毛斌
- 作品数：12 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院输血研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划四川省软科学研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胶原支架促进人类多能干细胞向红细胞的诱导分化被引量：2
- 2018年
- 目的建立人胚胎干细胞（hESCs）来源的造血干/组细胞向红细胞分化的体外3D培养方法。方法hESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾区（AGM-S3）基质细胞共培养14 d后获得CD34^＋CD45^＋造血干/祖细胞,对获得的CD34^＋CD45^＋细胞扩增5 d后,以相同初始接种数量分别接种于胶原水凝胶、透明质酸水凝胶、Ⅰ型胶原蛋白构建的三维（3D）支架材料（简称胶原支架）中,在体外模拟骨髓微环境,做红细胞定向分化,以普通液体悬浮培养（简称液体培养）为对照,通过MGG染色、流式细胞术、免疫染色、qRT-PCR等手段分别对收获的细胞做形态学、红系特异性表面标志表达情况、红系细胞成熟程度以及红系细胞发育过程中相关基因的表达情况分析。结果红系定向分化14 d后,胶原支架中收获的总细胞数量分别是液体培养、透明质酸水凝胶、胶原水凝胶的1.50、1.19、1.33倍,GPA^＋CD71^＋细胞数量分别是液体培养、透明质酸水凝胶、胶原水凝胶的1.55、1.25及1.48倍;GPA^＋CD36^＋细胞数量分别是液体培养、透明质酸水凝胶、胶原水凝胶的1.65、1.07、1.36倍。结论利用Ⅰ型胶原蛋白构建的3D支架材料可模拟骨髓微环境,促进红细胞分化。
- 王敏潘旭毛斌赖默温滕嘉雯陈谊金周琼秀马峰
- 关键词：红细胞胶原支架
- 人胚胎干细胞高效诱导产生巨噬细胞方法的建立被引量：5
- 2015年
- 目的利用人胚胎干细胞(h ESCs)建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,并与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较。方法通过将h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)来源的基质细胞共培养产生CD34+CD45+造血干祖细胞,在多种细胞因子的诱导下悬浮培养14 d,利用May-Grünwald Giemsa染色、流式表面抗原及功能检测等方法对我们培养的巨噬细胞和人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较鉴定。结果该方法可产生大量高纯度的巨噬细胞,成功的建立了体外高效诱导的巨噬细胞分化体系,并且该体系获得的巨噬细胞与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞具有相似的表型和功能。结论建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,为进一步研究人类巨噬细胞的早期发育和建立相关疾病模型提供了可靠的方法。
- 郁金凤孙文翠路旭琳边国慧潘旭毛斌黄淑赖默温周涯邹庆李晴曾宪波李玉佳陈利民周家喜马峰
- 关键词：巨噬细胞诱导分化
- 拟胚体培养体系中造血表面标志的变化及其向红细胞分化潜能的研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨拟胚体(EB)造血相关表面标志物的变化及其向红细胞定向诱导分化的潜能。方法利用悬浮培养体系使人胚胎干细胞(h ESCs)形成三维囊状结构(EB),通过添加细胞因子BMP-4、SCF和FL使EB向造血前体细胞分化,通过流式细胞术(FACs)检测细胞发育各个阶段内皮及血细胞表面分子的变化情况以判断细胞的不同发育阶段。采用胰酶消化处理的方式将EB消化为单个细胞并向红细胞诱导分化,在诱导的d7、d14、d21取样,流式检测分析红细胞的成熟程度。结果在EB培养体系中,d6即可检测到造血前体细胞表面标志物CD34和CD31,且在EB培养的d6-d21,CD34+CD31+细胞的比例逐渐升高,到d15达到顶峰(8.86%)。在红细胞定向分化过程中,红细胞的纯度达73.22%,免疫荧光染色显示:ε亚基的阳性率为88%(424/482),γ亚基的阳性率为94%(326/347),而β亚基的阳性率为0%(0/167)。结论建立了1种EB悬浮培养体系和体外诱导红细胞的方法;EB的造血相关表面标志物的表达呈现时序性变化,且由EB分化而来的红细胞具有早期胚胎红细胞的发育特点。
- 路旭琳郁金凤孙文翠毛斌邹庆潘旭赖默温周涯李晴曾宪波黄淑周琼秀周家喜马峰
- 关键词：红细胞
- 胚胎型与成体型红细胞表型分子的差异研究
- 2012年
- 目的通过研究、比较脐血CD34+和人类胚胎干细胞(hESCs)体外分化产生红细胞的表型分子特征表达谱系和发育顺序,建立胚胎型(primitive)及成体型(definitive)红细胞的判别标准,为研究红细胞的发育成熟及相关疾病模型的建立提供实验基础。方法磁珠分选出脐血CD34+细胞,在无血清条件下向红细胞诱导分化,每3d取样流式检测,代表成体型红细胞发育谱系。将hESCs体外向红细胞分化,先与基质细胞共培养产生造血干/祖细胞,再使用红细胞分化培养液悬浮培养,将造血干祖细胞向红细胞定向分化。这个过程包含了胚胎型和成体型红细胞发育的2种过程。
- 毛斌黄淑马峰
- 关键词：细胞定向分化细胞诱导分化人类胚胎干细胞磁珠分选胚胎型
- 人胚胎干细胞来源红系细胞膜蛋白表达的研究
- 2017年
- 目的探讨人胚胎干细胞(h ESCs)来源红系细胞在发育过程中其膜蛋白,包括膜表型分子、膜骨架蛋白和跨膜蛋白的表达情况。方法 h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM-S3)基质细胞共培养产生造血干祖细胞(CD34+CD45+)和GPA+细胞,挑取共培养12 d的细胞,同时磁珠分选人脐血中的CD34^+细胞,在多种特定细胞因子SCF、IL-6、IL-3、FLT3-L、TPO、EPO等诱导下,分别进行集落培养12-14 d产生红系爆发式集落形成单位(BFU-E),运用流式细胞术(FACs)、qRT-PCR和免疫荧光染色等方法检测并比较hESCs和人脐血CD34^+细胞2种来源的红系细胞膜蛋白的表达情况,并以后者作为对照组。结果 hESCs来源BFU-E的膜蛋白的表达趋势与对照组相近:其膜骨架蛋白和跨膜蛋白的基因,如SPTA、SPTB、ANK1、EPB41等基因转录水平都在逐渐增强,而一些膜蛋白如黏附分子CD49d、CD29、CD71等的表达逐渐降低,CD47基本不表达;带3蛋白(Band 3)表达量较高且与成体型血红蛋白β-globin的表达呈正相关。结论在hESCs向红系诱导生成过程中,一些膜表型分子表达在逐渐降低,而膜蛋白表达逐渐增强。
- 李晴邹庆毛斌黄淑赖默温潘旭孙文翠陈谊金刘嘉馨马峰
- 关键词：人胚胎干细胞红系细胞带3蛋白
- 人胚胎干细胞向嗜酸性粒细胞高效定向诱导分化模型的建立被引量：1
- 2015年
- 目的建立从人胚胎干细胞向成熟嗜酸性粒细胞定向诱导分化的高效体外培养模型。方法采用人胚胎干细胞与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)基质细胞共培养的方法,进行早期造血干细胞诱导分化,将诱导分化的造血干细胞进行悬浮培养,在含有血清的培养基中,分阶段添加不同细胞因子组合进行成熟嗜酸性粒细胞的定向分化和增殖。结果获得从CD34+CD45+细胞扩增了约651倍,且纯度高达95%以上,CD88+Siglec-8+EPO+的成熟嗜酸性粒细胞。结论本研究建立了1种人胚胎干细胞高效定向分化为成熟嗜酸性粒细胞的模型,为进一步深入研究嗜酸性粒细胞的早期发育调控和相关疾病的发生机制奠定了基础。
- 潘旭杨文钰孙文翠毛斌郁金凤路旭琳黄淑赖默温周涯邹庆李晴曾宪波周家喜马峰
- 关键词：人胚胎干细胞嗜酸性粒细胞定向诱导分化
- 透明质酸水凝胶三维培养促进人胚胎干细胞向红系细胞诱导分化被引量：1
- 2017年
- 目的探讨采用透明质酸材料的三维培养方法将人胚胎干细胞(h ESCs)来源造血干/祖细胞向红系细胞诱导分化的效果。方法将hESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾基质细胞(AGM-S3)共培养(37℃、5%CO_2)12 d的细胞(1.0×10~6)分别种植进海藻酸钠水凝胶、胶原蛋白水凝胶、透明质酸水凝胶内,并以悬浮法培养h ESCs作对照。以流式细胞仪检测细胞表面抗原表达,比较不同材料建立的三维培养的优劣,优化红系诱导分化的三维培养体系。结果海藻酸钠组内细胞培养10 d的GPA^+细胞为2.3%,GPA^+CD36+细胞仅为0.9%而悬浮培养分别为15.8%和6.1%。胶原蛋白组内细胞培养10 d的GPA^+细胞为11.1%,GPA^+CD36+细胞为5.2%,而悬浮培养分别为35.7%和27.7%。透明质酸组内红系细胞GPA^+细胞量和比率分别为2.06×105个和19.6%,而悬浮培养的红系细胞GPA^+细胞量和比率分别为1.62×10~5个和15.7%,透明质酸组是悬浮培养的1.27倍,其中悬浮培养GPA^+CD36-为9.7%,而透明质酸水凝胶为GPA^+CD36-为13.1%。结论与悬浮培养相比,海藻酸钠水凝胶和胶原蛋白水凝胶未表现出明显的扩增红系细胞的效果。透明质酸凝胶建立的三维培养方法利于红系细胞生长,该培养方法诱导分化hESCs得到的红系细胞成熟度提高。
- 曾宪波毛斌赖默温潘旭孙文翠周琼秀马峰
- 关键词：人胚胎干细胞红系祖细胞分化
- 人类多潜能干细胞体外分化红细胞发育过程中表型分子的研究
- 目的:人类多潜能干细胞（human pluripotent stem cells，hPSCs）主要包括人胚胎干细胞(human embryonic stem cells，hESCs)和人诱导性多潜能干细胞(humanin...
- 毛斌
- 关键词：红细胞体外分化
- 铁路工程项目的管理、评价与决策
- 毛斌
- 关键词：铁路工程项目层次分析法AHP
- 胚胎型与成体型红细胞表型分子的差异研究
- 毛斌黄淑马峰
- 文献传递
