刘嘉
- 作品数：18 被引量：25H指数：3
- 供职机构：华侨大学更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：化学工程生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 重组粘质沙雷氏菌几丁质酶C的纯化及酶学性质被引量：1
- 2010年
- 为从已构建的重组大肠杆菌pET-22b-chiC获得高纯的几丁质酶C,通过降低培养温度,提高粘质沙雷氏菌几丁质酶C的可溶性表达.表达产物经镍柱亲和层析(IMAC)和Phenyl-Sepharose疏水层析(HIC)分离纯化后,得到电泳纯的几丁质酶.酶学性质研究表明,纯化的几丁质酶C为单体蛋白,相对分子质量为51.8ku;最适pH值为5.0,最适温度为55℃,在55℃的条件下保温4 h后仍有90%以上的酶活力.研究结果还表明,Cu2+,Hg2+,Co2+,Mg2+对酶活力均有明显抑制作用,而Fe2+,Zn2+,Sn2+,Ba2+对酶活力有一定促进作用,Mn2+对酶活力明显促进作用.
- 刘嘉贺淹才施腾鑫李梓君王珍珠
- 关键词：粘质沙雷氏菌分离纯化酶学性质
- 治疗用质粒DNACTAB纯化工艺的优化被引量：2
- 2013年
- 目的优化治疗用质粒DNA十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)纯化工艺,为其规模化生产奠定基础。方法采用碱裂解法裂解含质粒pEGFP的大肠埃希菌(E.coli)DH5α菌种,在碱裂解液中加入不同终浓度的CTAB及不同终浓度的NaCl、KAc、LiCl、CaCl2、MgCl2溶液,确定CTAB纯化质粒DNA的最佳浓度,并分析盐对质粒DNA选择性释放的影响。分别采用BCA蛋白浓度测定试剂盒、内毒素检测试剂盒和Real time-PCR法检测纯化的质粒DNA中宿主蛋白含量、内毒素含量和细菌基因组DNA含量;通过A549细胞及动物转染试验检测纯化质粒DNA的体外和体内生物活性。结果 CTAB纯化质粒DNA的最佳浓度为0.004%;用NaCl、KAc或LiCl提取的质粒DNA中,RNA均未完全去除,而用CaCl2或MgCl2提取的质粒DNA中,RNA含量(RNA/nucleic acid)均小于1%,CaCl2最佳终浓度范围为0.4～0.5 mol/L,MgCl2最佳浓度范围为0.3～0.4 mol/L;使用0.4 mol/L MgCl2的CTAB法纯化的质粒pEGFP的杂蛋白质、细菌基因组DNA、内毒素和RNA含量均符合FDA对治疗用质粒DNA的要求;纯化的质粒pEGFP DNA回收率达80%以上,且体外生物活性显著高于市售试剂盒纯化的质粒(P<0.05),而体内生物活性与试剂盒纯化的质粒相当(P>0.05)。结论优化了CTAB法纯化质粒DNA的工艺,该方法操作简便,经济高效,纯化得到的质粒DNA各项指标均符合FDA质量标准,且转染基因表达效率较高,质量可靠,适用于质粒DNA的大规模纯化生产。
- 陈婷刘嘉王晓刁勇
- 关键词：十六烷基三甲基溴化铵质粒纯化基因治疗
- 一种废弃物固液分离装置
- 本发明公开一种废弃物固液分离装置，包括贮液池、压滤坑、托架、过滤网袋、吊带和平板，贮液池设置在地下并与压滤坑连通，压滤坑的底面与地面呈约20度的角度，使得压滤坑内的液体能流入贮液池内。操作时先将过滤网袋与吊带及托架三者连...
- 贺淹才刘嘉
- 文献传递
- 一种两段式连续流厌氧发酵的塑料罩沼气窖
- 本发明公开了一种两段式连续流厌氧发酵的塑料罩沼气窖，其特征在于：包括进料间、一级窖、二级窖、出料间、一级塑料罩、二级塑料罩和隔离门；所述一级塑料罩封闭所述一级窖的顶部，所述二级塑料罩封闭所述二级窖的顶部；所述进料间的顶部...
- 贺淹才刘嘉
- 文献传递
- 采用易错PCR对粘质沙雷氏菌几丁质酶C进行定向进化被引量：8
- 2010年
- 以重组E.coliBL21(DE3)pLysS/pET22b-Chi C为亲本,采用易错聚合酶链反应(PCR)技术,对粘质沙雷氏菌几丁质酶C基因(Chi C)进行定向进化研究.经过两轮易错PCR后,建立突变体文库,进行平板初筛、包涵体复性及酶活检测复筛,获得一酶活较高的突变酶(Mut-Chi C),其催化活性为亲本重组酶的1.9倍,比活力为出发菌酶活的3.3倍.对突变酶的酶学性质进行初步研究,其最适pH值为5.0,最适温度为60℃,而出发菌该酶的最适温度为40℃.进化酶基因经DNA测序并通过软件与亲本型酶基因进行分析比对,表明突变酶Mut-Chi C基因发生点突变,使4处氨基酸被取代,且均为有义突变.
- 刘治江贺淹才李红然刘嘉施腾鑫
- 关键词：粘质沙雷氏菌分子定向进化包涵体
- 黏质沙雷氏菌产几丁质酶二步发酵工艺的优化
- 2009年
- 采用二步发酵法对…株黏质沙雷氏菌（Serratia marcescens）的产几丁质酶发酵条件进行研究，以期在已优化的一步发酵的基础上酶活力得到进一步提高。在二步发酵产酶的过程中，通过单因素法优化得到二步发酵培养基的最适碳源、氮源浓度和菌龄，同时选取发酵时间、初始pH、接种菌体量和装液量4个因子进行正交试验。最终得到的最优条件为：胶体几丁质0．8％，酵母粉1．0％，菌龄12h，发酵时间72h，初始pH8．5，菌体干重90mg，装液量20mL。在此条件下，酶活力可达1．021U·mL^-1。在二步发酵工艺中另添加0．1％纤维素，酶活力可提高至1．128U／mL，比一步发酵提高了1．27倍。
- 贺淹才施腾鑫刘嘉舒静波周娟
- 关键词：几丁质酶二步发酵法发酵时间发酵培养基
- 氧化应激促进重组腺相关病毒2型体外转导分析被引量：2
- 2022年
- 为揭示氧化应激在重组腺相关病毒2型(rAAV2)转导中的作用,以过氧化氢(H_(2)O_(2))和铁过载(Fe-NTA)氧化应激为模型,在293T,LO-2,Hela,A549细胞中,从转基因表达量、阳性细胞数、基因组数和病毒衣壳分布等方面研究氧化应激对rAAV2转导的影响.实验结果表明:H_(2)O_(2)和Fe-NTA能促进rAAV2转导,转基因表达量、阳性细胞数、基因组数与对照组相比的差异具有显著的统计学意义;细胞转导12 h后,氧化应激组核周围衣壳分布数目显著比对照组多,氧化应激能够促使rAAV2长时间聚集在细胞核周围;当氧化应激产生的活性氧(ROS)被N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)消除,则氧化应激促rAAV2转导作用消失,说明氧化应激通过ROS发挥促进rAAV2转导作用.
- 王晓黄晓平黎玲刘嘉刁勇
- 关键词：活性氧转导氧化应激
- 重组基因工程菌几丁质酶C的可溶性表达研究
- 2013年
- 在不同培养温度条件下对产几丁质酶C的基因工程菌BL21(DE3)进行诱导,使其表达可溶性蛋白。随后在较佳培养温度诱导条件的基础上向培养基中添加不同浓度的甘油,甘氨酸,山梨醇/甜菜碱等成分来更进一步的提高几丁质酶C的可溶性表达。其结果是在25℃诱导条件下,以添加2 g/L葡萄糖的LB培养基作为基础培养基进行培养,在基础培养基中添加3 g/L甘油的总酶活最高,达到了18.17 U/mL,较之仅含2 g/L葡萄糖的LB培养基在37℃及25℃诱导培养条件下酶活力分别提高了41.6%和20.3%;添加0.3%甘氨酸约90%的可溶性几丁质酶表达到了胞外,胞外酶活达到14.68 U/mL;添加0.5 M山梨醇/2.5 mM甜菜碱工程菌胞内酶活达到最高,为8.43 U/mL。结果表明适当降低工程菌诱导表达时的培养温度提高了几丁质酶C的可溶性表达,在较佳温诱导表达的基础上向培养基中添加不同浓度的甘油,甘氨酸,山梨醇/甜菜碱更进一步的提高了几丁质酶C的可溶性表达。
- 刘嘉黄芳施腾鑫贺淹才
- 关键词：可溶性表达
- 一种废弃物固液分离装置
- 本发明公开一种废弃物固液分离装置，包括贮液池、压滤坑、托架、过滤网袋、吊带和平板，贮液池设置在地下并与压滤坑连通，压滤坑的底面与地面呈约20度的角度，使得压滤坑内的液体能流入贮液池内。操作时先将过滤网袋与吊带及托架三者连...
- 贺淹才刘嘉
- 文献传递
- 一种两段式连续流厌氧发酵的塑料罩沼气窖
- 本发明公开了一种两段式连续流厌氧发酵的塑料罩沼气窖，其特征在于：包括进料间、一级窖、二级窖、出料间、一级塑料罩、二级塑料罩和隔离门；所述一级塑料罩封闭所述一级窖的顶部，所述二级塑料罩封闭所述二级窖的顶部；所述进料间的顶部...
- 贺淹才刘嘉
- 文献传递
