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人分化抑制因子Id-2基因在大肠埃希氏菌中的高效表达及其多克隆抗体的制备被引量：1: 2009年; 目的在大肠杆菌中表达人Id-2与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗人Id-2的多克隆抗体。方法从乳腺癌组织中提取总RNA,用RT-PCR扩增出Id-2基因的编码序列,克隆至表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-Id-2蛋白,SDS-PAGE分析表达产物。通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-2融合蛋白,Western-Blot检测重组抗原的免疫原性,并以此为抗原制备多克隆抗体。结果经PCR、酶切、测序鉴定证明,Id-2基因已正确克隆至pGEX-6P-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量40000的GST-Id-2融合蛋白。Western-Blot、ELISA和琼脂双向扩散实验鉴定所制备的多克隆抗体可以与GST-Id-2特异性反应。结论Id-2基因在在大肠杆菌中的成功表达及制备的多克隆抗体,为检测Id-2及其在各种组织中的表达提供了一种检测方法,也为分析Id-2分子结构及抗原表位奠定了基础。; 童铁钢林燕穆丹梅白宇杨木蕾郑敏吴东来; 关键词：基因表达多克隆抗体

鸡主要组织相容性复合体/肽四聚体的构建方法及其产品: 本发明公开了一种鸡主要组织相容性复合体/肽四聚体的构建方法及由该方法得到的产品。本发明在大量表达的重组BF2－BSP、重组Chβ2m以及合成多肽的基础上，重折叠获得了BF2/肽单体复合物，进而在此基础上进行生物素化，制备...; 吴东来刘光亮王群肖一红童铁钢白宇张维军徐树兰张文龙殷喆; 文献传递

赤羽病病毒囊膜糖蛋白G1基因片段重组杆状病毒表达载体的构建及表达: 赤羽病病毒,又称阿卡斑病毒(Akababe virus,AKAV)是属于布尼病毒科布尼病毒属辛波病毒群的虫媒病毒,它可引起牛、绵羊、山羊流、早、死产及先天性关节弯曲和积水性无脑症 (Arthrogryposis-Hydr...; 徐树兰童铁钢白宇刘光亮肖一红王群张维军吴东来; 关键词：基因片段重组杆状病毒囊膜糖蛋白; 文献传递

猪MHC-Ⅰa生物素化序列融合基因的构建、表达与纯化: MHC-I 类分子肽四聚体复合物技术,就是将基因工程制备的 MHC-I 类分子的轻、重链在体外与 T 淋巴细胞特异性抗原肽组装成可以特异、高效和直接定量检测特异性 CTL 活性的肽四聚体复合物检测系统,目前国内关于畜禽动...; 肖一红刘光亮王群童铁钢白宇孟庆文吴东来; 关键词：MHC-I 克隆纯化; 文献传递

马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及其抗病毒活性的鉴定: γ-干扰素主要由激活的 T 细胞和 NK 细胞产生,是机体内具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的重要细胞因子。内源性 IFN-γ水平的高低在很大程度上可以反映机体的细胞免疫状态,对样本中的 IFN-γ进行定量分析,在免疫机...; 白宇童铁钢刘光亮肖一红王群徐树兰张维军吴东来; 关键词：Γ-干扰素原核表达抗病毒活性; 文献传递

含禽源启动子的禽流感病毒核蛋白表达载体的构建及其免疫原性的检测: 为了研究禽流感病毒核蛋白在鸡体内所引起的免疫反应,将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中,经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP,将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核...; 王群刘光亮肖一红童铁钢白宇张维军徐树兰吴东来; 关键词：禽流感核蛋白真核表达载体血清抗体; 文献传递

检测马白细胞介素-18双抗体夹心ELISA方法的建立被引量：5: 2009年; 目的:建立检测马白细胞介素-18(equine interleu-kin-18,EIL-18)的双抗体夹心ELISA,为马传染病的免疫学研究提供新方法。方法:将识别不同表位的EIL-18的2株单克隆抗体(mAb)B1G1和S6A3纯化后,利用生物素标记试剂盒对B1G1株mAb进行标记,以重组马白细胞介素-18(rEIL-18)为捕获抗原进行ELISA检测来建立EIL-18双抗体夹心ELISA。结果:经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓度为4mg/L,检测抗体的工作效价为1∶2000。建立的方法可检测马血清中的EIL-18,与猪、牛和羊血清中的IL-18不发生交叉性反应,此方法检测敏感度达到15ng/L,特异性良好。结论:成功建立了EIL-18的双抗体夹心ELISA,为马细胞免疫学研究提供了方法,也为下一步EIL-18ELISA试剂盒的商品化开发奠定了坚实基础。; 童铁钢白宇张维军王群刘光亮徐树兰吴东来; 关键词：单克隆抗体夹心ELISA

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白CTL细胞表位及其应用: 本发明公开了猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白CTL细胞表位及其应用。本发明将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株M蛋白基因与小鼠泛素基因进行融合并克隆构建DNA疫苗，同时构建了表达M蛋白的WR株牛痘病毒的重组病毒；按照Prim...; 吴东来张维军刘霓红白宇林燕童铁钢王群杨涛; 文献传递

马γ-干扰素单克隆抗体的制备及细胞免疫评价方法的研究: γ-干扰素(IFN－γ)是机体内一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的重要细胞因子。研究表明，内源性IFN－γ水平的高低在很大程度上可以反映机体的细胞免疫状态，因此对样本中的IFN－γ进行定量分析对免疫机制研究、免疫功能...; 白宇; 关键词：单克隆抗体细胞免疫; 文献传递

马白细胞介素18成熟蛋白(mEIL-18)基因在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化被引量：5: 2007年; 用RT-PCR从经ConA刺激的马外周血单个核细胞(PBMC)中扩增出马白细胞介素18(Equine interleu-kin-18,EIL-18)前体蛋白(precursor EIL-18,pEIL-18)基因的cDNA,然后克隆至载体pCR2.1-TOPO中,鉴定并命名为pCR2.1-pEIL-18。自pCR2.1-pEIL-18中扩增马白细胞介素18成熟蛋白(mature EIL-18,mEIL-18)基因,并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中。将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达并纯化其表达产物。结果表明,mEIL-18基因全长474 bp,含1个开放阅读框,编码157个氨基酸的成熟蛋白;表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在,经SDS-PAGE和Western-blot分析,重组蛋白相对分子量约为20 ku,且具有免疫生物学活性。mEIL-18基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下采用Ni+亲和层析纯化方法获得了高纯度的重组mEIL-18,为探究马白细胞介素18的生物学活性及其应用奠定了基础。; 童铁钢刘光亮白宇肖一红王群李少英孟庆文吴东来; 关键词：克隆纯化

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