蒋祥龙
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
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- sTRAIL基因引起人恶性畸胎瘤细胞与人胚胎干细胞凋亡比较
- 2010年
- 目的:评估sTRAIL基因引起人胚胎干细胞[human embryonic stem(hES)cells]和人恶性畸胎瘤(human malignant teratoma)细胞NTERA-2凋亡的作用。方法:本室已构建的pAAV-PEG3-sTRAIL质粒,转染NTERA-2和hES细胞,用流式细胞仪和定量PCR检测NTERA-2和hES细胞的早期凋亡及sTRAIL基因的受体的表达。结果:NTERA-2细胞经瞬时转染pAAV-PEG3-sTRAIL质粒后,早期凋亡比例达24.4%±2.1%,sTRAIL的死亡受体DR4、和DR5的表达分别上升2和3倍,而hES细胞转染pAAV-PEG3-sTRAIL质粒后,早期凋亡比例仅2.3%±1.2%,受体DR4、DR5、DcR1和DcR2的表达未有明显变化。结论:pAAV-PEG3-sTRAIL质粒可有效地引起人恶性畸胎瘤细胞NTERA-2的凋亡,但是对人胚胎干细胞尚未发现可见的细胞凋亡现象。
- 蒋祥龙潘艺卢光琇
- 关键词：STRAIL凋亡胚胎干细胞
- CD117(c-kit)在人类精液生精细胞中表达研究被引量：4
- 2005年
- 目的从精液中分离和鉴定各类生精细胞,探讨用c-kit从精液中分离生精细胞的可能性。方法对精液中圆细胞超过3×106的标本进行联苯胺兰染色,排除白细胞,再用改良非连续percoll梯度离心,对生精细胞进行分离纯化。结合细胞形态学、荧光原位杂交,鉴别各类生精细胞的组成,运用抗人CD117单克隆抗体对纯化的细胞进行免疫细胞化学检测。结果经Percoll分离,对分离的细胞用X/Y混合探针进行荧光原位杂交,可对除精原细胞和初级精母细胞外的各级生精细胞进行准确的分类,结合形态学分析,可确定分离细胞中生精相关细胞的组成比例。在分离纯化的圆细胞中,无核胞浆小体占整个细胞比例为28.5%,细胞免疫化学研究表明,有c-kit表达的细胞占整个总细胞的比例为66.3%,且精子也表达c-kit。结论c-kit在人类精液中各级生精细胞及精子上均表达,为从人类精液中分离各类生精细胞用于临床及科研提供了可能。
- 蒋祥龙范立青朱文兵曾亚荣卢光王秀
- 关键词：生精细胞
- pAAV-PEG3-sTRAIL质粒的构建及表达研究被引量：1
- 2010年
- 目的构建pAAV-PEG3-sTRAIL质粒并检测其诱导细胞凋亡的作用。方法从大鼠尾巴中提取gDNA,PCR扩增PEG3启动子,测序后定向替代pAAV载体中的CAG启动子。从培养的NTERA-2细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增sTRAIL基因(编码氨基酸序列114-281),测序后定向插入至pAAV-PEG3质粒的多克隆位点。用pAAV-PEG3-sTRAIL质粒FUGENE HD转染人hSF、NTERA-2和hES细胞,用半定量RT-PCR和流式细胞仪分别检测sTRAIL基因的表达和细胞的早期凋亡。结果限制性内切酶酶切和测序分析证实,本文成功地获得了PEG3启动子和sTRAIL基因片断,并将PEG3和sTRAIL准确插入了pAAVL质粒。转染hSF、NTERA-2和人胚胎干细胞(hES)后,检测到sTRAIL基因的表达及其引起的肿瘤细胞NTER-A-2的早期凋亡。结论成功构建了pAAV-PEG3-sTRAIL质粒,并有可能用于肿瘤的基因治疗。
- 蒋祥龙彭炬潘艺卢光琇
- 关键词：STRAIL凋亡胚胎干细胞
