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王东: 作品数：48 被引量：59H指数：4; 供职机构：宁夏大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金宁夏回族自治区科技厅科技攻关项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

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猪丹毒78_((75))弱毒菌株的研究——78_((75))弱毒株的诱变和筛选被引量：1: 1989年; 原猪丹毒78—78弱毒菌株是1978年从猪体分离所得的自然弱毒菌株。1983年以前在实验室条件下,经小白鼠、家鸽与猪进行了安全性、免疫原性及稳定性等系列试验,其结果均较良好。因此,于1984年采用78—78弱毒菌株制成了冻干菌,在区内的五个猪丹毒疫场和山东德州地区农村,对3500余头猪进行了田间试验,经过近期安全性和7～8个月的有效期考查,各试验点猪群均未见异常表现,也未发生过猪丹毒病。1985年初,用本菌种在北京市生药厂进行了6批次冻干苗中间试产,春防期间在江苏南通,湖南长沙、龙山,四川江津、江油和北京市郊区作了38744头猪的区域试验,其结果:本苗在南通、长沙和江津对约克、长白及其杂种猪,以皮下或肌肉注射法分别接种998头、108头和470头,各出现反应107头、10头和13头;在龙山对15455头湘西黑猪、北京郊区423头长白、荣昌、内江及其杂种猪,菌苗注射后,未见异常表现,以菌苗混饲喂服法,在江津和江油给约克、长白及其杂种猪群9734头和11556头投喂后,均未见异常表现。; 陈祝三蒲正矞陈廷和王东武志兰; 关键词：丹毒诱变

猪丹毒78_((75))弱毒菌株的研究——78_(75))弱毒菌株的生长特性观察: 1989年; 为掌握78_((75))弱毒菌株的生长特性,以便鉴别贴GC_(42)、G_4T_((10))及C_(43-5)菌株的区别点,特在相同条件下,观察了各菌株在明胶穿刺、明胶平板、马丁琼脂平板上的生长特性,各类生化反应及血清型别。; 陈祝三蒲正矞陈廷和王东武志兰; 关键词：丹毒

奶牛乳腺上皮细胞中bta-miR-29b实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：1: 2021年; 为了检测金黄色葡萄球菌(S.aureus)感染的奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)中bta-miR-29b表达,本研究建立bta-miR-29b实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估,利用该方法检测金黄色葡萄球菌感染bMECs中bta-miR-29b的表达水平。结果显示,构建的RT-qPCR方法在bta-miR-29b标准品10 pg/20μL~1×10^(-4)pg/20μL浓度范围内,初始模板量和Ct值之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R^(2)=0.9997。特异性试验结果显示,对bta-miR-29b标准品样本检测结果为阳性,对牛大肠杆菌和链球菌样本检测结果均为阴性,说明该方法特异性强;敏感性试验结果显示,对bta-miR-29b标准品的最低检测模板浓度为1×10^(-4)pg/20μL,比常规PCR检测的敏感性高100倍,表明该方法敏感性高;重复性试验结果显示,组内和组间的变异系数均小于1%,说明该方法重复性好。临床样本的检测结果显示,金黄色葡萄球菌感染bMECs后第24小时bta-miR-29b的表达量极显著下调(P<0.01)。上述结果表明,本研究建立的RT-qPCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,能够准确检测金黄色葡萄球菌感染bMECs中bta-miR-29b的表达,为今后bta-miR-29b的表达分析及其生物学功能的研究提供了研究手段。; 潘晓乐扈登强穆爱娟马继贤周学章韩博王东; 关键词：实时荧光定量PCR 金黄色葡萄球菌奶牛乳腺上皮细胞

产气荚膜梭菌毒素β1的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：2: 2022年; 目的原核表达产气荚膜梭菌毒素β1(Clostridium perfringens Beta1 toxin,CPB1),建立该毒素抗体的间接ELISA检测方法。方法利用基因工程技术获得cpb1基因,克隆至载体pET32a,构建重组质粒pET32α-cpb1,转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白CPB1。以重组蛋白CPB1作为包被抗原,HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗,建立CPB1抗体的间接ELISA检测法。并以CPB1的单克隆抗体McAb 1K19为一抗,优化包被蛋白的包被浓度、一抗稀释度、封闭时间及二抗稀释度,确定方法的临界值,验证方法的特异性、精密性、灵敏性。采用建立的方法检测201份正常牛血清样品及阴性、阳性小鼠血清样品。结果表达的重组蛋白CPB1相对分子质量约为54000(CPB1蛋白与硫氧化还原蛋白的融合蛋白),主要以包涵体形式表达。包被蛋白最佳浓度为10μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶16384,最佳封闭时间为120 min,二抗最佳稀释度为1∶1000。除B和C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.p.)外,其他常见食源性致病菌A_(450)均低于0.3;批内及批间精密性CV均<10%;当McAb 1K19稀释度为1∶32768,即浓度为0.002μg/μL时,A_(450)为0.2235,P/N为10.2。201份正常牛血清及阴性小鼠血清均为阴性,阳性小鼠血清为阳性,检测符合率为100%。结论制备的重组蛋白CPB1可用于建立CPB1抗体的间接ELISA检测法,建立的方法具有良好的精密性及较高的灵敏性,可用于大量临床样品的检测。; 马玲玲马红梅吴霜王东王东马臣杰李勇; 关键词：基因重组原核表达间接ELISA法

细胞快速、简易冻存法: 1996年; 将PK-15和ST细胞通过普通冰箱冷藏室(4℃)15分钟;普通冰箱冷冻室(-4℃)5分钟;低温冰箱(-20℃)20分钟;气态液氮30分钟后沉入液氮中,经一段时间后复苏,冻存细胞状态良好,全部冻存过程在70分钟内完成,比常规冻存方法节省时间,简便易行。; 王东谢琴何存利陈祝三余桂芳; 关键词：动物细胞培养

鸡减蛋综合征与传染性支气管炎二联油佐剂灭活苗的田间免疫试验: 2002年; 王东张文义卢汉礼张皓弘杨汉春; 关键词：减蛋综合征传染性支气管炎二联疫苗油佐剂灭活苗田间免疫试验

4种细胞冻存法的比较被引量：3: 1997年; ４种细胞冻存法的比较王东谢琴何存利陈祝三余桂芳（宁夏农林科学院畜牧兽医研究所银川７５０００２）在组织培养中，经常需要冻存细胞。一般采用液氮低温保存细胞，遵循的原则是缓慢冷冻和快速融解。我们在进行猪细小病毒单克隆抗体技术研究中，曾应用小鼠骨髓瘤细胞的冻...; 王东谢琴何存利陈祝三余桂芳; 关键词：病原细菌

产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR特异性引物设计和方法验证: 2024年; 目的建立针对水样中产气荚膜梭菌检测的TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,并测试该方法在自来水样中的检测效果。方法选择位于该菌拟核中高度保守的plc基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化后建立了针对该菌的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,结合滤膜法处理含有plc基因的标准菌株的模拟污染水样,并对所建立的方法进行测试。结果所建立的产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有高度的特异性,13株食源性致病菌、3株艰难梭菌及1株腐败梭菌的Ct值大于40;该方法的最低检出限为1×10 copies/μL,具有较高的灵敏性;对模拟污染水样的最低检测限为1.0×10^(2)CFU/mL。应用该方法对4份人工模拟污染阳性水样与90份自来水样进行检测发现,2份1.0×10^(2)CFU/mL的模拟污染水样可检出产气荚膜梭菌,2份1.0×10 CFU/mL的模拟污染水样与90份自来水样均未检出产气荚膜梭菌。结论所建立的产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有特异性好、灵敏性高的优点,对水体中产气荚膜梭菌的检测具有较高的应用价值。; 马嘉琦孙波孙波王东赵志军王东曾瑾; 关键词：产气荚膜梭菌实时荧光定量PCR 食源性致病菌

猪丹毒78_((75))弱毒菌株的研究——78_((75))弱毒菌株的毒力和安全性试验: 1989年; 通过试验,筛选的78(75)弱毒菌株,对小白鼠、猪作了安全性试验,对鸽作了毒力测定,其结果令人满意。材料与方法 (一)菌种与菌苗菌种为78(75)弱毒菌株;菌苗为78(75)弱毒冻干苗。批号:788605、788606、788607、788608、788609(内蒙古兽医生药厂生产),788701、788702(湖南兽医生药厂生产)。 (二)试验动物健康猪为3～4月龄,宁黑与杜洛克或内江杂种,试前经猪丹毒血清培养凝集试验阴性者,来源于青铜峡市和中卫县养猪户;小白鼠、家鸽来源与要求同前。 (三)稀释液氢氧化铝稀释液,批号为8503002,南京药械厂;氯化钠注射液,批号791013,宁夏制药厂。; 陈祝三蒲正矞陈廷和王东武志兰; 关键词：丹毒毒力安全性

抗猪细小病毒单克隆抗体在猪细小病毒病诊断上的应用被引量：4: 1996年; 用淋巴细胞杂交瘤技术,研制出的抗猪细小病毒单克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对本地区所采得的308份猪血清进行检测,阳性检出率达66.6%。其中20～35日龄仔猪阳性检出率在80%以上;45日龄仔猪阳性检出率为75.5%;屠宰猪阳性检出率55.2%。选择70份被检血清用已建立的检测猪细小病毒抗体的 ELISA 试验与传统的 HI 试验进行比较,其敏感性较高,ELISA 检出阳性率为85.7%,HI 检出阳性率为80%,前者较 HI 试验高出5.7个百分点。; 谢琴王东何存利陈祝三余桂芳; 关键词：单克隆抗体细小病毒病猪病

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