董硕
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 四环素诱导可控表达细胞周期素B1单克隆的筛选被引量：2
- 2009年
- 目的筛选四环素诱导细胞周期素B1（CyclinB1）可控表达的293单克隆细胞株（tetracycline-regulated expression 293 cells，T-REx^TM-293）。方法从人胎肝cDNA文库中PCR带有酶切位点的CyclinB1基因全长，将其酶切后插入到pcDNA4／TO／myc-HisB载体中。然后用测序正确的质粒转染T-RExTM-293细胞，加杀稻瘟菌素（Blasticidin）和腐草霉素（Zeocirt）双药物筛选两周后，传96孔板，等单个细胞扩增出单克隆。然后用Western印迹和流式细胞仪检测CyclinB1的诱导表达情况。结果构建好的pcDNA4／TO／myc-HisB—CyclinB1载体，经鉴定序列正确。筛选出的单克隆细胞株，在未加四环素时没有外源性的CyclinB1表达，在加入四环素后，3h就有表达，随时间的增加，CyclinB1表达量也增加，48h最多。结论筛选出的T-REx^TM-293单克隆细胞株能可控表达CyclinB1。
- 何乐亚魏欣左学良田铭张永红于冬冬董硕陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：细胞周期素B1四环素单克隆
- TAT-N24穿膜融合多肽对前列腺癌细胞增殖的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察TAT-N24穿膜融合多肽抑制前列癌细胞增殖的作用。方法用纯化的TAT-N24穿膜融合多肽处理前列癌PC3细胞,采用流式细胞仪检测细胞周期进程的改变,BrdU掺入法检测其对细胞DNA合成的影响,Western blot法检测细胞内AKT蛋白的磷酸水平的变化。结果①细胞周期分布:空白组G0/G1期(56.9±6.1)%,S期(27.0±2.3)%,G2/M期(16.1±1.3)%;对照多肽组G0/G1期(57.9±4.8)%,S期(24.2±3.1)%,G2/M期(27.8±1.4)%;TAT-N24组G0/G1期(68.6±5.4)%(P<0.05),S期(19.4±1.5)%(P<0.05),G2/M期(12.3±1.4)%。②BrdU阳性细胞为空白组(37.9±3.2)%,对照多肽组(36.2±4.1)%,TAT-N24组(21.5±2.4)%(P<0.05);③AKT磷酸化水平组间差异无统计学意义。结论 TAT-N24穿膜融合多肽能有效阻滞前列腺癌PC3细胞的细胞周期进程,并抑制其DNA合成。TAT-N24穿膜融合多肽有望成为有效的治疗前列腺癌的分子靶向药物。
- 邓豫王桂华左学良董硕金源李维娜龚建平胡俊波
- 关键词：前列腺癌细胞分子靶向治疗
- 磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基p55PIK表达载体的构建及单克隆株的筛选被引量：2
- 2010年
- 目的构建表达载体pEGFP-N1-p55PIK,在人胚胎肾细胞株HEK293中筛选其稳定表达的细胞株。方法 PCR扩增p55PIK基因全长,经过Xho1和Xma1酶切、T4DNA连接酶连接、DH5α转化,酶切和测序鉴定以确定构建质粒正确。转染人胚胎肾细胞株HEK293,G418筛选稳定表达p55PIK的单克隆细胞株,应用Western blot方法检测p55PIK蛋白的表达。结果 pEGFP-N1-p55PIK质粒经PCR、酶切、测序鉴定正确,经过G418筛选后获得稳定细胞株,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白在HEK293细胞中的表达,Western blot检测结果显示稳定转染pEGFP-N1-p55PIK的细胞中p55PIK表达水平增高。结论正确构建表达载体pEGFP-N1-p55PIK,并在HEK293细胞中成功筛选出稳定表达p55PIK的细胞株,为进一步探讨p55PIK的功能提供了良好的工具。
- 左学良王桂华蔡娟邓豫董硕蔡少鑫李小兰陶德定胡俊波
- 关键词：磷脂酰肌醇3-激酶基因表达克隆细胞
- 高表达蛋白hSav1对人胚肾HEK293增殖能力的影响
- 2010年
- 目的 观察高表达人Salvadorl（hSav1）蛋白对人胚肾293（HEK293）细胞增殖的影响.方法 构建含有绿色荧光蛋白（GFP）的hSav1质粒GFP-N1-hSav1;将构建好的GFP-N1-hSav1质粒在脂质体Lipofectamine 2000的介导下转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察质粒转染效率;分别在转染后12、24、36、48 h通过噻唑蓝（MTT）比色法计算细胞增殖抑制率,抑制率=[（对照-空白）-（给药-空白）]/（对照-空白）×100%;转染后36 h加入5-溴-2＇-脱氧尿苷（BrdU）,通过其掺入比率来显示hSav1对细胞增殖的影响.结果 质粒GFP-N1-hSav1构建成功,转染效率为70%-80%左右,蛋白hSav1明显高表达;MTT结果显示转染质粒后12、24、36、48 h,高表达蛋白hSav1组的细胞增殖抑制率分别为2%、5%、15%、23%,而阴性对照分别为2%、3%、2%、2%;BrdU结果显示,在HEK293细胞中高表达蛋白hSav1后细胞增殖抑制率为（27.3±3.8）%,阴性对照组的细胞增殖抑制率为（12.9±5.3）%,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 在人胚肾HEK293中高表达蛋白hSav1可明显抑制细胞增殖能力.
- 李兆明董硕刘韦成蔡少鑫罗学来李小兰陶德定严群龚建平胡俊波
- 关键词：细胞增殖人胚肾细胞
- hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响
- 2009年
- 目的观察hSav1蛋白高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响，探讨hSav1在Mst1介导的细胞凋亡中的作用。方法构建蛋白hSav1的载体pCMV—HA—hSav1与蛋白Mst1的载体pcDNA／4TO—Flag-Mst1，共转染HeLa细胞。采用相应抗体做二者的免疫共沉淀，以证实蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用；应用细胞免疫荧光共定位，进一步证实二者之间的相互作用。在HeLa细胞中，分别单独或同时转染质粒pcDNA／4TO-Flag—Mst1和pCMV—HA—hSav1，转染36h后，加入凋亡诱导剂顺铂（50μmol／L）作用14h。应用磷脂结合蛋白碘化丙啶（Annexin V／PI）法检测细胞凋亡，观察蛋白hSav1高表达对Mst1介导的细胞凋亡的影响。结果载体pCMV-HA—hSav1与pcDNA／4TO—Flag-Mst1构建成功，测序结果表明无突变或缺失。免疫共沉淀结果显示，蛋白hSav1可以在Mst1抗体的免疫沉淀物中检测出来，蛋白Mst1可以在hSav1抗体的免疫沉淀物中检测出来。细胞免疫荧光的结果显示，二者的荧光在细胞内存在共定位，并可充分融合。HeLa细胞中，单独Mst1蛋白高表达组的细胞凋亡率为24．5％±2．4％，单独hSav1蛋白高表达组与对照组比较，无明显细胞凋亡。蛋白Mst1和hSav1高表达组的细胞凋亡率为39．3％±4．0％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论蛋白hSav1与Mst1在HeLa细胞内存在相互作用，蛋白hSav1高表达可明显促进由蛋白Mst1介导的细胞凋亡。
- 李兆明刘韦成董硕罗学来李小兰陶德定龚建平胡俊波
- 关键词：蛋白相互作用细胞凋亡HELA细胞
- 重组腺病毒p55PIK对肿瘤细胞成瘤性的影响
- 背景与目的:
磷脂酰肌醇-3-激酶/(Phosphoinositide 3-kinases,PI3K/)家族在机体内发挥着重要的调节作用,如细胞增殖、细胞死亡、细胞分化、细胞迁移等。除此以外,在某些肿瘤组织中可以...
- 董硕
- 关键词：腺病毒
- 文献传递
