达到平衡所用的时间反映膜钙通道变化。结果pH值7.4、0.5mg/ml线粒体蛋白含量以及25℃为线粒体膜钙通道的最佳检测方法。结论建立了鼠脑线粒体膜钙通道的最佳检测方法;可用于进一步分离纯化钙通道蛋白。 刘海军 孙晋民 刘翀 郝丽英关键词:钙通道 线粒体 PLTL教学法对药学专业学生学习能力的培养 被引量:2 2018年 目的探讨同伴主导的小组学习方法(peer-led team learning,PLTL)在临床药学专业药物毒理学教学中的应用价值。方法将90名学生平均分为传统教学组、PBL教学组与PLTL教学组,应用评估量表评价教学效果。结果与传统教学组相比,PLTL教学组学生自学时间显著增加,查阅资料、询问问题和讨论问题次数明显增加;与PBL教学组相比,PLTL教学组学生学习时间也明显增加,综合学习能力显著提高。结论与传统教学组和PBL教学组相比,PLTL组学生学习主动性、沟通能力以及分析问题、解决问题能力等明显较高。 聂宏光 胡慧媛 郝丽英 蔡际群 陈金宝 孙宝志关键词:药物毒理学 PBL教学法 豚鼠钙调蛋白2基因编码区及3′端非编码区序列克隆 被引量:3 2015年 目的克隆豚鼠钙调蛋白2(Ca M2)基因编码区及3′端非编码区,为豚鼠Ca M基因功能等研究提供遗传学信息。方法以豚鼠心肌组织作为实验材料提取RNA,通过RT-PCR和3′-RACE PCR的方法扩增Ca M2的编码区和3′端非编码区序列,应用基因工程技术插入克隆载体构建重组质粒后基因测序及分析。结果克隆出豚鼠Ca M2基因编码区450 bp序列和3′端非编码区660 bp序列。分析编码区序列所编码的氨基酸序列与其他种属其他亚型完全一致。而3′端非编码区与其他亚型的同源性较低。结论成功获得了豚鼠Ca M2基因编码区和3′端非编码区序列,为进一步研究Ca M2的基因功能及其在相关疾病中的作用奠定基础。 封瑞 刘彦 杨磊 胡慧媛 郭凤 赵美眯 赵金生 郝丽英关键词:钙调蛋白 基因克隆 编码区 钙蛋白酶抑制蛋白在神经系统疾病中的研究进展 2015年 钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)是钙蛋白酶(calpain,CAPN)的一种内源性和特异性抑制蛋白。它可以识别CAPN与Ca^2+结合引起的构象变化并与之特异结合,起负向调控作用。CAST参与众多生理和病理变化的信号转导过程,与神经系统各种疾病密切相关。近年来CAST在神经系统疾病中的作用受到广泛关注,其与神经系统疾病的发病机制紧密相关,现对该方面研究最新进展作一综述。 赵雪 郝丽英 郭凤关键词:钙蛋白酶抑制蛋白 神经系统疾病 CA^2+ 特异结合 构象变化 信号转导 人神经母细胞瘤细胞株Nav1.5 Na^+通道编码基因Nav1.5/SCN5A的克隆 2010年 目的克隆人神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB-1)细胞河豚毒抵抗型(TTX-R)Nav1.5Na+通道编码基因Nav1.5/SCN5A。方法使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对NB-1细胞TTX-R Nav1.5Na+通道α亚单位编码基因Nav1.5/SCN5A进行克隆。结果人神经母细胞瘤Nav1.5Na+通道编码基因Nav1.5/SCN5A命名为hNbR1,其开放阅读框架可编码2016个氨基酸残基。序列分析显示其与心肌Nav1.5/SCN5A基因(hH1)编码的氨基酸相似性达99.1%;在DⅠ/SS1-SS2之间,存在一个半胱氨酸(c373)残基,提示hNbR1为TTX-RNa+通道;DⅠS3-S4之间一个位于第3号染色体的新的外显子(第6A外显子)编码了该通道α亚单位。另外,一个删除了DⅡ-Ⅲ之间第18外显子的选择性剪接体(hNbR1-2)被发现。结论 Nav1.5/SCN5A基因新的变构体参与编码神经肿瘤组织Nav1.5Na+通道,同时发现该基因的一个新外显子参与编码该通道,且发现Nav1.5/SCN5A基因比以往所知具有更加广泛的表达。 欧绍武 王军 杨士松 宋腾 郝丽英 王运杰关键词:人神经母细胞瘤 选择性剪接 白花前胡甲素对豚鼠心肌细胞钙电流的影响(英文) 被引量:7 1994年 利用膜片钳制技术全细胞记录观察了白花前胡根中成分甲素对豚鼠单一心室肌细胞I_(Ca)的作用。表明;1,10,100μmol·L^(-1)的甲素使I_(Ca)的峰值变小,具有剂量依赖关系。给药前后I_(Ca)的翻转电位均为+60mV,实验结果提示甲素对Ca^(2+)通道有阻滞作用。 李金鸣 常天辉 孙晓东 郝丽英 王玉萍 于艳凤 张克义关键词:白花前胡甲素 心肌细胞 钙拮抗剂 膜片钳技术 心肌Cav1.2钙通道NT片段的提取纯化及其与CaM的相互作用 被引量:1 2017年 目的探讨心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段提取与纯化的方法,并研究其与CaM的相互作用。方法将NT的cDNA插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导NT的GST融合蛋白表达,GS-4B beads分离纯化,Pre Scission蛋白酶切除GST标签,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)检测蛋白纯度和相对分子质量。采用GST pull-down实验研究NT片段与Ca M的相互作用。结果 SDS-PAGE结果显示成功纯化获得NT蛋白片段,且具有较高的纯度。GST pull-down实验结果显示NT可与Ca M结合,且具有浓度依赖性。结论本研究成功制备与纯化了心肌Cav1.2钙通道NT蛋白片段,为深入研究蛋白相互作用及NT的生物学功能奠定了基础。 苏敬阳 邵冬雪 雷明 康泽 赵君 方涵田 郭凤 赵美眯 郝丽英 封瑞关键词:NT 纯化 CAM GS 钙调蛋白N_2和C_2突变体载体的构建、表达纯化和鉴定 被引量:1 2017年 目的构建钙调蛋白(CaM)N_2和C_2突变体的表达性载体,表达纯化并进行活性鉴定,为进一步研究CaM与钙通道片段的相互作用奠定基础。方法将CaM的N-lobe和C-lobe的cDNA分别与相应的N-lobe和C-lobe的cDNA相连,制备N_2和C_2突变体的cDNA。将N_2和C_2的cDNA分别插入p GEX-6p-3载体,并将重组质粒转入E.coli BL21菌株,IPTG诱导转化成功的菌株表达GST融合蛋白,超声破碎法提取,GS-4B beads纯化,SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白相对分子质量及纯度,pull-down实验鉴定活性。结果酶切鉴定以及DNA测序结果证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE电泳图显示突变体蛋白纯度和浓度均较高;pulldown实验结果证明突变体蛋白有生理活性,能与钙通道片段结合。结论本研究成功构建了N_2和C_2表达质粒,并提取、纯化了有活性的钙调蛋白N_2和C_2突变体。 晏珊 雷帅 陈思充 于佳慧 祝旭东 孙嘉瑶 杜逸 李墨 唐子鉴 郝丽英关键词:钙调蛋白 N2 C2