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卫生部微生物室间质评1012菌的鉴定与放线菌属的系统发生分析被引量：35: 2011年; 目的对卫生部临床检验中心2010年微生物室间质评1012菌进行鉴定，研究1012菌的分类学位置及放线菌属的系统分类现状。方法采用传统的细菌学形态检查、商品化的API、以及16SrRNA基因测序等多种手段对1012菌进行系统的鉴定。结合远程计算机系统提供的原核生物信息，构建放线菌属及相关细菌的16SrRNA基因的系统发生树，研究放线菌属的系统进化及1012菌与相关菌种之间的亲缘关系。结果1012菌为兼性厌氧、不形成芽胞的革兰氏阳性棒状菌，60多项生化实验，除L-阿拉伯糖发酵实验阴性，其余与图列茨放线菌一致。16SrRNA基因序列分析结果显示：1012菌与图列茨放线菌的同源性高达99．8％，但与放线菌属的模式菌种——牛放线菌的同源性仅为90．6％。进一步的系统发生树亦表明，放线菌科的五个菌属清晰地聚类成9个“基因属”，小弯杆菌、动弯杆菌、放线杆菌、隐秘杆菌4个菌属分别包含单一的基因群，而放线菌属则包含了5个独立的基因群。结论1012菌可鉴定为图列放线菌，但从基因的角度上分析，当前的放线菌属的组成结构过于松散，可能会重新分类。; 屈平华赵红波黄彬张伟铮张颖陈茶; 关键词：放线菌科

应用单一和双重荧光定量PCR法快速检测军团菌被引量：2: 2011年; 目的建立单一和双重荧光定量PCR方法分别和同时进行军团菌属及嗜肺军团菌的检测.方法利用军团菌属16 S rRNA基因和嗜肺军团菌mip基因设计引物和探针,两条基因探针分别标记FAM和HEX,并将相关反应体系和条件进行优化.分别应用单一基因探针（单一荧光定量PCR）和双重基因探针（双重荧光定量PCR）对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及非军团菌进行检测,并验证两种方法的特异度、敏感度.应用双重荧光定量PCR检测空调水样滤膜样品和DNA提取样品,比较两者结果的一致性.结果针对军团菌属及嗜肺军团菌,应用荧光定量PCR,16 S rRNA基因和mip基因均能较好的检出,16S rRNA和mip的最低检出限分别为8和10个拷贝.经优化得到了最佳反应体系.单一荧光定量PCR方法所检的8株嗜肺军用菌及4株非嗜肺军团菌16 S rRNA基因均为阳性,嗜肺军团菌mip基因阳性,非嗜肺军团菌mip基因阴性.双重荧光定量PCR方法所检的23株嗜肺军团菌中有2株为假阴性,9株非嗜肺军团菌和非军团菌属中有1株为假阳性.49份空调水样滤膜直接检测和提取DNA后检测的结果一致,其中26份水样军团菌阳性,20份为嗜肺军团菌,6份为非嗜肺军团菌;1份弗朗西斯菌检测HEX阳性（假阳性）,占实际培养分离的1/26.结论单一及双重荧光定量PCR法特异、快速、敏感,一次同时检测嗜肺与非嗜肺军团菌,满足对空调和环境水样军团菌监测的要求.; 莫自耀秦建强赵红波关文达秦笙王玉涛杨子峰; 关键词：聚合酶链反应荧光军团菌 RRNA基因 MIP基因

人工冬虫夏草在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的治疗作用和机制研究被引量：10: 2012年; 目的研究人工冬虫夏草对香烟烟雾所致慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型的治疗和作用机制。方法SD健康雄性大鼠随机分为对照组、COPD组、造模前给药组、造模后给药组、中剂量（2．5g·kg-1·d-1）和高剂量（5g·kg-1·d-1）治疗组共6组，每组10只。动物连续烟熏90d造模。造模前给药组于造模前两周开始给药，治疗组在造模前给药的基础上持续给药直至造模结束。造模后给药组为在造模结束后给药两周。测定各组大鼠肺功能，观察肺组织病理学变化，提取肺组织总蛋白进行双向电泳，对表达差异显著的蛋白点进行鉴定分析。结果气道阻力均值COPD组（O．3869cmH2O·ml-1·s）明显高于对照组（0．2630cmH20·ml-1·s）（P〈0．05）；造模前给药组（0．2525cmH2O·ml-1·s）、中剂量治疗组（O．2233cmH2O·ml-1·s）、高剂量治疗组（0．1846cmH2O·ml-1·s）、造模后给药组（O．3011cmH2O·ml-1·s）均明显低于COPD组（P〈O．05），与对照组相比差异无统计学意义。给药各组特别是高剂量组与COPD组相比支气管和肺部病理情况均有明显改善，结果差异有统计学意义（P〈O．05）。与对照组相比有14种蛋白质的表达量在COPD组中显著下降。谷胱甘肽过氧化物酶、醛脱氢酶及线粒体醛脱氢酶前体等三种蛋白则在高剂量治疗组中表达量得到恢复和改善。结论人工冬虫夏草对大鼠cOPD有明确的治疗作用，推测与抑制或改善肺部组织氧化与抗氧化失衡以及改善全身状况有关。; 廖东江卢心鹏赵瑾刘蓉赵红波李洪涛莫自耀; 关键词：人工冬虫夏草慢性阻塞性肺疾病

环介导等温扩增技术快速检测结核分枝杆菌核酸被引量：6: 2011年; 目的建立一种快速准确的检测结核分枝杆菌(MTB)核酸的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法以重复插入序列IS6110为目的基因,设计LAMP引物,特异检测MTB核酸。用本法与痰涂片抗酸染色镜检法、实时荧光PCR法对100例可疑患者痰标本进行对比检查。结果 LAMP法特异性强,仅扩增MTB复合群核酸;灵敏度高,检测限达100 fg;而实时荧光PCR检测限为1 pg。对100例疑似结核病患者痰液标本检测,涂片抗酸染色法、LAMP法、实时荧光PCR法的阳性率分别为28%、39%和38%。结论本研究建立的LAMP方法检测MTB核酸特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为临床快速检测MTB的新方法。; 沈会平张耀祺杨坚石磊陈涛李国周赵红波莫自耀; 关键词：结核分枝杆菌

带GFP标记嗜肺军团菌的构建和在细胞感染中的应用被引量：2: 2014年; 【目的】为能实时直观了解嗜肺军团菌感染细胞的过程,研究细菌在细胞内的变化及其与宿主细胞间的相互作用关系。【方法】通过基因敲除、克隆回补等重组构建绿色荧光蛋白(GFP)稳定高表达的嗜肺军团菌株,利用该菌株建立小鼠巨噬细胞Raw264.7的感染模型。【结果】通过荧光显微镜可实时观察细菌感染细胞的全过程,包括细菌在细胞内的形态变化、增殖和裂解宿主细胞等。【结论】重组菌可替代野生菌株在细胞感染中应用,为直观研究嗜肺军团菌与被感染细胞之间的相互作用关系,以及进行相关药物模型的制备、药物筛选、耐药机制研究等提供了新的手段。; 熊丽娜赵红波莫自耀石磊; 关键词：嗜肺军团菌绿色荧光蛋白

荧光定量PCR结合EMA/PMA染色法快速检测军团菌活菌被引量：6: 2013年; 目的:利用EMA/PMA经膜核酸染色结合荧光定量PCR技术快速检测军团菌活菌,比较两者的检测效率。方法:军团菌分别经加热灭活和氯消毒剂灭活,加入EMA/PMA处理,确定EMA/PCR、PMA/PCR体系和反应条件,之后进行快速检测。利用BacLight Live/Dead bacterial viability kit验证活菌,同时用培养法做比对。结果:EMA和PMA工作浓度分别为0μg/ml,5μg/ml,10μg/ml,25μg/ml,50μg/ml,100μg/ml,将菌液与之混合后用卤素灯照射,时间分别为0 min,1 min,5 min,15 min,经测试确定EMA工作浓度为50μg/ml,而PMA为25μg/ml,光照时间选用15 min。模拟环境样本检测,EMA/PMA real-time PCR检测限均为104cfu/ml,但培养法PMA处理后平板上菌落多于EMA处理组。结论:EMA/PMA real-time PCR可快速检测军团菌活菌,检测效率相当(均低于不加染料组),PMA效果优于EMA。; 赵红波熊丽娜莫自耀; 关键词：荧光定量PCR EMA PMA 军团菌活菌

不同方法对军团菌环境分离株的鉴定和分型: 2013年; 目的应用不同分型方法对环境分离的军团菌进行鉴定和分型，并进行结果比较。方法采用脂肪酸分型法，16S rRNA和mip基因分型法，对澳门公共场所环境水体所分离的55株军团菌进行鉴定和分型，并对结果进行分析和比较。结果脂肪酸分型将55株军团菌分为10个群共8个种，16SrRNA和mip分型结果相近，都将所有菌株分为6个群共6个种，树状图一致性较高。结论三种方法均可在鉴定细菌的同时进行分型研究，大部分菌株结果相同，少数菌株存在差异，实际应用时最好是多种方法同时进行以确保结果的准确性。; 赵红波熊丽娜莫自耀; 关键词：RRNA MIP 军团菌

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赵红波

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