王柳
- 作品数：53 被引量：288H指数：12
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划黑龙江省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 马传染性贫血病毒弱毒株LTR的克隆及序列分析被引量：15
- 1998年
- 从马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）弱毒株感染的驴胎皮肤（ＦＤＤ）细胞中提取前病毒ＤＮＡ，以其为模板，通过ＰＣＲ扩增出ＥＩＡＶ弱毒株的ＬＴＲ，并将其克隆到载体质粒ｐＵＣ１９中。经酶切分析，ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交筛选、鉴定，获得含有ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ片段的重组质粒ｐＬＴＲ。对该质粒的序列分析发现，在中国ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ的Ｕ３区含有４个与细胞转录因子结合的位点，其中有３个ＰＵ．１位点和１个ＡＰ－１位点，Ｕ３区还存在１个ＴＡＴＡＴＡＡ启动子序列；Ｒ区长为８１ｂｐ，含有１个帽位点ＧＧ和１个Ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列ＡＡＴＡＡＡ；在帽位点下游是１个病毒Ｔａｔ蛋白结合位点，即ＴＡＲ位点；Ｕ５区长为３９ｂｐ。中国ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ序列与国外发表的其他毒株序列相比，在ＬＴＲ的一些调控部位有变异发生，中国ＥＩＡＶ弱毒株与美国ＥＩＡＶ原型株（Ｗｙｏｍｉｎｇ株）ＬＴＲ区核苷酸序列有１８．７２％的差异。
- 王柳于力张绍杰仇华吉王玫童光志
- 关键词：马传染性贫血克隆病毒弱毒株
- 牛副结核分枝杆菌基因文库的构建及特异性DNA片段的筛选被引量：1
- 1993年
- 以质粒pBluescript SK为载体,用Pst Ⅰ构建了牛副结核分枝杆菌C_2株的基因文库,并初步筛选出4个与牛结核分枝杆菌、禽结核分枝杆菌、草分枝杆菌不反应的重组子。快速提取重组质粒分析的结果表明,这4个牛副结核分枝杆菌的特异性DNA片段大小分别为5.1kb、2.2kb、1.7kb和1kb。
- 陈奖励何昭阳王会堂姜云垒王玫王柳童光志
- 关键词：牛病副结核分枝杆菌基因文库
- 传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB在重组鸡痘病毒中的表达被引量：24
- 2000年
- 本试验首先用PCR方法扩增出ILTVgB基因 ,将其克隆到质粒pUC1 1 9中 ,并进行了序列分析。将克隆的gB基因再亚克隆到禽痘病毒转移载体质粒中 ,然后 ,通过质脂体方法转染由禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,筛选蓝色的重组病毒 ,并对其进行了 6轮蚀斑纯化。该重组病毒通过PCR方法鉴定证明其基因组中含有完整的鸡传染性喉气管炎gB基因 。
- 张绍杰童光志王柳仇华吉倪建强孟松树于力王玫
- 关键词：重组鸡痘病毒ILTV基因表达
- 表达传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒对SPF鸡的免疫保护性研究
- 将表达鸡传染性喉气管炎病毒糖蛋白gB基因重组鸡痘病毒(rFPV-ILTVgB)经翅皮下注射接种(5×105PFU/羽)六周龄的SPF鸡,免疫后4周以致死剂量鸡传染性喉气管炎病毒王岗强毒株进行喉内接种攻毒。结果该重组鸡痘病...
- 张绍杰童光志孟松树仇华吉王柳王云峰王玫
- 文献传递
- 伪狂犬病病毒Bartha-K61株TK基因的分离鉴定被引量：4
- 2000年
- 提取伪狂犬病病毒 (PRV )Bartha K61株基因组DNA ,用限制性内切酶KpnⅠ充分消化 ,回收 5 .9× 10 3 b片段(J片段 ) ,将其克隆于质粒 pUC119KpnⅠ位点上 ,获得pBKJ。用一对针对PRVTK基因的特异性引物对重组质粒进行PCR鉴定 ,证明其中含有PRVTK基因。然后用KpnⅠ、PstⅠ和BamHⅠ等限制性内切酶对其进行酶切分析 ,确定了克隆片段的物理图谱。进一步研究证实TK基因位于其中的KpnⅠ BamHⅠ或KpnⅠ PstⅠ片段中。然后亚克隆此KpnⅠ PstⅠ片段 ,并进行了序列测定。
- 仇华吉周彦君孔令达张绍杰钱平王柳童光志
- 关键词：伪狂犬病病毒TK基因
- 伪狂犬病病毒(PrV)糖蛋白gE基因在重组杆状病毒中的表达被引量：6
- 2000年
- 应用PCR方法扩增出 1 .8Kb的伪狂犬病毒糖蛋白gE基因 ,克隆到pUC1 1 9中形成重组质粒pRZE。经测序鉴定后再将gE基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1 392中 ,形成重组质粒pVLgE。将pVLgE与杆状病毒线性DNA(BAC_N_BlueDNA)共转染Sf9昆虫细胞 ,经三轮蚀斑纯化 ,获得重组病毒rpVLgE。通过PCR方法鉴定证明gE基因正确插入到杆状病毒基因组中 ,直接免疫荧光试验和WesternBlot结果表明gE基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得高效表达。表达的gE蛋白将作为伪狂犬病强毒和gE基因缺失弱毒疫苗鉴别诊断ELISA方法的抗原 。
- 倪建强张绍杰冉智光仇华吉王柳孟松树王玫童光志
- 关键词：糖蛋白E伪狂犬病PRV杆状病毒
- 马传染性贫血病毒(EIAV)嵌合感染性分子克隆的体外构建
- 马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus EIAV)导致马持续性感染和反复病毒血症,与人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)同属反转录病毒科慢病毒属,二者有很多相似的特性.EIAV是遗传结...
- 涂亚斌王柳刘红全仇华吉童光志
- 文献传递
- 马传染性贫血强/弱毒嵌合病毒的体外构建
- 马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)引起马传染性贫血(简称马传贫),导致马持续性感染和反复病毒血症.为了探讨LTR在EIAV病毒复制和转录过程中的作用,并进一步研究E...
- 涂亚斌王柳仇华吉温建新谷守林童光志
- 关键词：嵌合病毒体外构建马传染性贫血病毒分子克隆
- 文献传递
- PCR技术及其在兽医领域中的应用被引量：1
- 1994年
- 阐述了ＰＣＲ技术的原理及近年来推出的ＰＣＲ新方法，着重讨论了ＰＣＲ技术在检测感染病毒、疾病的鉴别诊断、区别野毒与重组疫苗毒、鉴别不同的病毒株、制备标记探针等方面的应用。
- 王柳王兴洲
- 关键词：聚合酶兽医
- 马传染性贫血病毒弱毒疫苗株感染性分子克隆的构建被引量：12
- 2003年
- 采用PCR方法分 3段扩增出马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株 (EIAVDLA)的前病毒DNA ,这 3个片段覆盖马传染性贫血病毒的全部基因组 ,PCR产物经克隆后顺次连接 ,获得 1个含有EIAV全基因 (8.0kb)的重组质粒 ,将其命名为p8.0。将此 8.0kbEIAV全基因再亚克隆到含有一完整EIAVDLA株长末端重复序列的质粒中 ,获得一含有EIAV驴白细胞弱毒前病毒全基因的重组质粒 ,将其命名为p8.2 ,经核苷酸序列分析 ,证明p8.2含有EIAV前病毒的全基因。用p8.2转染驴白细胞 ,将其作为种毒进行传代 ,于感染该克隆毒的细胞培养上清中检测出了反转录酶活性 ,说明在驴白细胞中由p8.2衍生出了EIA病毒。驴白细胞经该克隆毒感染后 ,第 4天出现病变 ,经透射电镜可观察到典型的马传染性贫血病毒粒子 ,进一步证明p8.2具有感染性 ,笔者获得了马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆 。
- 王柳童光志仇华吉谷守林涂亚斌杨志彪
- 关键词：传染性贫血病毒弱毒疫苗株感染性分子克隆基因构建
