苗莹
- 作品数：10 被引量：37H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科技人才计划项目上海市卫生局青年科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miR-143靶向抑制己糖激酶-2治疗乳腺癌的实验研究被引量：1
- 2014年
- 目的在乳腺癌细胞MDA-MB-231中验证miR-143靶向抑制己糖激酶-2(HK2)改变其能量代谢达到治疗作用,并探讨18F-氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG)和3'-脱氧-3'-18F-氟代胸苷(18F-FLT)在评估其疗效中的价值。方法实验分为三组,实验组转染miR-143模拟物(miR-143 mimic),阴性对照组转染无义序列小RNA,空白组不做任何处理。通过qRT-PCR和Western blot分别检测治疗前后HK2 mRNA和蛋白表达水平的改变,检测葡萄糖代谢和乳酸生成速率的变化,MTT法检测细胞增殖活性的变化,测定细胞对18F-FDG和18F-FLT摄取的动态变化,判断两种示踪剂在评估其疗效中的价值。结果实验组HK2 mRNA和蛋白的表达均降低;葡萄糖消耗和乳酸生成速率、细胞增殖活性较阴性对照组明显下降。18F-FDG与18F-FLT分别孵育细胞30、60、90和120 min后,摄取呈时间依赖性递增的趋势,并且各时间点的18F-FLT摄取率均低于18F-FDG。30 min时,实验组18F-FDG摄取率明显低于阴性对照组(21.81±2.75 vs.36.71±4.36),差异具有统计学意义(P<0.05),此时两组摄取18F-FLT无明显差异(12.03±1.53 vs.15.23±2.31,P>0.05)。60 min时,18F-FDG与18F-FLT在两组中的摄取率均出现统计学差异(P<0.05)。结论 miR-143能靶向抑制HK2改变其能量代谢达到治疗作用,18F-FDG在评估其疗效中具有更好的价值。
- 苗莹张凌飞梁胜石朔刘默芳李彪
- 关键词：乳腺癌18F-FDG18F-FLT
- 荧光标记的低pH插入肽靶向乳腺癌酸性微环境的显像研究被引量：2
- 2019年
- 目的利用荧光标记低pH插入肽(pHLIP)显像,分析其在体外不同pH环境下与乳腺癌细胞膜的亲和力及其在乳腺癌荷瘤裸鼠体内的动态分布特征。方法通过红色荧光染料罗丹明B及近红外荧光染料青色素5(Cy5)分别标记pHLIP羟基端(B-pHLIP和Cy5-pHLIP),进行体外和体内荧光显像。分析在体外不同pH值(7.8、7.4、7.0和6.6)环境下B-pHLIP与MDA-MB-231乳腺癌细胞膜结合的荧光强度及其对细胞活性的影响。体内观测Cy5-pHLIP在肿瘤及各组织脏器不同时间点(2 h、24 h、3 d和7 d)的动态荧光分布、荧光强度变化及肿瘤/本底比值(T/NT),并进行离体组织的荧光显像。采用单因素方差分析和最小显著差异t检验分析数据。结果pH值6.6、7.0、7.4和7.8时B-pHLIP在细胞内相对荧光强度分别为(100.00±9.70)%、(69.90±5.50)%、(19.80±1.40)%和(0.40±0.04)%,其中pH值6.6时的相对荧光强度最高,与其他组相比差异有统计学意义(F=230.504,t=5.029~17.669,均P<0.05)。pHLIP对细胞活性没有显著影响。荷瘤裸鼠尾静脉注射Cy5-pHLIP后2 h、24 h、3 d和7 d的T/NT分别为3.42±0.27、3.00±1.23、3.38±0.62、3.51±0.37,差异无统计学意义(F=0.192,P>0.05)。离体荧光分布显示,Cy5-pHLIP在肿瘤组织内有较高浓聚,同时大肠段有大量pHLIP分布。结论pHLIP在细胞外酸性微环境下与肿瘤细胞膜的亲和力显著增加。Cy5-pHLIP能够在体内长效、可视化监测pHLIP的靶向肿瘤分布,但pHLIP在肠道的分布增加了肿瘤显像判读的复杂性。
- 张敏苗莹李婷屈骞李彪
- 关键词：肿瘤微环境氢离子浓度膜蛋白质类荧光
- 影像医学教学案例库建设被引量：17
- 2019年
- 影像医学作为临床医学中飞速发展的分支,近年来在临床医学中的重要性与日俱增,为更好地培养影像医学人才,加强影像医学[1]课程教学,提高影像专业学位研究生及规范化培养(以下简称规培)住院医师的教育质量,本研究在教学过程中采用案例教学[2],以调动学生的学习兴趣;为了统一教学案例,并使之更切合临床,除了结合影像医学传统教材,本教研室初步尝试从临床实践中提炼有趣且经典的案例,并积极鼓励影像医学专业学位研究生及规培住院医师一同参与搜集、总结,一起完成教学案例库的建设。
- 胡佳佳张淼苗莹陈刚
- 关键词：影像医学教学案例库案例教学法
- 骨髓间充质干细胞介导NIS基因及金纳米颗粒治疗乳腺癌的实验研究被引量：3
- 2020年
- 目的制备转染治疗基因早期生长反应蛋白1(Egr1)-钠碘同向转运体(NIS)并携带金纳米颗粒(AuNPs)的骨髓间充质干细胞(BMSCs),探讨Egr1对NIS表达的促进和AuNPs的辐射增敏作用。方法采用慢病毒(Lv)-Egr1-NIS-巨细胞病毒(CMV)-绿色荧光蛋白(GFP)及Lv-Egr1-GFP颗粒对BMSCs进行基因转染,制备BMSCs-Egr1-NIS及BMSCs-Egr1-GFP(对照)。通过摄碘实验验证在不同放射性浓度碘诱导下NIS基因的表达;用激光共聚焦显微镜观察BMSCs吞噬AuNPs的最佳温育时间、质量浓度;进行细胞毒性实验,分析AuNPs对BMSCs-Egr1-NIS细胞活性的影响;通过摄碘实验研究BMSCs-Egr1-NIS吞噬和未吞噬AuNPs对基因表达的影响;用细胞迁移实验验证BMSCs-Egr1-NIS在吞噬和未吞噬AuNPs的情况下对乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外靶向性;探索不同质量浓度AuNPs对131I杀伤乳腺癌细胞MDA-MB-231的辐射增敏作用。采用单因素方差分析及Dunnett t检验比较多组间数据差异。结果成功制备转染治疗基因Egr1-NIS的BMSCs(非稳转),即BMSCs-Egr1-NIS。在辐射诱导下Egr1可以增加NIS的表达,BMSCs-Egr1-NIS较BMSCs-Egr1-GFP摄碘能力提高2.5~5倍或更高;BMSCs吞噬AuNPs的最佳温育条件是AuNPs 0.20 g/L温育24 h或者0.10 g/L温育48 h;AuNPs的细胞毒性非常低,对细胞的摄碘能力和体外靶向性没有影响;BMSCs-Egr1-NIS对乳腺癌细胞MDA-MB-231具有体外靶向性;AuNPs对131I的辐射增敏实验示,各131I杀伤组与无131I的空白对照组活细胞染色吸光度(A)570差异有统计学意义(F=60.670,P<0.01),AuNPs质量浓度为0.20和0.40 g/L的实验组131I对MDA-MB-231细胞的杀伤作用高于0 g/L组,A570 nm值分别为0.87±0.05、0.41±0.07和1.39±0.11(均P<0.01)。结论BMSCs可转染治疗基因Egr1-NIS并携带AuNPs,作为靶向乳腺癌的载体,在放射性碘的作用下增强NIS基因表达,同时AuNPs可作为131I治疗的辐射增敏剂。
- 张璐郭睿郑本超苗莹张春富李彪
- 关键词：间质干细胞钠碘转运体金属纳米粒子
- 经钠碘同向转运体监测骨髓间充质干细胞向颅内脑胶质瘤迁移的实验研究被引量：4
- 2015年
- 目的通过制备携带NIS及EGFP基因的重组慢病毒并转染骨髓间充质干细胞（BMSCs），探讨NIS基因监测BMSCs向颅内脑胶质瘤迁移的可行性。方法将NIS及EGFP基因片段分别亚克隆至慢病毒载体pLVX-puro，制备慢病毒pLVX-CMV-NIS-EGFP，同时构建对照组慢病毒pLVX-CMV-O-EGFP。分离培养BMSCs，转染后经嘌呤霉素筛选，得到稳定干细胞株BMSCs-NIS-EGFP及对照组干细胞株BMSCs-EGFP。Westernblot分析NIS蛋白在细胞中的表达。通过摄碘实验、NaClO4抑制实验验证NIS蛋白的功能。制备裸鼠颅内脑胶质瘤模型，经尾静脉注入BMSCs-NIS-EGFP，24h后行125^ImicroSPECT显像，观察N1S作为报告基因监测BMSCs-NIS-EGFP向颅内脑胶质瘤迁移的情况。结果成功构建并制备重组慢病毒pLVX-CMV-NIS-EGFP及pLVX-CMV一0-EGFP，完成BMSCs的分离培养。病毒转染经嘌呤霉素筛选得到稳定干细胞株BMSCs-NIS-EGFP及BMSCs-EGFP。Westernblot显示NIS基因在BMSCs-NIS-EGFP中大量表达．而在BMSCs-EGFP中无表达。细胞摄碘实验显示BMSCs-NIS-EGFP细胞具有摄碘功能，30min摄碘峰值是对照组BMSCs．EGFP细胞的近10倍，且其摄碘可被NaClO4显著抑制。成功制备裸鼠脑胶质瘤模型，面crosPEcT显像显示颅内脑胶质瘤部位有明显的125^I放射性摄取增高。结论重组慢病毒pLVX-CMV-N1S．EGFP可使NIS基因在BMSCs中表达并介导125^I的摄取，NIS基因可有效监测BMSCs向颅内脑胶质瘤的迁移，这为开展以BMSCs为载体、由NIS介导的脑胶质瘤基因靶向治疗奠定了基础。
- 石朔张敏郭睿苗莹李彪
- 关键词：神经胶质瘤钠碘转运体发射型计算机单光子
- 双启动子杆状病毒介导131I肿瘤靶向治疗的实验研究
- 2014年
- 目的构建由人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的N1S基因以及由早期生长应答因子1（Egr1）启动子调控的人纤溶酶原Kringle5（K5）基因的双启动子重组杆状病毒载体，探讨同时靶向肿瘤细胞与血管内皮细胞的基因治疗模式的可行性。方法将hTERT启动子和N1S基因片段以及Egr1启动子和麟基因片段分别亚克隆至杆状病毒载体，经草地贪夜蛾卵巢细胞（Sf9）包装并扩增得到重组杆状病毒（Bac—hTERT-N1S—Egr1-K5），同时将CMV启动子调控的重组杆状病毒（Bac—CMV-NIS—Egr1-K5）以及不含NIS基因或不含硒基因的重组杆状病毒（Bac—hTERT-O—Egrl-K5、Bac-hTERT-NIS—Egr1-0）作为对照组。采用荧光定量PCR及Westernblot分析NISmRNA和蛋白在人宫颈癌细胞HeLa中的靶向表达，以及131I辐射对K5mRNA和蛋白的表达调控。通过摄碘实验、NaClO4抑制实验以及细胞增殖抑制实验验证NIS蛋白的功能及由其介导的131I抑瘤作用。通过细胞凋亡实验评估K5蛋白对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的促凋亡作用。统计学检验采用方差分析。结果成功构建重组杆状病毒Bac—hTERT-NIS—Egr1-K5。荧光定量PCR及Westernblot显示肿瘤特异性启动子hTERT介导的NIS基因仅在HeLa细胞中有表达，而在正常肺纤维细胞MRC5中无表达。131I可以调控辐射敏感启动子Egr1下游您基因的转录和翻译。细胞摄碘实验显示Bac-hTERT-NIS—Egr1-K5感染的HeLa细胞摄碘增加了5．6倍，与未加NaClO4组比，其摄碘能被NaClO4显著抑制（F=199．296，P〈0．05）。131I对Bac—hTERT-NIS—Egr1-K5感染的HeLa细胞的抑制效果明显，细胞存活率仅为38．3％。Bac—hTERT-NIS—Egrl一K5感染的HUVEC细胞在131I照射下的凋亡率（30．8％）显著高于Bac．hTERT-NIS—Egr1-0组和未加病毒组（11．2％和10．9％，F=19．926、45．409，均P〈0．05）。结论重组杆状病毒Bac-hTERT-NIS—Egrl．K5可使NIS基因在肿瘤细胞�
- 张敏郭睿石朔苗莹徐昊平李彪
- 关键词：末端转移酶钠碘转运体碘放射性同位素
- 氯化钴诱导心肌细胞化学性缺氧HIF-1α表达的研究被引量：9
- 2013年
- 目的：观察不同浓度的氯化钴（CoCl2）对H9C2心肌细胞的影响及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法：用100、300、600、900、1200μmol／L的CoCI2处理H9C2心肌细胞，建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型，分别于12、18、24、36、48h用Hoechst33342细胞核染色法检测心肌细胞凋亡：CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率；确定最佳诱导浓度600μmol／L后，分别于0、3、6、9、12、18、24、36、48h采用蛋白印迹法检测缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白的表达；确定最佳诱导时间后，用蛋白印迹法检测100、300、600、900、1200μmol／LCoCl2处理H9C2心肌细胞12h后HIF-1α蛋白的表达情况。结果：在600～1200μmo1／L浓度范围内，CoCl2呈剂量依赖性地抑制H9C2心肌细胞的存活。600μmol／LCoCl2诱导12h后H9C2心肌细胞产生明显凋亡．诱导12～48h范围内．12h时H9C2心肌细胞表达的HIF-1α蛋白最高：100～1200μmoI／LCoCl2诱导H9C2心肌细胞12h．其中600μmol／LCoCl2诱导时H9C2心肌细胞表达的HIF-α蛋白最高。结论：CoCl2诱导H9C2心肌细胞化学性缺氧的最佳浓度为600μmol／L．此时最佳时间为12h。
- 石朔王利华郭睿张敏苗莹张淼李彪
- 关键词：氯化钴化学性缺氧缺氧诱导因子1ΑH9C2心肌细胞
- miR-143靶向调控己糖激酶-2治疗碘难治性分化型甲状腺癌的分子影像研究
- 苗莹郭睿张敏石朔李彪
- 重组HIF—1α及NIS慢病毒表达载体的构建及功能鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建肌凝蛋白轻链-2（MLC-2v）启动下HIF-1α及人NIS慢病毒真核表达载体，探讨外源基因在心肌细胞中的特异性表达和NIS作为报告基因的可行性。方法应用基因重组技术构建慢病毒（Lv）-延长因子（EF）1-HIF-1α-内部核糖体进入位点（IRES）-NIS及Lv-MLC-HIF-1α-IRES-NIS慢病毒表达载体。对重组质粒进行酶切、测序鉴定后，采用脂质体转染法将重组质粒转入Hela细胞。细胞免疫荧光及Westernb1a分别验证HIF-1α及NIS蛋白在细胞中的定位及定量表达；制备重组病毒，分别以不同的感染复数（MOI）感染H9C2大鼠心肌细胞、NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞和L6大鼠骨骼肌成肌细胞，Westernb1a确定最佳MOI并验证MLC·2v启动子的特异性；分别行H9C2细胞动态摄碘和NaClO4抑制实验。采用两样本t检验分析数据。结果成功构建Lv-EFl-HIF-1a-IRES-NIS及Lv-MLC-HIF-1α-IRES-NIS慢病毒表达载体。2种质粒分别转染Hela细胞，免疫荧光显示HIF-1α蛋白表达于胞质，NIS蛋白表达于胞膜；Westernb1a显示EFl启动下2种蛋白质的表达量多于MLC-2v启动下相应表达。Westernb1a蛋白检测后测定蛋白灰度值，阳性对照组NIS及HIF-1α灰度值分别为69-8和71-9，EF1启动下分别为109-4和92-7，MLC-2v启动下分别为141-9和132-4。Lv-MLC-HIF-1α-IRES-NIS病毒感染H9C2细胞，MOI为20时NIS蛋白表达最高，为最佳MOI。2种病毒以MOI为20分别感染H9C2、NIH-3T3及L6细胞，Westernb1a显示EF1启动下NIS蛋白在3种细胞中均有表达，灰度值分别为23.4、29.8和28.6，相差较小。MLC-2v启动下仅H9C2细胞中有大量NIS蛋白表达，NIS蛋白在H9C2、L6及NIH-3T3细胞的灰度值分别为157.9、178.8和2173。H9C2细胞的摄碘高峰时间为40min，峰值为4287.2计数·min-1，是阴性对照组（254.g计数·min-1）的16.85倍（t=5.34，P〈0.01）。摄碘可被NaC国O4抑制，抑制率达85.5％（t=21.3，P〈0.01）。结论MLC-2v可启动治疗基因HIF
- 石朔郭睿王利华张敏张淼苗莹李彪
- 关键词：缺氧诱导因子1Α亚基碘转运体
- 钠碘同向转运体慢病毒介导188Re靶向治疗宫颈癌的实验研究
- 张敏石朔郭睿苗莹李彪
