李丹
- 作品数：5 被引量：45H指数：3
- 供职机构：复旦大学附属华山医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 血浆外泌体样小体免疫调节作用的初步研究被引量：3
- 2010年
- 目的 鉴定血浆中外泌体（exosomes）样小体,研究其生物学特性及免疫调节作用.方法 利用多次超速离心结合膜超滤的方法,从健康供者血浆中分离纯化外泌体样小囊泡.采用透射电镜从形态学方面鉴定此囊泡为外泌体,用流式细胞术检测其生物学特性.通过磁珠分选从健康供者外周血单个核细胞中分选CD4^＋T细胞及CD4^＋CD25^＋CD127^low调节性T细胞（Treg）,外泌体样小体与CD4^＋T细胞或Treg细胞共孵育,通过增殖和凋亡实验分析其免疫调节作用.采用流式细胞术检测外泌体样小体与Treg细胞共孵育后,Treg细胞中Wnt经典信号转导通路中磷酸化β-catenin的变化.结果 人血浆中的外泌体样小体与外泌体在形状和大小方面均相似,表达外泌体的标志性蛋白CD63和CD81,还表达MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD86等.血浆外泌体样小体与CD4^＋T细胞孵育后能抑制CD4^＋T细胞的增殖,且呈剂量依赖性.血浆外泌体样小体与Treg细胞孵育后,Treg细胞的生存时间延长,培养14 d后与血浆外泌体样小体共孵育的Treg细胞存活率为57.07%,而对照Treg细胞存活率为30.91%.RT-PCR检测出Treg细胞有Frizzled受体FRZ2、3、4及LRP6 mRNA表达（相对灰度值分别为48.50、34.84、23.85、49.73）,而血浆中外泌体样小体携带Wnt分子.与血浆外泌体孵育后,Treg细胞磷酸化β-catenin平均荧光强度降低（由20.06±2.99降低到12.41±2.08）,抗凋亡基因bcl-2明显上调（相对灰度值由0.45上调到84.97）.结论 血浆中存在外泌体样小体,表达免疫调节分子,并且体外能够抑制活化的CD4^＋T细胞增殖,通过Wnt信号转导途径延长Treg细胞生存时间.
- 马越娥任亚娜杨洁李丹郭陈智郭娟倪兵范华骅
- 关键词：CD4^+T细胞TREG细胞WNT信号转导途径
- 血浆外泌体样小体对巨噬细胞Wnt5A—Ca2＋通路影响的初步研究被引量：3
- 2011年
- 目的研究血浆中外泌体（exosomes）样小体对正常人巨噬细胞免疫调节作用的影响。方法采用超速离心结合膜过滤的方法，从健康献血者血浆中分离纯化外泌体样小体。通过分离健康献血者外周血单个核细胞，贴壁培养并分离巨噬细胞。外泌体样小体与巨噬细胞共孵育后，采用流式细胞术、RT—PCR、Westernblot法分别检测巨噬细胞胞质Ca^2＋、相关基因和蛋白的变化。结果外泌体样小体与巨噬细胞孵育一段时间后，巨噬细胞胞质内Ca2＋平均荧光强度上调；外泌体样小体对巨噬细胞的促炎因子如IL-1β、IL-6、TNF-α的表达有促进作用，在共培养2h时，IL-1β、TNF-α基因表达达到高峰，分别比对照组表达上调0．85倍和1．69倍，而IL-6基因表达上调水平在共培养8h时达到高峰，是对照组的3．7倍，而对抑炎因子IL-10的表达具有抑制作用；同时发现巨噬细胞表达Wnt5A受体Frizzled5，但是外泌体样小体对其基因表达没有明显影响；外泌体样小体能使钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ（CaMKⅡ）发生磷酸化。结论血浆外泌体样小体能上调巨噬细胞炎症因子基因的表达，并且可能通过活化巨噬细胞的Wnt5A—Ca2＋信号通路促进炎性细胞因子的分泌。
- 李丹任亚娜杨洁杨懿铭李春燕谢如锋范华骅
- 关键词：巨噬细胞
- 鞘氨醇-1-磷酸对人耐受型树突状细胞功能影响的初步研究
- 2011年
- 目的探讨鞘氨醇-1-磷酸(S1P)对外周血单核细胞诱生的人耐受型树突状细胞(tDC)免疫学功能的调控作用。方法 RT-PCR和流式检测细胞表型以及S1P受体(S1PR s)的表达;加入S1P处理tDC,检测其对tDC表型、细胞因子表达以及信号蛋白细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化的影响。结果 tDC高表达DC标志CD209、共刺激分子CD80、CD86和成熟标志CD83;炎性细胞因子mRNA的表达低于未成熟DC,而抑炎性细胞因子、Fas-L和IDOmRNA的表达均高于iDC;tDC表达S1P的受体,S1P与受体相互作用后可引起信号蛋白ERK的磷酸化,上调tDC抑炎性细胞因子以及Fas-L mRNA的表达,对炎性细胞因子的表达无影响。结论 tDC表达S1P受体1、2、5,S1P信号活化后可上调抑炎性细胞因子mRNA的表达,而其表型和炎性细胞因子的分泌无明显变化,有利于tDC免疫耐受功能的发挥。
- 李春燕杨洁任亚娜李丹杨懿铭谢如锋范华骅
- 关键词：白细胞介素10
- 巨噬细胞的分类及其调节性功能的差异被引量：37
- 2011年
- 巨噬细胞在固有免疫和适应性免疫反应中具有重要的作用,它可将加工后的抗原提呈给相应的T细胞,活化后的T细胞通过细胞膜上的分子或分泌的细胞介素进一步活化巨噬细胞。此时的巨噬细胞吞噬杀伤能力大大加强,并释放各种活性物质,因此巨噬细胞是主要的炎性反应调节细胞。巨噬细胞可分为经典活化和选择性活化的巨噬细胞,其在炎性反应过程中分泌不同的细胞因子、趋化因子等,然后间接或直接地参与各种炎症性疾病的反应过程。该文介绍了不同型巨噬细胞在胰岛素抵抗、HIV感染和肿瘤等疾病中的调节功能。
- 李丹任亚娜范华骅
- 关键词：巨噬细胞细胞因子趋化因子
- β-catenin信号活化对树突状细胞功能的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨Wnt/β-catenin信号通路对树突状细胞(DC)免疫学功能的调控作用。方法用RT-PCR、免疫荧光的方法鉴定Wnt通路成员在DC中的表达情况;加入活化剂SB216763激活β-catenin信号,检测其对DC表型、细胞因子及趋化因子受体表达的影响。结果 DC表达有WNT5A配体及Wnt通路多种受体Frz1、Frz2、Frz3、LRP6以及ROR2的mRNA,免疫荧光试验也证实WNT5A分布在DC的整个胞浆。SB216763能使DC胞内的β-catenin积累,并能促进DC共刺激分子CD80、CD86和CD40表达上调,但是炎性因子和趋化因子受体的mRNA并无变化甚至变低。结论 Wnt信号通路成员广泛存在于DC内,β-catenin信号活化能引起DC表型成熟,但功能上属于1种耐受型的DC。
- 郭陈智李丹李春燕杨洁任亚娜谢如锋范华骅
- 关键词：WNT信号通路树突状细胞Β-CATENIN肿瘤免疫
