高建恩
- 作品数：34 被引量：87H指数：5
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 烯脂酰辅酶A水解酶单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:制备小鼠抗人烯脂酰辅酶A水解酶(enoyl CoA hydratase,ECHS1)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA、Western blot、免疫沉淀、免疫组化和间接免疫荧光等方法对mAb进行特异性鉴定,通过Uni-ZAP XR正常成人肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原。结果:获得1株可稳定分泌抗人ECHS1 mAb的杂交瘤细胞株BGB095。该mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),可用于ELISA检测、Western blot、免疫沉淀、免疫组化等实验。结论:成功制备了抗人ECHS1的mAb,为代谢疾病和肿瘤的研究提供了有力的工具。
- 刘蓉鞠艳芳杨金菊杜雪梅陈勇刘莹高建恩孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体线粒体
- 抗PLA2G13多克隆和单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:制备分泌型的磷脂酶A2 G13(group XIII se-cretedphos pholipaseA2,PLA2G13)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对抗体进行特性鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-PLA2G13(即PLA2G13-GST)和pET-32a-PLA2G13(即PLA2G13-His)。PLA2G13-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb和鼠mAb。采用Western blot鉴定兔抗人PLA2G13 pAb的特异性。采用Western blot和Immunohistochemistry鉴定鼠抗人PLA2G13 mAb的特异性。结果:PLA2G13-GST和PLA2G13-His融合蛋白在均大肠杆菌中以包涵体形式大量表达。Western blot鉴定表明,兔抗人PLA2G13 pAb可特异地识别HepG2细胞系中相对分子质量(Mr)约19700的蛋白,与文献报道中PLA2G13的实际Mr相符。通过筛选共获得8株可稳定分泌抗PLA2G13的杂交瘤细胞株,Western blot鉴定表明6株可识别重组人PLA2G13蛋白,免疫组织化学鉴定显示2株可特异性识别正常肝组织中的PLA2G13蛋白。结论:成功地制备了抗人PLA2G13兔pAb和鼠mAb,为进一步研究PLA2G13的功能提供了特异性检测工具。
- 李淑珍刘莹陈苗柳晓兰唐小波高建恩朱大岭孙启鸿
- 关键词：原核表达融合蛋白抗体制备
- 应用单克隆抗体鉴定人类肝脏线粒体蛋白质组中的抗原优势蛋白
- 2010年
- 对线粒体蛋白质组的鉴定和分析有助于理解线粒体的功能和相关疾病的发病机制,包括能量代谢、凋亡、自由基产生、产热作用、钙离子信号通路等.本实验旨在鉴定人类肝脏线粒体蛋白质组中的抗原优势蛋白.用线粒体蛋白质作为免疫原,经过细胞融合、筛选和克隆,制备了240多个单克隆抗体杂交瘤细胞系.单克隆抗体识别的线粒体蛋白抗原通过人类肝脏cDNA表达文库筛选方法鉴定,相应的线粒体蛋白质的亚细胞定位通过免疫组化证实.发现了肝脏线粒体中6个抗原优势蛋白,分别被至少两种特异性的单克隆抗体所识别.这6个蛋白分别是乙酰辅酶A酰基转移酶(线粒体3-酮酯酰辅酶A硫解酶)2、醛脱氢酶1家族A1、氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺S乙酰转移酶(丙酮酸脱氢酶复合物的E2组分)、烯酰辅酶A水合酶1和羟基类固醇(11β)脱氢酶1.这些单克隆抗体有望应用于人类肝脏蛋白质组计划的相关研究,如去除优势蛋白、蛋白与蛋白之间相互作用的研究和验证等.
- 鞠艳芳杨金菊刘蓉柳晓兰杜雪梅刘莉陈志成迟俊刘淑娥高媛高建恩贺福初孙启鸿
- 关键词：线粒体单克隆抗体肝脏
- 抗尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2007年
- 本研究制备抗人尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2(UDP-glucose pyrophosphorylase2)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。将正常成人肝组织匀浆离心并分离肝脏胞浆总蛋白,用肝脏胞浆总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,通过间接ELISA法、Western blot及免疫组织化学的方法对单克隆抗体进行特性鉴定,通过Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗体特异性。结果表明:通过间接ELISA筛选获得1株可稳定分泌抗人UGP2mAb的杂交瘤细胞系BAD062,其分泌的单克隆抗体的Ig亚类(型)为IgG2b(κ),Western blot结果显示该抗体可以特异地识别分子量为56kD的蛋白;应用单克隆抗体BAD062对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAPXR)进行筛选,阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为UGP2。结论:单克隆抗体BAD062特异地识别抗原UGP2,该抗体可用于ELISA检测、Western blot、免疫组织化学实验,为UGP2的研究提供了有力的工具。
- 王婉高媛杨金菊柳晓兰鞠艳芳刘莉陈志成刘蓉迟俊邢维贤高建恩安立国孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体CDNA表达文库
- 抗二羰基/L-木酮糖还原酶单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的制备抗人二羰基/L-木酮糖还原酶(Dicarbon-yl/L-xylulosereductase,DCXR)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Westernblot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAPXR表达文库筛选鉴定抗原。结果获得1株可稳定分泌抗人DCXRmAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),该mAb可用于ELISA检测、Westernblot、免疫组化和免疫沉淀实验。结论成功制备了抗人DCXR的mAb,为DCXR的研究提供了有力的工具。
- 鞠艳芳杨金菊刘蓉高媛柳晓兰高建恩孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体
- 切胶免疫制备腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体被引量：13
- 2007年
- 目的通过切胶免疫制备人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,为下一步腮腺液高丰度蛋白单克隆抗体制备提供抗原解决方案。方法将腮腺液经超滤法浓缩蛋白后,进行SDS-PAGE分析,切取分子量约为50-65kDa的高丰度蛋白条带,研磨后注射新西兰大耳白兔诱导产生免疫应答并制备兔抗人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,并应用蛋白免疫印记(Westernblot)等方法进行抗体鉴定。结果成功制备和鉴定了人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体。结论成功制备和鉴定了人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,为下一步腮腺液高丰度蛋白单克隆抗体制备及唾液蛋白质组学研究奠定基础。
- 姜静孙其飞陈勇高媛柳晓兰高建恩朱红孙启鸿王松灵
- 关键词：腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体唾液
- 血红蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定
- 2007年
- 本研究目的是制备鼠抗人血红蛋白A2(HBA2)单克隆抗体(McAb)并进行初步鉴定。将正常人胎肝组织匀浆离心并分离出人胎肝核总蛋白,用人胎肝核总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组织化学的方法对单克隆抗体进行特异性鉴定,通过免疫沉淀和Uni-ZAPXR表达文库筛选鉴定抗原。结果表明:通过间接ELISA筛选获得分泌AEE091抗体的杂交瘤细胞1株,其分泌的单克隆抗体Ig亚类(型)为IgG1(κ);Western blot结果显示,该抗体识别分子量为15kD的蛋白;Western blot识别AEE091免疫沉淀获得的分子量为15kD的抗原;同时应用单克隆抗体AEE091对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAPXR)进行筛选,筛选所获得的阳性噬菌斑测序结果显示两个阳性克隆插入序列均为HBA2。结论:经筛选获得了分泌AEE091抗体的杂交瘤细胞株。AEE091抗体能特异识别HBA2抗原,因而其在HBA2的功能研究和珠蛋白生成障碍性贫血筛查等方面具有应用价值。
- 陈志成杨金菊刘蓉曲海霞王婉刘莉柳晓兰陈勇刘莹高建恩孙启鸿
- 关键词：血红蛋白A2单克隆抗体CDNA表达文库地中海贫血
- 单克隆抗体识别PDC-E2表位的鉴定
- ＜正＞目的原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis,PBC）是一种慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病,好发于中年女性。肝硬化是PBC的晚期结果。近年来国外及我国对本病的报道均有上升趋势。迄今为止本...
- 刘莉高媛鞠艳芳杨金菊何湘吴琼李戬宋颖博陈勇杜雪梅徐菡柳晓兰高建恩孙启鸿
- 文献传递
- 兔抗人CXCR3-B分子N端多肽多克隆抗体的制备与初步应用被引量：7
- 2006年
- 目的： 获得兔抗人CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽的多克隆抗体, 并对多克隆抗体进行初步鉴定和应用.方法： 应用Fmoc法化学合成CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的CXCR3-B分子的多肽与KLH交联;皮下注射抗原免疫日本大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫印迹、免疫组化等初步鉴定和应用.结果： 分别化学合成CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽, 纯化后多肽纯度分别为98%、 88.54%及80%, 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价分别为1∶ 32 000（0.1 mg/L）, 1∶ 4 000（3 mg/L）和1∶ 1 000（10 mg/L）.3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中相对分子质量（Mr）约为50的CXCR3-B分子, 相应抗原定位于3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中的血管内皮细胞.结论： 所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、免疫印迹和免疫组化等实验, 为确定CXCR3-B分子的组织及细胞分布和定位、寻找CXCR3-B相互作用的分子提供了有力的工具.
- 高媛杨金菊柳晓兰刘莉刘超燕Gian P.Visentin高建恩孙启鸿
- 关键词：多克隆抗体多肽抗原
- 兔抗人PON2抗体的制备与初步应用被引量：5
- 2008年
- 目的:制备兔抗人PON2(paraoxonase-2)的多克隆抗体并进行初步鉴定。方法:生物信息学方法分析人PON2蛋白序列,选取人兔同源性较低,亲水性及免疫原性较强的片段,通过大肠杆菌原核表达系统进行重组表达,获得GST-PON2融合蛋白用于免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体,通过XX方法分离纯化得到的抗PON2多克隆抗体,用West-ernblot、间接免疫荧光对其进行特异性及灵敏度鉴定。结果:成功获得了高表达的相对分子质量(Mr)为46000的PON2重组融合蛋白;Westernblot鉴定结果显示此多克隆抗体可特异识别肝脏总蛋白、HeLa细胞及U937细胞中Mr为39000的天然PON2蛋白;间接免疫荧光结果显示此多克隆抗体所识别的蛋白定位于SY5Y细胞胞质中。结论:抗人PON2的多克隆抗体特异识别肝总蛋白、HeLa细胞及U937细胞中的天然蛋白,可用于PON2的研究及临床检测。
- 陈苗杨金菊李淑珍柳晓兰刘莹张林杰高建恩孙启鸿
- 关键词：多克隆抗体重组抗原
