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千金藤属植物地不容和云南地不容中多糖和葡聚糖的含量测定被引量：3: 2009年; 目的千金藤属植物具有良好药用价值,许多研究表明其含有丰富的生物碱成分,但对该属植物其他成分的研究很少。对千金藤属植物非生物碱成分的组成和活性的研究,有利于更加深入地了解该属植物的药效和药理作用。方法从防己科千金藤属植物地不容Stephania epigeae H.S.Lo及云南地不容Stephania yunnanensis H.S.Lo中,采用苯酚硫酸测定法、铜试剂沉淀测定法分别测定地不容和云南地不容中的总多糖和葡聚糖的含量。结果地不容和云南地不容中分别含有25.14%,13.66%的总多糖及1.00%,0.71%的葡聚糖。结论苯酚硫酸法和铜试剂沉淀法联合使用,为该植物多糖的分离纯化及多糖成分的结构、活性研究提供可行手段。千金藤属植物的葡聚糖具有免疫促进作用,提示可对地不容的多糖成分做活性筛选研究。千金藤属植物的药用价值较高,目前对地不容的生物碱成分研究比较透彻,但对其非生物碱成分研究仍处于空白,此项研究将有助于推动其药用价值的开发。; 利奕成杨珂黄立樊化张美英王一飞; 关键词：地不容多糖葡聚糖

虎贞痛风胶囊中重金属含量的测定被引量：2: 2009年; 目的:了解国家六类新药虎贞痛风胶囊重金属含量,建立质控体系,为临床中的安全用药提供科学依据。方法:采用湿法消化法对样品进行前处理,使用ICP-AES进行重金属检测分析。结果:测出虎贞痛风胶囊中含有微量的重金属成分,结果分别是:镉(Cd)≤0.02 mg/kg,铜(Cu)≤4.2 mg/kg,铬(Cr)≤0.16 mg/kg;锌(Zn)≤1.6 mg/kg;铅(Pb)≤0.6 mg/kg。砷(As)未检出。结论:虎贞痛风胶囊含有微量重金属成分,但其含量远低于国家相关标准。对该中药制剂建立可行的重金属检测体系,是完成其安全、有效、稳定、可控目标的一个部分,也为虎贞痛风胶囊符合国际化公认标准奠定基础。; 利奕成罗勇杨珂钱垂文黄立林潮平王一飞; 关键词：重金属 ICP-AES

中试规模高效纯化重组人核苷二磷酸激酶A: 2007年; 中试规模纯化重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)。菌体高压匀浆,然后微滤去除菌体碎片,超滤浓缩,所得样品上样DEAE-sepharose Fast Flow,收集目的峰,上样Cibacron Blue 3GA Sepharose CL-4B,含ATP的缓冲液洗脱目的蛋白,超滤精制。结果表明,1500g菌体经过2次匀浆后,所得匀浆液中含NDPK47.6g,经过微滤超滤处理后,可回收目的蛋白27.3g。再经过两步柱层析及超滤精制后,最终可得纯度为96.3%的目的蛋白17.2g,总回收率为36.2%,每100g湿菌体的蛋白产率为1.15g。比较每个步骤的回收率,发现精制>亲和层析>离子交换层析>样品前处理过程。与前期报道发酵工艺联用,rhNDPK-A的纯化产量达到510mg/L。工艺简便、得率高的rhNDPK-A纯化工艺的建立为NDPK的应用开发提供了物质基础;另外,本文结果也提示,对于非分泌型重组蛋白来说,影响目的蛋白回收的最主要因素可能不是柱层析,而是样品前处理过程。; 熊盛钱垂文郭朝万黄立刘秋英张美英王一飞; 关键词：核苷二磷酸激酶纯化超滤

多角度激光散射测定重组人核苷二磷酸激酶A在溶液中的聚集状态: 2003年; 熊盛钱垂文黄立王一飞张美英李久香严玖凤王小宁张晓伟毕志刚

人重组核苷二磷酸激酶α亚基对MCF-7/S的影响被引量：2: 2003年; 软琼脂集落形成实验检测rhNDPK -α对乳腺癌细胞株MCF - 7 S集落形成率的影响 ,结果表明 ,MCF - 7 S集落形成率随rhNDPK -α浓度增高下降 ,提示rhNDPK -α可能具有抑制乳腺癌细胞株MCF - 7 S转移作用 ;MTT法检测rhNDPK -α分别联用丝裂霉素C、5 -氟尿嘧啶和千金藤碱对MCF - 7 S的增殖影响 ,结果显示 ,rhNDPK -α分别联用三种化疗物与这三种化疗药物单独作用于MCF - 7 S无明显差异 (P >0 0 5 ) ,提示rhNDPK -α对丝裂霉素C、5 -氟尿嘧啶和千金藤碱没有增敏作用。; 苏运贞王一飞张美英邢少璟钱垂文罗勇李久香熊盛黄立; 关键词：Α亚基乳腺癌细胞株增敏作用化疗药物

虎贞痛风胶囊对家兔急性关节炎的影响被引量：3: 2009年; 目的:观察虎贞痛风胶囊对尿酸钠微晶(MSU)诱导的家兔急性关节炎的影响,对该药的抗炎作用进行药效学评价并初步探讨其机制,为临床应用提供科学依据。方法:将日本大耳白兔随机分成正常对照组(con-trol)、急性关节炎模型组(AA)、不同剂量虎贞痛风胶囊治疗组(0.70 g/kg、0.35g/kg、0.20 g/kg)和痛风舒胶囊治疗组(药物对照组),各组家兔分别灌胃给予溶剂、不同剂量的虎贞痛风胶囊悬液或痛风舒胶囊悬液,每天1次,连续灌胃5 d,于末次给药后30 min,模型组和各治疗组家兔膝关节内注射MSU复制急性关节炎模型,6 h后收集关节液进行白细胞计数,并取关节滑膜组织进行病理学检查。结果:正常对照组关节液未见炎症细胞浸润,镜下观察滑膜细胞连续平整、结构层次清晰;模型组关节液白细胞计数显著高于对照组,病理学观察有急性炎症发生,表现为表面滑膜组织肿胀、坏死、结缔组织水肿、炎症细胞弥漫性浸润等;虎贞痛风胶囊和痛风舒胶囊治疗组关节液白细胞计数低于模型组(P<0.05),病理学观察镜下滑膜细胞连续平整、结构清晰,仅见少量炎症细胞浸润,其中虎贞痛风胶囊高剂量效果最好。结论:虎贞痛风胶囊的高中剂量(0.70 g/kg、0.35 g/kg)明显抑制MSU所致的家兔急性关节炎,具有良好的抗炎作用,其效果优于痛风舒胶囊。; 利奕成杨柯黄立李久香王庆端江金花罗勇王一飞; 关键词：关节炎痛风性中草药

重组人核苷二磷酸激酶A的理化性质被引量：5: 2004年; 对重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK A)进行纯化 ,并对重组产物的理化性质及在溶液中的聚合状态进行鉴定。NDPK A工程菌发酵后的菌体高压匀浆 ,然后微孔过滤、超滤浓缩 ,所得样品经DEAE阴离子交换、CibacronBlue亲和层析、分子筛层析三步纯化后 ,以SDS PAGE和RP HPLC分析纯化产物的纯度 ,RP HPLC测定酶活性。合格制品以基质辅助激光解析飞行时间质谱测定相对分子质量 (MW ) ;Edman降解法测定N末端序列 ;多角度激光散射法测定重组产物在溶液中的表观分子量。结果表明 ,rhNDPK A纯化产物的SDS PAGE纯度为 97 3% ,RP HPLC纯度为 99 2 % ;比活性为 (90 0± 10 0 )u mg ;单体相对分子质量为 170 17,与NDPK A分子量理论值相差 132。测序结果表明 ,rhNDPK AN末端缺失Met残基 ,其理论分子量为 170 17,与飞行质谱测定结果完全一致。表观分子量测定结果表明 ,rhNDPK A在溶液中形成六聚体 ,表观分子量为 10 2kD。上述结果说明 ,NDPK A重组产物具与天然产物相同的自发形成六聚体性质 ,这为NDPK A新药开发和机理研究打下了良好基础。; 熊盛钱垂文黄立王一飞张美英李久香严玖凤王小宁张晓伟毕志刚; 关键词：六聚体

50L规模中试发酵重组核苷二磷酸激酶A工程菌: 中试规模生产重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)。摇瓶培养一级种子至OD600为5.0～5.5,以10%的比例接种二级种子培养基,在7L发酵罐中培养至OD600为9.6～10.5,然后转入80L发酵罐中进行补料分批...; 熊盛钱垂文黄立刘秋英张美英王一飞; 关键词：发酵工程核苷二磷酸激酶中试纯化; 文献传递

核苷二磷酸激酶A的高效表达及其结构异构研究: 核苷二磷酸激酶nucleoside diphosphate kinase，NDPK是一种多功能蛋白，具有维持细胞内NTP浓度，调节细胞增殖、分化、发育和凋亡等多种生物学功能。在基础研究领域，研究NDPK的多能性及其调控机...; 熊盛钱垂文黄立刘秋英张美英王一飞; 关键词：核苷二磷酸激酶抗癌药物细胞增殖; 文献传递

重组人Nm23-H1/NDPK-A蛋白抗血清的制备与鉴定被引量：4: 2003年; [目的 ]通过实验 ,制备出NDPK -A蛋白的抗血清 ,为国内NDPK -A的诊断试剂盒的研究开发提供基础条件。[方法 ]重组人肿瘤转移相关蛋白Nm2 3 -H1/NDPK -A蛋白经Macro -prepDEAE阴离子交换柱层析和CibacronBlue亲和层析 ,得到了电泳纯的NDPK -A蛋白 ,以此制备抗原 ,免疫新西兰纯种兔 ,进而得到NDPK -A蛋白的抗血清。 [结果 ]ELISA法检测所制备的抗体的反应效价为 :1:40 0— 80 0。 [结论 ]westernblot试验结果证实 ,该抗血清具备较好的特异性 ,能与NDPK -A蛋白发生反应 ,可应用于NDPK -A蛋白的实验检测利临床检测。; 王一飞李海燕刘洁生张美英黄立钱垂文; 关键词：抗血清 WESTERN印迹

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黄立

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