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肖艳萍: 作品数：13 被引量：83H指数：4; 供职机构：上海市儿童医院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划上海市现代生物与新药产业发展基金上海市卫生局青年科研基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生更多>>

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应用荧光原位杂交检测人凝血因子Ⅸ在转基因小鼠染色体上的整合被引量：13: 2002年; 应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4 代的整合情况。阳性转基因小鼠 98%～ 10 0 %的中期分裂相 ,85 %～ 94%的间期核出现杂交信号 ;阴性对照小鼠 10 0 %的中期分裂相、95 %～ 96 %的间期核未出现杂交信号。结果表明 ,该FISH实验条件能对转基因整合位点进行高效特异检测。本文分析的两家系转基因小鼠均为单位点整合 ,但整合位点不同。各家系内F1到F4 代的转基因小鼠均可检出整合染色体 ,且整合位点相同 ,表明外源基因稳定整合并遗传给后代。; 肖艳萍奚鹰黄文英黄英; 关键词：荧光原位杂交转基因小鼠染色体整合位点

转基因小鼠中外源基因遗传及表达稳定性的研究被引量：6: 2002年; Two transgenic mouse strains , in which the expression of human factor IX (hFIX) in the milk were different significantly, were bred, and the foreign gene integration as well as the content of hFIX in the milk were detected by PCR, Southern blot, FISH and ELISA, respectively. The results showed that approximately 50% offsprings were transgenic positive. Foreign gene integrated in mouse chromosomes was intact. The hFIX expression of each mouse in the same strain was different, the content of hFIX in the milk was (43.32±5.41)μg/mL in FIX-33 transgenic strain and (1.16±0.45)μg/mL in FIX-124 transgenic strain. Meanwhile, the hFIX gene expression between the two strains was different remarkably (P<0.01). We conclude that the characteristics of inheritance and expression in the founder were able to be transferred to their offsprings stably.; 颜景斌肖艳萍方彧聃奚鹰黄文英黄英; 关键词：转基因小鼠外源基因

人/山羊造血干细胞嵌合模型的分子检测被引量：1: 2002年; 目的　使用分子生物学技术对人 /山羊造血干细胞嵌合模型进行检测。方法　从 11只胚胎期移植了人造血干细胞的山羊外周血中分别抽提DNA和总RNA ,然后分别对 11只山羊DNA进行人CD3 4 基因、GPA基因、SRY基因的PCR扩增 ,对其中 5只山羊的人CD3 4 基因及另 6只山羊的GPA基因表达进行了RT PCR检测 ,并用人α 微卫星序列片段作为探针对 8只实验山羊DNA进行了Southernblot杂交 ,同时还用人Y染色体探针进行荧光原位杂交 (FISH)。结果　经PCR检测 ,所有 11只实验山羊的DNA中均可扩增出人CD3 4 基因和GPA基因 ,5只实验山羊的DNA中可扩增出人SRY基因。South ernblot、RT PCR和FISH的结果亦均显示阳性。结论　通过分子检测证实人造血干细胞已在山羊体内存活。用该方法对人 /山羊造血干细胞嵌合模型进行检测是可行的。; 陈美珏颜景斌方彧聃任兆瑞肖艳萍黄淑帧; 关键词：造血干细胞分子检测

外源基因在转基因小鼠中整合状况的分析被引量：1: 2006年; 目的研究外源基因在转基因小鼠及其家系中的整合状况。方法采用PCR、定量PCR和荧光原位杂交(FISH)的方法对原代转基因小鼠中外源人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因的整合和嵌合情况进行分析。使用PCR、直接测序法鉴定整合的外源基因多拷贝的连接方向和连接方式。结果7个家系中F0-8、F0-10和F0-11的后代中阳性个体比例明显低于50%,3个原代小鼠DNA中hFⅨ基因拷贝数分别只有子代中的66.2%、18.8%和28.3%。F0-11小鼠各脏器中嵌合比差异极大,且未见胚系特异性分布。不同个体间整合拷贝数差异极大,最少的F0-69为单拷贝,最多的F0-10有43个拷贝。而整合位点分析发现外源基因在随机分布中仍呈现一定的趋向性。PCR和测序结果证明所有小鼠中外源基因多拷贝均为头尾连接,连接的机制以粘性末端介导的连接为主,F0-13中还存在同源序列配对、断裂、修复介导的头尾连接。结论在整合有hFⅨ基因的转基因小鼠中多拷贝外源基因多以粘性末端介导的头尾连接方式整合在染色体的某些特定区域。; 颜景斌朱怡文肖艳萍王舒任兆瑞黄淑帧曾溢滔; 关键词：转基因小鼠外源基因拷贝数嵌合体

应用荧光原位杂交分析移植山羊体内的人源细胞被引量：2: 2003年; 目的应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)分析人造血干细胞(human hematopoietiestem cell,hHSC)经宫内移植至山羊体内后人源细胞的存在、比例及其动态变化。方法用人特异17号染色体卫星DNA探针对13头移植山羊进行间期FISH(interphase FISH,IFISH)分析,并用人男性特异Y染色体卫星DNA探针对其中2头移值人男性HSC的山羊进行IFISH分析。标本采用外周血细胞滴片、骨髓涂片和肝脏组织印片。结果在13头移植山羊中,11头山羊体内有人源细胞存在,其中2头为人男性细胞,证实这些山羊为人/山羊异种移植嵌合体;人源细胞比例随山羊月龄递减,最长已存活21个月;所检测月龄段的移植山羊外周血、骨髓和肝脏组织中人源细胞比例小于1‰,但其中2头山羊肝脏组织中人源细胞集中一处,局部比例高达207.92‰和392.41‰。结论 FISH检测出人源细胞能在山羊体内存在并长期存活,表明山羊是经宫内移植hHSC的合适受体;人源细胞在外周血和骨髓中比例低,而在肝脏组织局部比例高,提示山羊肝脏组织局部内环境适于人源细胞存活、增殖和分化。; 肖艳萍陈美珏盛敏巩芷娟王舒黄淑帧; 关键词：荧光原位杂交山羊

红系特异的GFP基因在转基因小鼠中的整合和表达被引量：6: 2004年; 应用荧光定量PCR技术对由位点控制区LCR的HS2元件和 β 珠蛋白基因启动子指导的红系特异表达绿色荧光蛋白 (GFP)基因的转基因小鼠中外源基因拷贝数进行测定 ,使用荧光显微镜和流式细胞仪检测小鼠外周血中GFP的表达水平 ,并运用荧光原位杂交技术 (FISH)确定了其中两只转基因小鼠中外源基因的整合位点 ,结果表明 :在转基因小鼠中外源基因的拷贝数各不相同且相差较大 ,而且拷贝数与GFP基因的表达量之间未呈现出相关性 ;FISH分析确定出两只转基因小鼠的外源基因整合于不同的染色体上 ;; 颜景斌肖艳萍陈美珏黄淑帧曾溢滔; 关键词：荧光原位杂交转基因小鼠拷贝数外源基因

干细胞在异种移植动物体内的归巢、分化及肝组织损伤修复的研究: 黄淑帧曾凡一陈美珏巩芷娟钱晖胡伟任兆瑞王舒张艳颜景斌王娟肖艳萍王墨林黄文英盛敏; 简要技术说明及主要技术性能指标：国家“863”计划项目（基金编号：2002AA216091）。　　干细胞移植是一种对多种疾病有效的治疗方法，但是对于干细胞移植后在体内的生物学行为所知甚少，特别是由于难以寻找到合适配型的供...; 关键词：; 关键词：干细胞分化异种移植

间期荧光原位杂交技术检测人/山羊嵌合模型被引量：1: 2003年; 目的　建立一种高度灵敏特异的间期荧光原位杂交 (interphasefluorescenceinsituhybridiza tion ,IFISH )技术 ,以检测人 /山羊嵌合模型中低比例的人细胞。方法　采用人特异Y染色体卫星DNA探针CEPY和 17号染色体卫星DNA探针p17H8对两头移植人男性造血干细胞 (hematopoieticstemcell,HSC)的人 /山羊嵌合模型、1头正常阴性山羊和 1名正常人男性的外周血进行IFISH分析。为评价FISH检测效率的正确性 ,将正常人男性与正常阴性山羊细胞按 1/10 0、1/5 0 0和 1/10 0 0混合进行IFISH分析。并确定一套信号计数规则 ,以保证方法稳定可靠。结果　人 /山羊混合细胞中人细胞阳性率与原比例相近。人细胞阳性率平均值为正常人男性 98 60 % (CEPY)和 10 0 0 0 % ( p17H8)、正常阴性山羊为 0、人 /山羊嵌合模型为 0 .2 3 % (CEPY)和 0 11% ( p17H8)。结果表明人 /山羊嵌合模型中有低比例的人细胞存在 ,且为男性细胞。结论　本研究建立的IFISH技术高度灵敏特异 ,能真实反映检测细胞的比例 ,为人 /山羊嵌合模型中低比例的人细胞检测提供了直观、灵敏、特异的途径。; 肖艳萍陈美珏盛敏杨华黄淑帧; 关键词：间期荧光原位杂交造血干细胞山羊

红系特异元件调控的GFP报道基因在不同转基因小鼠中表达行为的研究: 为了研究红系特异元件HS2或HS3及?珠蛋白基因启动子指导的GFP报道基因在不同转基因小鼠体内的表达行为,我们将本所先前研究中已经获得的带有人红系特异调控元件HS2及?珠蛋白启动子、GFP报道基因的原代转基因小鼠(命名为...; 颜景斌肖艳萍陈美珏王舒任兆瑞曾溢滔; 文献传递

红系特异表达载体在转基因小鼠中表达的研究被引量：2: 2003年; 为在个体水平上研究珠蛋白基因位点控制区的HS2,HS3及HS2-HS3元件对β-珠蛋白基因的时空表达调控作用,选择本实验室构建的CMV/GFP,HS2ALL,HS3ALL,HS23ALL等4种重组载体,经限制性酶切及两步纯化,得到了5种重组DNA片段:CMV/GFP,HS2/GFP,CMV/HS2/GFP,HS23/GFP,HS3/GFP,并用显微注射技术获得转基因小鼠,用流式细胞仪分析转基因各组织中绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,结果表明HS2元件及1.7 kb的β-珠蛋白启动子足以调控β-珠蛋白基因的组织特异性表达。此外,在不同的转基因小鼠中,GFP的表达虽有明显的个体差异,但综合分析比较可以看出,HS2与HS3元件在调控β-珠蛋白基因表达方面,其增强子作用基本相当,且两者显示出显著的协同作用。; 贾春平颜景斌肖艳萍方彧聃黄淑帧曾溢滔; 关键词：转基因小鼠 Β-珠蛋白基因基因表达绿色荧光蛋白

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