王元伦 作品数:66 被引量:236 H指数:9 供职机构: 南京军区疾病预防控制中心 更多>> 发文基金: 江苏省自然科学基金 江苏省科技攻关计划 军队医药卫生科研基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 更多>>
猪瘟病毒单克隆抗体的研制和应用Ⅰ.抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定 被引量:9 1989年 以聚乙二醇(PEG,MW6000)沉淀法部分纯化的猪瘟兔化弱毒中国株(SFV-C)免疫BALB/C小鼠,取其脾脏制备脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经ELISA检测和有限稀释法克隆化筛选出9株对SFV特异的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞。它们产生的McAb仅对SFV-C株发生特异性反应,而与SFV-S及BV DV Oregon株不发生反应.相加试验表明,9个McAb分别针对不同的抗原决定簇。所有的McAb均不具有沉淀反应特性。 周宗安 刘劲松 房德兴 顾志香 王元伦关键词:猪瘟病毒 单克隆抗体 兔化弱毒 携带猪囊虫表位的嵌合蛋白疫苗的构建及其免疫学研究 被引量:6 2006年 用PCR法将猪囊虫抗原表位n1、n2插入乙肝病毒核心蛋白(HBc)序列的第78~79位之间,将猪囊虫抗原表位n3接在149位之后,再将该序列克隆入pET28a载体中,构建了重组表达质粒pET28a—△c-3n,在大肠杆菌中表达出融合蛋白。命名为PCCE。将PCCE纯化后免疫小鼠,以ELISA检测小鼠的体液免疫应答,Western blot检测抗体的特异性.Dot ELISA验证所选表位的保护性。另用绦虫卵攻击免疫小鼠,以观察疫苗的保护作用。测序结果表明,重组质粒构建成功;SDS—PAGE显示,融合蛋白表达正确,电镜证实有蛋白颗粒形成。对免疫小鼠应用ELISA检测到高滴度抗体;Western blot结果表明。免疫鼠体内诱导出了3种特异性抗体;Dot ELISA结果表明,所逸表位对宿主可能具有保护性。绦虫卵攻击免疫小鼠试验表明,疫苗PCCE的相对保护率为89%。结论:成功地表达和纯化了以HBc为载体的携带3个猪囊虫表位的融合蛋白(PCCE),以PCCE作为疫苗免疫小鼠,能诱导较强的特异性体液免疫反应,免疫小鼠对绦虫卵攻击具有较好的免疫保护作用。 邓小昭 周宗安 刁振宇 高健 王元伦 刘玉 郑纪山关键词:猪囊虫 疫苗 HBCAG 免疫反应 检测HBV基因组nt585位突变的特异性聚合酶链反应 被引量:1 1999年 目的 为调查乙型肝炎病毒(HBV)nt585位A→C变异株在国内的流行情况提供方法学。方法 根据已知的HBV基因组序列并结合国内主要流行adr和adw亚型的特点,合成在nt585位分别为A和C的2套4对引物,建立了突变特异性聚合酶链反应(msPCR)方法。结果 利用msPCR对由25份乙型肝炎免疫失败儿童患者血清和32份成人乙型肝炎患者血清扩增的HBVS基因片段进行了初步检测。结果表明该法可特异性扩增nt585为A和C的HBVDNA。结论 该法是鉴定HBV基因组nt585位A→C变异株的特异而敏感的方法。 房德兴 李法卿 谭维国 王元伦 陈华标 林厚基 周镇先关键词:乙型肝炎病毒 突变 聚合酶链反应 麻雀自然感染鸡传染性法氏囊病病毒的调查 被引量:6 1994年 从鸡传染性法氏囊病(IBD)流行的鸡场捕杀麻雀54只,用鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)单克隆抗体夹心阻断ELISA检测抗体,阳性检出率为7.4%(4/54);以逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测病毒核酸,阳性检出率为11.1%(6/54);RT-PCR阳性样本病毒分离亦为阳性。结果表明,IBD流行的鸡场里的麻雀能够发生IBDV自然感染,麻雀可能是IBDV的贮存宿主或二次传染源之一。 王永山 周宗安 翟春生 王元伦 方元 顾志香 王军 肖元廷关键词:麻雀 IBD IBDV ELISA 猪瘟病毒单克隆抗体的研制和应用——抗猪瘟兔化弱毒单克隆抗体的纯化 被引量:9 1991年 采用硫酸铵3次沉淀法和辛酸-硫酸铵法对4个IgG亚类(IgG_1,IgG_2a,IgG_2b,IgG_3)单克隆抗体腹水进行了纯化,以间接ELISA检测纯化前后样品的活性,经十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析纯化前后样品的纯度。结果表明,两种方法均可较为有效地去除腹水中的杂蛋白,获得用于诊断目的的单克隆抗体纯品。硫酸铵3次沉淀法适用于纯化所有IgG亚类的单克隆抗体,而辛酸-硫酸铵法不适于IgG_3亚类。 房德兴 王元伦 周宗安 刘劲松 顾志香关键词:猪瘟 病毒 单克隆抗体 免疫抑制对苏拉灭和贝尼尔治疗小鼠伊氏锥虫病疗效的影响 1995年 用从自然感染宿主分离的伊氏锥虫(Trypanosomaevansi)原种JG的克隆JGmcl和JGmc5感染免疫活性正常小鼠和免疫抑制小鼠,24h后,以苏拉灭或贝尼尔治疗,两种药物对免疫抑制小鼠的CD100均明显高于免疫活性正常小鼠。由经受一次苏拉灭或贝尼尔治疗未愈的免疫抑制小鼠分离的锥虫,感染免疫活性正常小鼠,再用原来对该克隆感染的免疫活性正常小鼠CD100的苏拉灭或贝尼尔治疗即无效。用免疫溶解试验分别测定一组免疫抑制和免疫活性正常小鼠感染后7d的血清,前者均为阴性,后者均为阳性,几何平均滴度1:102.3。抗体水平和虫血症消失与否密切相关。免疫抑制不仅显著降低抗锥虫化疗的效果,而且会导致产生抗药的锥虫;抗体的产生受抑制可能是引起上述效应的一个重要因素。 方元 叶万祥 聂海洋 王元伦关键词:伊氏锥虫病 免疫抑制 抗药性 抗体 应用免疫酶染色法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究 被引量:2 1995年 用免疫酶染色法检测Vero细胞培养物、陈旧石蜡切片和人工感染试验鸡组织中的AVAV,并比较了AVAV强毒和弱毒株在组织中的分布情况。结果发现,试验鸡于感染AVAV弱毒株后1~5天、感染AVAV强毒株后1~9天出现病毒血症;跗关节、跖趾关节、趾关节、趾屈肌健、脾脏、肝脏等组织中病毒的检出率最高,存在时间也最长;在感染后3~20天于感染鸡法氏囊、感染后3~11天于感染鸡胸腺中检出了强毒株,在这两组织中未检出AVAV弱毒株。感染8小时后的Vero细胞培养物和陈旧石蜡切片均被检出AVAV。 唐雨德 周宗安 翟春生 王元伦 顾志香关键词:免疫酶染色法 鸡病 病毒性关节炎 病毒 板蓝根多糖对小鼠的免疫调节作用 被引量:32 1991年 腹腔注射板蓝根多糖可明显增强小鼠对DNCB的迟发型变态反应,诱导体内淋巴细胞转化和增强脾细胞的NK活性。 陆平成 许益民 王永珍 刘劲松 周宗安 顾志香 王元伦 房德兴关键词:板蓝根多糖 迟发型变态反应 NK活性 两种猪瘟细胞疫苗免疫猪体内抗体消长动态的比较观察 1993年 用猪瘟猪肾原代细胞菌和猪瘟牛睾丸细胞苗分别免疫的两群猪体内抗体的消长曲线明显不同.猪肾原代细胞苗免疫抗体于免疫后90d左右达到峰值(OD值1.59).随后迅速下跌到OD值0.5左右的水平,相对稳定一段时间后缓慢下跌;而牛睾丸细胞苗免疫抗体没有出现明显的峰值,免疫后缓慢上升,60d后OD值达0.42,至150d方达0.66,以后开始下跌.产生这一差异的原因可能是两种疫苗的免疫原含量不同所致. 王元伦 周宗安 刘劲松 顾志香 房德兴 肖元庭关键词:猪瘟 疫苗 抗体消长 体外培育抗苏拉灭伊氏锥虫克隆 被引量:3 1994年 将3个苏拉灭敏感的伊氏锥虫原种的克隆连续培养于改良Baltz无细胞培养系统中,通过逐步提高培养基中苏拉灭的含量,培育了3个抗苏拉灭的伊氏锥虫克隆─JGc1-160、JX-1c1-160和ZJc1-140。它们体外药敏试验的IC50依次为358.5、412.3和246.4μg/mL,是各自亲本克隆的1292.5、1874.1和1760.o倍;小鼠治疗试验的CD100,对免疫功能正常小鼠依次为80、120和30mg/kg,为各自亲本克隆的5.3、8.0和3.0倍,对免疫抑制小鼠为250、300和100mg/kg,分别是相应免疫正常小鼠的3.1、2.5和3.3倍。试验结果表明,抗锥虫药治疗剂量不足和宿主免疫功能不全是导致产生抗药虫株的重要因素,各自既可单独发挥作用,又可相互协同。本文报道了体外培育伊氏锥虫抗药虫株的方法,这一方法对研究锥虫抗药性具有重要作用。 方元 叶万祥 聂海洋 王元伦关键词:伊氏锥虫 体外培养 抗药性